elisa測(cè)定乳中磺胺甲基嘧啶殘留

《elisa測(cè)定乳中磺胺甲基嘧啶殘留》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。

1、中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)990221中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)CHINESEJOURNALOFVETERINARYSCIENCE1999年第19卷　第2期No.2vol.191999ELISA測(cè)定乳中磺胺甲基嘧啶殘留*吳　定　張羽航**　姚汝華**摘要　以牛血清白蛋白(BSA)為載體，合成2種不同的物質(zhì)的量的比值(約1∶13和1∶42)的磺胺甲基嘧啶抗原，并比較了兩者的免疫原性；以卵白蛋白(OA)為載體，合成1種包被抗原；用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG，工作濃度1∶1000；建立的乳中磺胺甲基嘧啶殘留ELISA測(cè)定法，抗原親和常數(shù)分別為1.28×107（

2、1∶42）和3.21×107(1∶13)，磺胺甲基嘧啶檢測(cè)質(zhì)量濃度為5～220μg/L(1.87×10－8～8.2×10－7mol/L)，檢測(cè)限為2.4μg/L,回收率為88%～118%，與磺胺二甲基嘧啶和磺胺噻唑交叉率分別為6.0%和0.84%，與磺胺二甲氧嘧啶和磺胺脒無(wú)交叉反應(yīng)。關(guān)鍵詞　乳　磺胺甲基嘧啶　ELISA中圖分類號(hào)　S854.43Enzyme-linkedImmunosorbentAssayonSulfamethyldiazineContentinMilkWuDing　ZhangYuhang*　YaoRuhua*　(

3、AnhuiAgrotechnical　　　　　TeachersCollege,Fengyang,Anhui233100)　　Abstract　TwokindsofthesulfamethyldiazineantigenweresynthesisedwiththecarrierproteinofBSAorOAandtheirimmunogenicitycompared;thesheepanti-rabbitγ-globulinwerelabelledwiththehorseradishperoxidase(HRP)according

4、tosodiumperiodatemethod;theELISAonsulfamethyldiazinecontentinmilkwasdeveloped.Affinityconstantoftheantibodywas1.28×107(themolecularmoleratioinantigenfor1∶42)and3.21×107(1∶13),respectively.ThedetectableconcentrationofsulfamethyldiazinewithELISArevealed5-220μg/L(1.87×10

5、-8-8.2×10-7mol/L)withthedetectionlimitbeing2.4μg/L,therecoveryrateof89%-118%,thecrossreactiveratewithsulfadimidineandsulfathiazoleof6.0%and0.84%,respectively,nocrossreactionwithsulfadimethoxineandsulfaguaniline.　　Keywords　sulfamethyldiazine;enzyme-likedimmunosorbentas

6、say;ELISA　　磺胺甲基嘧啶是治療奶牛疾病和作飼料添加劑的常用藥物之一。奶牛使用抗生素后，一般經(jīng)72h就可擠乳出售［1］。但磺胺甲基嘧啶半衰期較長(zhǎng)，72h后鮮乳中仍有微量殘留［2，3］。食用含磺胺甲基嘧啶的牛乳，能導(dǎo)致過(guò)敏機(jī)體發(fā)生過(guò)敏性反應(yīng)，破壞機(jī)體正常菌群生態(tài)平衡，引起致病菌產(chǎn)生耐藥性［4］。乳中抗生素殘留的測(cè)定一般采用TTC法和微生物抑制圈法，但不適合乳中磺胺藥殘留測(cè)定［5～7］。本研究在合成牛血清白蛋白-磺胺甲基嘧啶抗原和卵白蛋白-磺胺甲基嘧啶抗原，并在比較2種不同分子file:///E

7、/qk/zgsyxb/zgsy

8、99/zgsy9902/990221.htm（第1／5頁(yè)）2010-3-2316:43:25中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)990221結(jié)合比偶合抗原免疫原性的基礎(chǔ)上，建立了乳中磺胺甲基嘧啶殘留的ELISA測(cè)定方法。1　材料與方法1.1　主要試劑與儀器　磺胺甲基嘧啶(SMD)(山東第四制藥廠)、吡啶(上?；瘜W(xué)試劑廠)、丁二酸酐(SA)(上?；瘜W(xué)試劑廠)、1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)(Merck公司)、N，N′-二甲基甲酰胺(上?；瘜W(xué)試劑廠)、牛血清白蛋白(BSA)(上海生化所)、卵白蛋白(OA)(上海血研所)、辣根過(guò)氧化物酶

9、(HRP)(RZ>3.0，上海生化所)、羊抗兔IgG(天津生物制品研究中心)、硼氫化鉀(Fluck公司)、過(guò)碘酸鉀(上海試劑一廠)、3，3′，5，5′-四甲基聯(lián)苯胺(Sigma公司)?！　V-754型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海第三分析廠)、DG-3