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《大鼠脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞表型的研究-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、海南醫(yī)學(xué)2014年5月第25卷第9期HainanMedJ，May2014，Vo1．25，No．9doi：10．3969／j．issn．1003—6350．2014．09．0488·論大鼠脂肪干細(xì)胞分離培養(yǎng)及細(xì)胞表型的研究呂春燕，陳高莉，楊玲，陳昌金，袁慧，楊雪梅(1．成都市第五人民醫(yī)院病理科，四川成都611130；2．成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川成都610072；3．成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，四川成都610072【摘要】目的分離、培養(yǎng)和凍存大鼠脂肪干細(xì)胞，并對(duì)其相關(guān)的細(xì)胞表型進(jìn)行研究，為利用脂肪干細(xì)胞
2、治療梗阻性腎病腎纖維化等實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。方法取大鼠3只，經(jīng)消毒麻醉，采集其腹股溝處脂肪組織分離培養(yǎng)其中的脂肪干細(xì)胞，用相差倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)方式及形態(tài)變化。取第三代細(xì)胞用流式細(xì)胞儀作細(xì)胞免疫表型的鑒定。凍存復(fù)蘇后再次檢測(cè)干細(xì)胞生長(zhǎng)情況及表型。結(jié)果大鼠脂肪組織中含有大量間充質(zhì)干細(xì)胞，原代培養(yǎng)的ASCs呈小圓形或星形，經(jīng)傳代后的脂肪干細(xì)胞形態(tài)比較均一，呈長(zhǎng)梭形，個(gè)別略呈多角形、漩渦樣生長(zhǎng)。其細(xì)胞表型為CDCD高表達(dá)，CD，、CD。中等程度表達(dá)，CD極低表達(dá)。脂肪干細(xì)胞經(jīng)低溫凍存3個(gè)月，復(fù)蘇后，生長(zhǎng)活力和存活率與凍存前
3、未見(jiàn)明顯區(qū)別，CD和CD檢測(cè)與凍存前表達(dá)率也一致。結(jié)論建立了一種脂肪干細(xì)胞的有效分離、培養(yǎng)及保存方法，并對(duì)其表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定，為利用脂肪干細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究提供了依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】脂肪干細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；表面標(biāo)志物；鑒定；凍存【中圖分類(lèi)號(hào)】R-332【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】loo3—635O(2O14)O9—1256—o4Isolation，cultivation，identifyandcryopreservationofmesenchymalstemcellsfromratadiposetissue／nv
4、itro．LVChun-yan1，CHENG∞一H2YANGLing2CHENChang—3，YUANHui，YANGXne-mei．1．DepartmentofPathology,theFifthPeopleHospitalofChengdu,Chengdu611130,Sichuan,CHINA；2．DepartmentofLaboratory,AffiliatedHo~italtoChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu610072,Sichu
5、an，CHINA；iCentralLaboratory,AffiliatedHospitaltoChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610072,Sichuan,CHINA【Abstract】ObjectiveTosearchamethodforisolation，cultivation，identificationandcryopreservationofmesenchymalstemcellsfromratadiposetissueinvit
6、ro．MethodThreeratswasanaesthetizedanddisinfectedCOIl-ventionally,theiringuinaladiposetissueweretakenandshearedtopaste．111efragmentsweredigestedbycollagenasetypeI．suspendedbyDMEM．a(chǎn)ndplantedinculturedish．Thenthecellswereculturedinincubatorculture．Theirfirstmediu
7、mchangehappenafter24—48hours，thenthechangeOCCUF2~3daysonceagain，after5～7daysand80％cellfu—sion，ceilsweredigestedbyTrypsinandpassagedbyEDTA．CellmicroscopywasusedtomorphologicalobservationandthetIlirdgenerationwasusedtoidentifybyflowcytometriccellcycle．ResultsRat
8、sfathadalargeamountofadipose—derivedmesenchymalstemcells(ADMSCs)．TheshapeofprimaryculturedASCswasastarormuchhorn；af．terpassageoftheASCsrelativelyuniformshape，fusiformshape，spiralgr
