實(shí)驗(yàn)四：細(xì)菌的接種、培養(yǎng)和分離技術(shù).doc

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1、實(shí)驗(yàn)四：細(xì)菌的接種、培養(yǎng)和分離技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：（1）掌握從環(huán)境（土壤、水體、活性污泥等）中分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法，從而獲得若干種細(xì)菌純培養(yǎng)技能（2）掌握細(xì)菌純種分離的方法：稀釋平板分離法和平板劃線法。（3）掌握幾種接種技術(shù)：斜面接種技術(shù)、穿刺接種、稀釋平板涂布法等。二、實(shí)驗(yàn)原理在土壤、水、空氣或人及動(dòng)、植物體中，不同種類的微生物絕大多數(shù)都是混雜生活在一起，當(dāng)我們希望獲得某一種微生物時(shí)，就必須從混雜的微生物類群中分離它，以得到只含有這一種微生物的純培養(yǎng)，這種獲得純培養(yǎng)的方法稱為微生物的分離與純化。為了獲

2、得某種微生物的純培養(yǎng)。一般是根據(jù)該微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、氧等條件要求不同，而供給它適宜的培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長(zhǎng)，而抑制其他菌生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或平板劃線分離法等分離、純化該微生物，直至得到純菌株。三、實(shí)驗(yàn)器材1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基2、盛9ml無菌水的試管，盛90m1無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶，1ml和5ml無菌吸管，無菌培養(yǎng)皿；3、接種環(huán)，土樣，酒精燈等。四、操作步驟1、倒平板將加熱融化的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，并標(biāo)明培

3、養(yǎng)基的名稱。2、貼標(biāo)簽接種前在試管上貼上標(biāo)簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等。貼在距試管口徑2-3厘米的位置。3、點(diǎn)燃酒精燈。4、接種取接種環(huán)右手拿接種環(huán)(如握鋼筆一樣)、在火焰上將環(huán)端燒紅滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分，均用火燒過滅菌。環(huán)冷卻將灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管，先使環(huán)接觸邊壁，使其冷卻。取菌種待環(huán)冷卻后輕輕沾取經(jīng)稀釋10倍的土壤懸液-環(huán)，然后將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使環(huán)的部分碰到管壁，取出后不可使環(huán)通過火焰。接種在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)在平板上劃線。劃線的方法很多，但無論哪種方

4、法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使形成單個(gè)菌落。常用的劃線方法有下列二種：⑴用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤懸液一環(huán)，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線3-4條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線(圖A)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫室培養(yǎng)。⑵將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上作連續(xù)劃線(圖B)。劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置溫室培養(yǎng)。環(huán)滅菌將接種環(huán)燒

5、紅滅菌。5、挑菌將培養(yǎng)后長(zhǎng)出的單個(gè)菌落分別挑取接種到上述三種培養(yǎng)基的斜面上，分別置25℃和28℃溫室中培養(yǎng)，待菌苔長(zhǎng)出后，檢查菌苔是否單純，也可用顯微鏡涂片染色檢查是否是單一的微生物，若有其他雜菌混雜，就要再一次進(jìn)行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。四、注意事項(xiàng)1、實(shí)驗(yàn)操作過程中無菌操作。