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《重組人半乳凝集素1的原核表達(dá)、純化及生物活性檢測(cè)(標(biāo)注)》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)鑫丌r盤RSIN技BIOT術(shù)ECHN通OLOG訊Y?voi.2?1N—o.3一一一May,2?010一LErrrE·,315doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.004研究報(bào)告重組人半乳凝集素一1的原核表達(dá)、純化及生物活性檢測(cè)李晶,賀麗清,舒震,侯建偉,陳霖,徐玉金,張偉,張英起第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系生物制藥學(xué)教研室,陜西西安710032【摘要】目的:在大腸桿菌中表達(dá)半乳凝集素一1(galectin-I),并進(jìn)行純化及生物活性檢測(cè)。方法:將人半乳凝集素一1基因克隆至帶有His融合標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pQE一30上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15,經(jīng)IFrG誘導(dǎo)表達(dá),
2、表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后,進(jìn)行Western印跡鑒定,并用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)檢測(cè)其生物學(xué)活性。結(jié)果:雙酶切鑒定和核苷酸序列測(cè)定表明重組表達(dá)質(zhì)粒pQE一30一Galecfin—l構(gòu)建正確;重組蛋白的表達(dá)量約占菌體總蛋白的50%,主要以可溶形式表達(dá),純化后蛋白純度達(dá)95%以上,且具有良好的紅細(xì)胞凝集活性。結(jié)論:在大腸桿菌中表達(dá)了重組人半乳凝集素一l,且具有良好的生物活性。[關(guān)鍵詞】重組人半乳凝集素-1;原核表達(dá);純化;紅細(xì)胞凝集[中圖分類號(hào)】Q78【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1009—0002(2010)03_0315一04ProkaryoticExpression,PurificationandB
3、iologicalActivityDetermi-nationofHumanGalectin-1LIJing,HELi-Qing,SHUZhen,HOUJian-Wei,CHENLin,XUYu-Jzrt,ZHANGWei,ZHANGYing-QiDepartmentofBiopharmaceufics,SchoolofPharmacy,F(xiàn)ourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032,China[Abstract]Objective:Toexpresshumangalectin-1inEscherichiacolianddeterminethebiol
4、ogicalactivityofrecombinantgalectin-I.Methods:Galectin-IgeneWtl8clonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE一30withHisfusionlabeling,andtheconstructedrecombinantplasmidWaStransformedtoE.coliM15forexpressionunderin—ducfionofIPTG.Theexpressedproductw鵲pu面edbyaffinitychromatographyandidentifiedbyWesternblo
5、t,thenthebiologicalactivityW88determinedbyhemagglutinationtesLResults:RestrictionanalysisandnucleotidesequencingprovedthatrecombinantexpressionvectorpQE-30-Galectin-1Wagconstructedcorrectly.Theexpressedproductcontained50%oftotalsomaticproteinandmainlyexistedinasolubleform.Afterpurification,thel['ec
6、om-binantgalectin-1reachedapurityofIllOl[℃than95%andshowedgoodhemagglutinatingactivity.Conclusion:Re—combinanthumangalectin-1warsuccessfullyexpressedinE.coliandshowedhishbiologicalactivity.【Keywords】recombinanthumangalectin-1;prokaryoticexpression;purification;hemagglutination半乳凝集素(galectin)是凝集素中一個(gè)
7、進(jìn)化上十分保守的家族,其結(jié)構(gòu)中包含有一段長約130個(gè)氨基酸殘基的糖類識(shí)別區(qū)(carbohydraterecognitiondomain,CRD),對(duì)B一半乳糖苷具有特殊親和力I“。迄今,已有15個(gè)哺乳動(dòng)物半乳凝集素家族成員被發(fā)現(xiàn),根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)可分為3類:①原型,含有單一CRD,包括半乳凝集素一l、一2、一5、_7、一10、一13、一14、一15;②串聯(lián)重復(fù)型,含由不同長度多肽相連的2個(gè)CRD,包括半乳凝集素