資源描述：
《乙型腦炎病毒雙抗體夾心elisa抗原檢測方法的建立與應用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、華中農業(yè)大學碩士學位論文乙型腦炎病毒雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立與應用姓名：梅力申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：曹勝波201206乙型腦炎病毒雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立與應用摘要乙型腦炎是由乙型腦炎病毒(JEV)感染所引起的一種危害嚴重的蟲媒性人畜共患病。該病毒主要經過擴增宿主豬和媒介昆蟲蚊子進行傳播。豬是其主要的擴增宿主和傳染源。感染后可引起母豬流產、死胎、木乃伊胎及公豬發(fā)生睪丸炎，不僅給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經濟損失，而且還嚴重威脅著人類健康。臨床準確診斷是有效防控該病的重要途徑。但由于傳統(tǒng)的病毒分離鑒定方法操作
2、復雜、難度大、周期長，而RT-PCR等分子生物學方法雖然敏感，但操作技術要求高、需要特殊儀器設備、且易出現(xiàn)假陽性，因此，簡便、準確、快速的抗原檢測方法顯得尤為迫切。本研究利用乙型腦炎病毒單克隆抗體和多克隆抗體，建立了可用于檢測豬、人和蚊子等多種臨床樣品中乙型腦炎抗原的雙抗體夾心ELISA方法，并制備了試劑盒，為乙型腦炎的臨床快速診斷提供了有效工具。具體研究內容如下：1．JEv雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立本研究制備了兔源乙型腦炎病毒多克隆抗體。在此基礎上，以已經獲得的JEVE蛋白單克隆抗體作為一抗包被酶標板，兔源JEV多克隆抗體作為二
3、抗，再加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體與二抗反應，并通過催化底物顯色以檢測樣品中是否含有JEV抗原。經過方陣滴定，確定了一抗的最佳包被濃度為5pg／mL，二抗和辣根標記抗體的最佳稀釋度分別為1：10000和1：30000。敏感性試驗表明，該方法的敏感性可達到104PFU／mL，并且該方法不與其它常見的豬流行病病毒發(fā)生交叉反應，對5份樣品進行重復性檢驗的變異系數(shù)分別為7．60％、6．70％、6．70％、7．60％、4．40％，均小于10％，將包被的酶標板置于37"C連續(xù)5天，標準陰陽性對照的OD值均沒有發(fā)生明顯變化。以上結果說明，本研究所建立
4、的JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法具有敏感性高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點：2．JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的臨床初步應用分別用RT-PCR方法和制備的雙抗體夾心ELISA試劑盒對60份臨床樣品進行檢測(包括16份人腦脊液樣品、20份蚊子樣品、24份豬腦樣品)，并將二者檢測結果進行對比。結果表明：與RT．PCR方法相比，JEV雙抗體夾心ELISA檢測方法的陽性符合率為70％，陰性符合率為100％，總符合率可達到90％。說明本研究建立的JEvELISA抗原檢測方法與RT-PCR方法具有較高的符合率，可以作為JEV臨華中農業(yè)大學20
5、12屆碩士研究生學位論文床快速檢測的有效工具。關鍵詞：乙型腦炎；乙型腦炎病毒；單克隆抗體；多克隆抗體；ELISAII乙型腦炎病毒雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立與應用AbstractJapaneseencephalitis(JE)isaseriouszoonosescausedbytheJapaneseencephalitisvires(JEV)whichisamosquito—bornepathogenofthefamilyFlavivirus．Ingeneral，JEVismaintainedinatransmissioncycle
6、betweenamplifierswineandvectormosquitoes．Asallimportantpathogeninswine，itinducesterribleconsequencesinSOWSreproductionanddeathinpiglets．Atthesametime，italsothreatenspublichealth．SoaccurateclinicaldiagnosispavestheimportantwayinpreventingandcontrollingJEinfectioneffectively．
7、However,theapplicationofseveraldevelopedlaboratorymethodsforthedetectionofJEVantigens，suchasvirusisolation，RT．PCR，arelimitedbytheirrequirementsoflaboratoryoperations，skilledtechniciansandspecialfacilities．Therefore，itisimportantandurgenttoestablishamethodfordetectingJEVanti
8、gensimply,exactly,effectiyely．Adouble-antibodysandwichELISAmethodandanELISAkitford
