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《重組人半乳凝集素1的原核表達(dá)、純化及生物活性檢測(cè)(標(biāo)注)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)鑫丌r盤RSIN技BIOT術(shù)ECHN通OLOG訊Y?voi．2?1N—o．3一一一May，2?010一LErrrE·，315doi：10．3969／j．issn．1009-0002．2010．03．004研究報(bào)告重組人半乳凝集素一1的原核表達(dá)、純化及生物活性檢測(cè)李晶，賀麗清，舒震，侯建偉，陳霖，徐玉金，張偉，張英起第四軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系生物制藥學(xué)教研室，陜西西安710032【摘要】目的：在大腸桿菌中表達(dá)半乳凝集素一1(galectin-I)，并進(jìn)行純化及生物活性檢測(cè)。方法：將人半乳凝集素一1基因克隆至帶有His融合標(biāo)簽的原核表達(dá)載體pQE一30上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15，經(jīng)IFrG誘導(dǎo)表達(dá)，
2、表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化后，進(jìn)行Western印跡鑒定，并用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)檢測(cè)其生物學(xué)活性。結(jié)果：雙酶切鑒定和核苷酸序列測(cè)定表明重組表達(dá)質(zhì)粒pQE一30一Galecfin—l構(gòu)建正確；重組蛋白的表達(dá)量約占菌體總蛋白的50％，主要以可溶形式表達(dá)，純化后蛋白純度達(dá)95％以上，且具有良好的紅細(xì)胞凝集活性。結(jié)論：在大腸桿菌中表達(dá)了重組人半乳凝集素一l，且具有良好的生物活性。[關(guān)鍵詞】重組人半乳凝集素-1；原核表達(dá)；純化；紅細(xì)胞凝集[中圖分類號(hào)】Q78【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1009—0002(2010)03_0315一04ProkaryoticExpression，PurificationandB
3、iologicalActivityDetermi-nationofHumanGalectin-1LIJing,HELi-Qing,SHUZhen,HOUJian-Wei,CHENLin,XUYu-Jzrt，ZHANGWei，ZHANGYing-QiDepartmentofBiopharmaceufics，SchoolofPharmacy，F(xiàn)ourthMilitaryMedicalUniversity，Xi'an710032，China[Abstract]Objective：Toexpresshumangalectin-1inEscherichiacolianddeterminethebiol
4、ogicalactivityofrecombinantgalectin-I．Methods：Galectin-IgeneWtl8clonedintoprokaryoticexpressionvectorpQE一30withHisfusionlabeling,andtheconstructedrecombinantplasmidWaStransformedtoE．coliM15forexpressionunderin—ducfionofIPTG．Theexpressedproductw鵲pu面edbyaffinitychromatographyandidentifiedbyWesternblo
5、t，thenthebiologicalactivityW88determinedbyhemagglutinationtesLResults：RestrictionanalysisandnucleotidesequencingprovedthatrecombinantexpressionvectorpQE-30-Galectin-1Wagconstructedcorrectly．Theexpressedproductcontained50％oftotalsomaticproteinandmainlyexistedinasolubleform．Afterpurification，thel['ec
6、om-binantgalectin-1reachedapurityofIllOl[℃than95％andshowedgoodhemagglutinatingactivity．Conclusion：Re—combinanthumangalectin-1warsuccessfullyexpressedinE．coliandshowedhishbiologicalactivity．【Keywords】recombinanthumangalectin-1；prokaryoticexpression；purification；hemagglutination半乳凝集素(galectin)是凝集素中一個(gè)
7、進(jìn)化上十分保守的家族，其結(jié)構(gòu)中包含有一段長約130個(gè)氨基酸殘基的糖類識(shí)別區(qū)(carbohydraterecognitiondomain，CRD)，對(duì)B一半乳糖苷具有特殊親和力I“。迄今，已有15個(gè)哺乳動(dòng)物半乳凝集素家族成員被發(fā)現(xiàn)，根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)可分為3類：①原型，含有單一CRD，包括半乳凝集素一l、一2、一5、_7、一10、一13、一14、一15；②串聯(lián)重復(fù)型，含由不同長度多肽相連的2個(gè)CRD，包括半乳凝集素
