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《順鉑耐藥卵巢上皮性癌細胞株及其裸鼠移植瘤模型的建立及耐藥特性探討-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、中華婦產(chǎn)科雜志2014年7月第49卷第7期ChinJObstetGynecol，July2014，Vo1．49，N0．7·523·．基礎(chǔ)研究．順鉑耐藥卵巢上皮性癌細胞株及其裸鼠移植瘤模型的建立及耐藥特陛探討石麗君于紅靜張瑋李力王琪【摘要】目的建立順鉑耐藥性穩(wěn)定的卵巢上皮性癌(卵巢癌)細胞株及其裸鼠移植瘤模型并探討其耐藥特性，為研究體內(nèi)微環(huán)境耐藥機制及逆轉(zhuǎn)靶基因篩選奠定基礎(chǔ)。方法采用體內(nèi)外交叉誘導(dǎo)和連續(xù)體內(nèi)誘導(dǎo)兩種方法，以綠色熒光蛋白(GFP)標記的卵巢癌細胞株SKOV3／GFP分別建立兩株順鉑耐藥的卵巢癌細胞株SKOV3／DDPI(為耐藥細胞的對照)和SK
2、OV3／DDPⅡ及其裸鼠移植瘤模型。采用四甲基偶氮唑藍(M，rr)比色法和流式細胞儀檢測細胞耐藥指數(shù)，流式細胞儀檢測細胞凋亡率和細胞周期比例，高效液相色譜儀檢測細胞內(nèi)順鉑積量；透射電鏡觀察移植瘤組織的超微結(jié)構(gòu)，實時熒光定量PCR技術(shù)檢測移植瘤組織中鉑類耐藥相關(guān)基因——EN、STAT5、XIAP、BRCA1和MDR1mRNA的表達水平。結(jié)果成功構(gòu)建順鉑耐藥卵巢癌細胞株SKOV3／DDPI和SKOV3／DDPlI及其裸鼠移植瘤模型。MTF比色法和流式細胞儀檢測顯示，SKOV3／DDPII細胞的耐藥指數(shù)分別為2．83+0．12和3．82~0．19，SKOV3／D
3、DPI細胞的耐藥指數(shù)分別為2．20~0．16和3．40~0．20，兩種檢測方法分別比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。流式細胞儀檢測顯示，29．7和39．6IxmoULJl~fl處理36h后，SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPII細胞的凋亡率『分別為(57．0±1．4)％、(74．4~2．3)％和(37．6±4．4)％、(50．5~3．4)％】均顯著低于SKOV3／GFP細胞【(83．1~2．7)％和(87．4~4．0)％；P=0．024，P=O．0011，且SKOV3／DDPII細胞的凋亡率明顯低于SKOV3／DDPI細胞(P=0．020)；
4、SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPI1細胞GdM期比例與順鉑處理時間(為0、12、24、36和48h)呈正相關(guān)(=O．800，P=O．104；R=0．915，P=O．029)。高效液相色譜儀檢測顯示，以9．9、19．8、29．7和39．6Ixmol／L的順鉑分別處理12、24、36和48h后，SKOV3／DDPI、SKOV3／DDPI1細胞內(nèi)順鉑積量均顯著低于SKOV3／GFP細胞(P<0．05)。透射電鏡觀察，接種SKOV3／GFP細胞的裸鼠移植瘤組織中，在腹腔內(nèi)注射順鉑(為4mg／kg)5次后，大部分細胞器降解，細胞核膜不完整；而接種SKOV3／
5、DDPII細胞的裸鼠移植瘤組織中，在腹腔內(nèi)注射順鉑8次后才出現(xiàn)細胞器降解。實時熒光定量PCR技術(shù)檢測顯示，腹腔內(nèi)注射順鉑8次后，接種SKOV3／DDPII細胞的裸鼠移植瘤組織中PTENmRNA的表達水平明顯低于接種SKOV3／GFP細胞者(P=0．002)；STAT5、XIAP和BRCA1mRNA的表達水平明顯高于接種SKOV3／GFP細胞者(P<0．05)；而MDR1mRNA幾乎均無表達。結(jié)論本研究建立的順鉑耐藥細胞株SKOV3／DDPI1具有穩(wěn)定的耐藥性。接種SKOV3／DDPII細胞的裸鼠移植瘤組織過度表達BRCA1、XIAP、STAT5mRNA，促
6、進細胞DNA損傷修復(fù)、降低細胞凋亡、促進細胞增殖，而低表達PTENmRNA~[]減弱了對細胞增殖的抑制作用，符合臨床上鉑類耐藥細胞的耐藥機制?！娟P(guān)鍵詞】卵巢腫瘤；順鉑；抗藥性，腫瘤；細胞系，腫瘤；疾病模型，動物Establishmentandbiologicalcharacteristicsofaplatinum—resistancenudemousemodelinepithelialovariancancerShin，YuHongfing,ZhangWei,LiLi,WangQi．MinistryofEducationKeyLaboratoryofEaP
7、reventionandTreatmentforRegionalHighFrequencyTumor,AfiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021，ChinaCorrespondingauthor：WangQi，Email：qi_catcat@163．comDOI：i0．3760／cma．j．issn．0529—567x．2014．07．010基金項目：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(2O12AA02A507)；廣西科技基礎(chǔ)條件平臺建設(shè)項目(10．108．19)；廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實驗中心開
8、放基金(KFJJ2O10—3)作者單位：530021南寧，廣西醫(yī)科
