山羊抗小鵝高免血清的制備及臨床試驗.doc

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1、山羊抗小鵝瘟高免血清的制備及臨床應(yīng)用試驗王文強(qiáng)1，王開功2，田新平3（1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州銅仁554300；2.貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴陽花溪3.550025；銅仁市畜牧獸醫(yī)局，貴州銅仁554300）摘要小鵝瘟是雛鵝感染鵝細(xì)小病毒(Gooseplaguevirus，GPV)，所引起的一種急性敗血型傳染病。本病病程短而且死亡率高，主要侵害1月齡以內(nèi)的雛鵝和雛番鴨。10日齡以下的雛鵝發(fā)病后，其死亡率可能高達(dá)100%。目前，許多養(yǎng)鵝場大多使用市場上銷售的抗小鵝瘟血清對鵝進(jìn)行免疫和治療，但是市場上銷售的抗小鵝瘟血清其產(chǎn)量低、成本高，且容易導(dǎo)致某些鵝源疫病的傳

2、播。本文采用從貴州麻江縣等地的養(yǎng)鵝場采集的病鵝分離出的小鵝瘟野生強(qiáng)毒株接種于9日齡的鵝胚尿囊液制備了小鵝瘟病毒抗原，并用小鵝瘟病毒抗原加弗氏佐劑后，分多次皮下注射結(jié)合靜脈注射小鵝瘟病毒抗原免疫貴州黑、白山羊。頸動脈一次性放血制備抗小鵝瘟異源高免血清，用瓊脂擴(kuò)散進(jìn)行效價的測定，結(jié)果顯示其抗體效價平均都在1∶8以上。將制備的血清與市售的抗小鵝瘟進(jìn)行了對比試驗，結(jié)果市售的抗小鵝瘟血清的保護(hù)率為85%，山羊抗小鵝瘟高免血清的保護(hù)率為95%。山羊抗小鵝瘟異源高免血清具有效價高、成本低、安全性好等優(yōu)點。關(guān)鍵詞：小鵝瘟；山羊抗小鵝瘟高免血清；抗小鵝瘟血清；對比試驗小鵝瘟

3、又稱為Derzsy’s病、鵝流感、鵝肝炎、鵝傳染性心肌炎、鵝腸炎、鵝腹水性肝腎炎，它是由小鵝瘟病毒（Gooseplaguevirus)，即鵝細(xì)小病毒(Gooseparvovirus,GPV)引起小鵝和雛番鴨的一種急性或亞急性、敗血性、高度接觸性、傳染性強(qiáng)、病程短且死亡率高的傳染病[1-4]。根據(jù)《貴州畜疫病志》和貴州大學(xué)王開功教授[9]報道，2001年3月，貴州省惠水、三都、修文等縣的養(yǎng)鵝場雛鵝發(fā)生了一種疫病，病鵝的臨床癥狀和病理變化與國內(nèi)的殷震和國外的GoughR.E等人[10-14]報道的小鵝瘟很相似。貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院疫病實驗室對從患病的鵝群中采集

4、的病鵝心、肝和脾等組織觸片染色鏡檢未見細(xì)菌，同時接種血瓊脂平板作需氧和厭氧培養(yǎng)，結(jié)果為陰性。隨后將病料進(jìn)行處理接種于15日齡鵝胚尿囊腔，分離到一株小鵝瘟野生強(qiáng)毒，同時證明了貴州省已經(jīng)有本病的存在。隨著貴州省養(yǎng)鵝業(yè)的迅猛發(fā)展，小鵝瘟的發(fā)生和流行，對貴州省的養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的威脅。大多數(shù)養(yǎng)殖場鵝病的發(fā)生集中在每年的3～4月份；3周齡的小鵝易發(fā)??；發(fā)病率為80%，死亡率高達(dá)90%～100%。雖然一些主要的養(yǎng)鵝場對一日齡的小鵝用抗小鵝瘟血清進(jìn)行了免疫，但是隨著鵝體內(nèi)抗體的消長和許多養(yǎng)殖場種鵝的免疫程序還不完善，小鵝瘟還是存在著威脅。應(yīng)用高免鵝制備的血清可以對小鵝瘟

5、進(jìn)行很好的預(yù)防和治療，但是由于利用成年鵝制備高免血清產(chǎn)量低而且成本很高,難以滿足生產(chǎn)上的需要。所以我們從生產(chǎn)實際出發(fā)，參考了國內(nèi)外的一些經(jīng)驗和技術(shù)，用從養(yǎng)殖場的病鵝分離出的小鵝瘟毒株，將病毒接種鵝胚進(jìn)行病原的增殖，收集到的尿囊液，制作了小鵝瘟病毒抗原，采用多次免疫和頸動脈一次性采血的方法制造出了適合我省預(yù)防和治療小鵝瘟的山羊抗小鵝瘟異源高免血清，并與中牧實業(yè)股份有限公司成都藥械廠生產(chǎn)的抗小鵝瘟血清進(jìn)行了對比試驗。對防治鵝細(xì)小病毒感染的發(fā)生和流行，保障貴州省養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展具有重要的意義。1材料與方法1.1材料1.1.1毒株用從貴州省惠水、三都等縣的養(yǎng)殖場的

6、病鵝采的心、肝、脾等病料分離出了小鵝瘟野生強(qiáng)毒株，由本實驗室凍干保存。1.1.2胚胎9日齡的鵝胚由實驗室購自烏當(dāng)養(yǎng)殖場未經(jīng)免疫的鵝蛋在本實驗室自行孵化。1.1.3樣本小鵝瘟標(biāo)準(zhǔn)抗原和陽性血清由揚州大學(xué)動物醫(yī)學(xué)系王永坤教授惠贈；免疫鵝血清系采用小鵝瘟弱毒疫苗人工免疫成年鵝制備；其它常見禽病血清如新城疫病毒(NDV)、馬立克病毒(MDV)、減蛋綜合癥病毒(EDSV)和傳染性法氏囊病毒(IBDV)均由本實驗室提供；禽流感病毒（AIV）血清購自哈爾濱獸醫(yī)研究所。1.1.4試驗用山羊購于清鎮(zhèn)養(yǎng)羊場，一頭貴州黑山羊和一頭貴州白山羊，體重30kg以上,臨床檢查健康。1.

7、1.5試驗用雛鵝由銅仁市川主科技助農(nóng)有限公司提供。1.1.6抗小鵝瘟血清中牧實業(yè)股份有限公司成都藥械廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為獸藥生產(chǎn)（2007）220058090。1.2方法1.2.1小鵝瘟抗原的制備取病毒感染鵝胚的尿囊液，經(jīng)4000rpm離心10min,去除細(xì)胞碎片，收集上清液。于上清液中加入等量氯仿，強(qiáng)烈振搖，經(jīng)4000rpm離心10min，舍去有機(jī)相和中間界面的雜質(zhì)，收集上層水相。反復(fù)抽提3～4次，直至兩相界面清晰。在水相中緩慢加入質(zhì)量濃度400g/L的聚乙二醇（MW6000），使其終質(zhì)量濃度達(dá)60g/L，調(diào)節(jié)氯化鈉的質(zhì)量濃度達(dá)22g/L，4℃靜置過夜，第

8、二天后經(jīng)過10000rpm離心30min,舍去上清液，收集病毒沉淀