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《傳染性胰壞死病毒雙抗體夾心 ELISA檢測方法的建立-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第44卷第4期淡水漁業(yè)2014年7月Vo1．44NO．4FreshwaterFisheriesJu1．2014傳染性胰壞死病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立張琳琳，連科迅，張英，蔣燁，姜艷萍，崔文，喬薪瑗，唐麗杰，李一經(jīng)，劉敏(1．東北農(nóng)業(yè)大學動物科學與技術學院，哈爾濱150030；2．東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，哈爾濱150030)摘要：以純化的兔抗傳染性胰壞死病病毒(IPNV)VP2重組蛋白多克隆抗體為包被抗體，抗IPNVVP2單克隆抗體為檢測抗體建立了IPNV雙抗體夾心ELISA方法。優(yōu)化反應條件為：兔抗IPNVVP2重組蛋白多克隆抗體包被濃度為1．28mL，抗IPNVVP2單
2、克隆抗體的工作濃度為1．34g／mL，酶標二抗稀釋比例為1：2000，以P／N>2，且OD>0．101494作為陽性判定標準。該方法的重復性變異系數(shù)均小于10％，與傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)、病毒性出血敗血癥病毒(VHSV)、鯉春病毒血癥病毒(SVCV)、輪狀病毒(HRV)無交叉反應。對41份虹鱒肝臟樣品分別進行雙抗體夾心ELISA和RT—PCR檢測，結果雙抗體夾心法與RT．PCR法檢測符合率為97％，表明本實驗建立的雙抗體夾心ELISA檢測方法檢測IPNV具有較高的敏感性和特異性，可用于IPNV的病原學檢測。關鍵詞：傳染性胰壞死病毒；雙抗體夾心ELISA檢測方法；單克隆抗體；
3、兔抗血清中圖分類號：$941．41文獻標識碼：A文章編號：1000—6907一(2014)04-0057-06DevelopmentofadoubleantibodysandwichELISAfordetectionofinfectiouspancreaticnecrosisvirusZHANGLin—lin，LIANKe—xun，ZHANGYing，JIANGYe，JIANGYan—ping，CUIWen，QIAOXin—yuan，TANGLi-jie，LIYi-jing，LIUMin(1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，NortheastAg
4、riculturalUniversity，Harbin150030，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，rtheastAgriculturalUniversity，rbin150030．ina)Abstract：Adouble—antibodysandwichELISA(DAS—ELISA)wasdevelopedusingpurifiedpolyclonalantibodyandmono—clonalantibody(MAb)againstviralinfectiouspancreaticnecrosisvirus(IPNV)VP'2protein
5、ascaptureanddetectoranti·body，respectively．Theoptimizedreactionconditionsincludedcoatingwith100ixL／wellofpurifiedpolyclonalantibodyatconcentrationof1．28mL，probingwiththeworkingconcentrationof1．34mLIgGfromtheMAbdilutingHRP—conjugatedantibodywiththeproportionof1：2000andjudgingwithP／N>2andOD49o=0．1
6、01494aspositivecriteria．TheDAS—ELISAwasspecificdetectionofIPNV，butnocross—reactionwithIHNV，VHSV，SVCV，HRVandinter—assaycoeficientofvariabilitywerewithin10％．Inaddition，atotalof41liversofrainbowtroutsamplesweretestedbytheI)AS—ELISAandPT—PCR．a(chǎn)ndthecoincidencewas97％betweenDAS．ELISAandPT—PCR．Thesedata
7、demonstratedthattheDAS—ELISAwasspecificandsensitive，andprovidedausefultoolfordiagnosisofIPNVinfection．Keywords：infectiouspancreaticnecrosisvirus；doubleantibodysandwichELISA；MAb；rabbitantisera傳染性胰壞死病病毒(infectiouspancreaticnec
