馬動(dòng)脈炎病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立-論文.pdf

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1、第36卷第8期中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)Vo1．36．No．82014年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．08．16馬動(dòng)脈炎病毒雙抗體夾心ELISA檢測方法的建立胡月1,2，戚亭，趙世華，關(guān)平原，王曉鈞(1．內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院／農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疾病臨床診療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古呼和浩特010018；2．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室／馬傳染病與慢病毒創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)，黑龍江哈爾濱1500

2、01)摘要：為建立馬動(dòng)脈炎病毒(EAV)的快速檢測方法，本實(shí)驗(yàn)以EAVN蛋白單克隆抗體(MAb)2B9為捕獲抗體，辣根過氧化物酶(HI)標(biāo)記的EAVN蛋白MAb2B3(HRP．2B3)為檢測抗體，建立EAV雙抗體夾心ELISA檢測方法。結(jié)果顯示，該方法的最佳工作條件為：MAb2B9的包被濃度為2~g／mL，HRP一2B3的工作濃度為2~g／mL，以O(shè)D45onm0．124為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。該方法對馬傳染性貧血病毒、馬皰疹病毒I型和IV型、馬流感病毒等均無交叉反應(yīng)，特異性好；最低檢出限為病毒標(biāo)準(zhǔn)品200倍稀釋(1OTCID。)，敏感性

3、高。3次重復(fù)試驗(yàn)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(R21均大于0．997。本實(shí)驗(yàn)建立的EAV雙抗體夾心ELISA方法具有特異性好、敏感性高等優(yōu)點(diǎn)，適于EAV的快速檢測。關(guān)鍵詞：馬動(dòng)脈炎病毒；雙抗體夾心ELISA；單克隆抗體；檢測中圖分類號：$852．65文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1008．0589(2014)08．0651-04DevelopmentofadoubleantibodysandwichELISAfordetectionofequinearteritisvirusHuYue，一，QITing2，zHA0Shi-hua，GuANP

4、ing-yuan，NGXiao-jun(1．KeyLaboratoryofClinicalDiagnosisandTreatmentTechnologyinAnimalDisease，MinistryofAgriculture，CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMongoliaAgricultrualUniversity，Hohhot010018，China；2．DivisionofLivestockInfectionsDisease，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBi

5、otechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：TodevelopamethodforEAVdetection，adouble—antibodysandwichELISA(DAS—ELISA)wasdevelopedusingMAb2B9againstEAVnucleoproteinascaptureantibodyandMAb2B3conjugatedtoH

6、RP(HRP一2B3)asdetectingantibodyundertheoptimizedreactionconditionsofcoatingwithMAb2B9at2ixg／well，detectingwithHRP一2B3at2~g／wellwithacutoffvalueof0．124(OD45m．ThespecificitytestshowntheDAS·ELISAwasspecificallydetectedEAVwithadetectionlimitof10。TCID5o，butnocrossing—reacti

7、ontoequineherpesvirusI，equineherpesvirusIV，equineinfluenzavirusandequineinfectiousanemiavirus．Inaddition，thestandardcHIveofEAVquantificationbytheDAS—ELISAhadlinearcorrelationwiththreetimesrepeatedtestsandtheRwereabove0．997．TheseresultsdemonstratedthattheDAS—ELISAmetho

8、dwasspecificandsensitive．whichhadapotentialtobeapplicablefortheEAVdetectioninhorse．Keywords：equinearteritisvirus；double—anti