血細(xì)胞分析儀原理.ppt

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1、第三章血液分析儀檢查目的要求1、掌握：血液分析儀各項(xiàng)參數(shù)的縮寫(xiě)、參考值、直方圖概念。2、熟悉：血液分析儀電臨床應(yīng)用、檢測(cè)參數(shù)、方法學(xué)平價(jià)、血細(xì)胞直方圖正常形態(tài)特點(diǎn)及常見(jiàn)異常形態(tài)、臨床應(yīng)用。3、了解：血液分析儀的進(jìn)展。重點(diǎn):1、血液分析儀測(cè)定的原理、方法2、血液分析儀各參數(shù)臨床意義難點(diǎn):血液分析儀檢驗(yàn)的質(zhì)控§1血液分析儀的發(fā)展史自動(dòng)血液分析儀（automatedhematologyanalyzer,AHA)，早年稱血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（bloodcellcounter)，是目前國(guó)內(nèi)外臨床檢驗(yàn)最常用的篩檢儀器之一。1、傳統(tǒng)采用手工方法2、20世紀(jì)50年代，美國(guó)的Coulter設(shè)計(jì)了第一臺(tái)電子血

2、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。還產(chǎn)生了血紅蛋白儀。3、20世紀(jì)70年代檢測(cè)血小板的儀器Baker-8104、20世紀(jì)80年代，可打印WBC、RBC、PLT體積分布直方圖。5、20世紀(jì)90年代，白細(xì)胞分類(lèi)的開(kāi)發(fā)（二分類(lèi)、三分類(lèi)）；將網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)用于血細(xì)胞分析儀；生產(chǎn)了血液學(xué)全自動(dòng)系統(tǒng)。6、現(xiàn)在，白細(xì)胞五分類(lèi)，儀器組合化血細(xì)胞分析儀近年來(lái)的發(fā)展變化1.血常規(guī)檢驗(yàn)多參數(shù)化2.多功能合成擴(kuò)展3.檢測(cè)速度的提高4.方法的改進(jìn)和進(jìn)展5.應(yīng)用的方便性血液分析儀功能：①全血細(xì)胞計(jì)數(shù)功能。②白細(xì)胞分類(lèi)功能。③擴(kuò)展功能。血液分析儀優(yōu)勢(shì)檢測(cè)項(xiàng)目多速度快精度高易操作§2檢測(cè)原理檢測(cè)原理電學(xué)光學(xué)電阻抗法射頻電導(dǎo)法激光散

3、射法分光光度法一、電阻抗法血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理即庫(kù)爾特原理（Coulterprinciple):根據(jù)血細(xì)胞非傳導(dǎo)的性質(zhì)，以電解質(zhì)溶液中懸浮的血細(xì)胞在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化進(jìn)行檢測(cè)為基礎(chǔ)，進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。小孔管是電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)重要組成部分。檢測(cè)期間，當(dāng)電流接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生穩(wěn)定的電流。如果供給的阻抗也是穩(wěn)定的，則小孔的電壓是不變的。當(dāng)有一個(gè)細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)，由于電阻增加，于瞬間引起電壓變化——通過(guò)脈沖。細(xì)胞體積越大，脈沖振幅越高；細(xì)胞數(shù)量越多，脈沖數(shù)量也越多。脈沖信號(hào)經(jīng)過(guò)下列步驟，得出細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果：放大由于血細(xì)胞通過(guò)微孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖信號(hào)微弱，必須通過(guò)放大器

4、將訊號(hào)放大。2.閾值調(diào)節(jié)在一定范圍內(nèi)調(diào)節(jié)參考電平的大小，使計(jì)數(shù)結(jié)果盡可能符合實(shí)際。3.甄別利用甄別器根據(jù)閾值調(diào)節(jié)器提供的參考電平，將低于參考電平的假訊號(hào)（細(xì)胞碎片，雜質(zhì)微粒）去掉。4.整形通過(guò)整形器作用，將脈沖訊號(hào)波形修整成一致標(biāo)準(zhǔn)的平頂波，才能觸發(fā)電路5計(jì)數(shù)血細(xì)胞的脈沖信號(hào)，經(jīng)過(guò)放大、甄別、整形后，送入計(jì)數(shù)系統(tǒng)，得出計(jì)數(shù)結(jié)果。電阻抗法可準(zhǔn)確測(cè)量出細(xì)胞（或類(lèi)似顆粒）的大小，是三分群血液分析儀的主要應(yīng)用原理，并與光學(xué)檢測(cè)原理組合應(yīng)用于五分類(lèi)血液分析儀中。三分群血液分析儀基本組成①信號(hào)發(fā)生器各種微粒通過(guò)檢測(cè)小孔產(chǎn)生電阻抗脈沖信號(hào)的檢測(cè)源。②放大器將血細(xì)胞微弱脈沖信號(hào)放大以觸發(fā)電路系統(tǒng)。

5、③閾值調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)能區(qū)分不同群細(xì)胞合適的信號(hào)電平。④甄別器去除非參考電平的各種假信號(hào)以提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。⑤整形器將不一致的脈沖波形信號(hào)調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)的波形后觸發(fā)計(jì)數(shù)電路系統(tǒng)。⑥計(jì)數(shù)系統(tǒng)將整形后的血細(xì)胞脈沖信號(hào)顯示為不同類(lèi)群的細(xì)胞數(shù)。二、激光散射法激光散射法應(yīng)用了流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)檢測(cè)原理。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)原理：細(xì)胞通過(guò)激光束被照射時(shí)，產(chǎn)生與細(xì)胞特征相應(yīng)的各種角度的散射光。對(duì)經(jīng)信號(hào)檢測(cè)器接收的散射光信息進(jìn)行綜合分析，即可準(zhǔn)確區(qū)分正常類(lèi)型的細(xì)胞。半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞術(shù)側(cè)向熒光（RNA/DNA含量）激光（波長(zhǎng)633nm）側(cè)向散射（細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如核的大?。┣跋蛏⑸涔?/p>

6、（細(xì)胞大?。┑徒嵌壬⑸涔猓ㄇ跋蛏⑸涔猓悍从臣?xì)胞的數(shù)量和表面體積大小。高角度散射光（側(cè)向散射光）：反映細(xì)胞的內(nèi)部顆粒、細(xì)胞核等復(fù)雜性。激光散射法在區(qū)別體積相同而類(lèi)型不同的細(xì)胞特征時(shí)，比電阻抗法分群更加準(zhǔn)確。故激光散射法已成為現(xiàn)代五分類(lèi)血液分析儀的主要檢測(cè)原理之一。流式細(xì)胞儀的技術(shù)特點(diǎn)流式細(xì)胞儀在設(shè)計(jì)上采用了許多獨(dú)特的技術(shù)，比如液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號(hào)測(cè)量和細(xì)胞分選方面都有自己的技術(shù)特點(diǎn)。著重講述液流系統(tǒng)——鞘流原理。雷諾系數(shù)ReRe＝dρν/ηd:管子的直徑ρ：液體的密度ν：液體的流速η：液體的粘滯系數(shù)Re<2300，液流處于穩(wěn)流狀態(tài)Re>2300，液流處于湍流狀態(tài)通常把標(biāo)本流的流

7、速控制在10m/s以內(nèi)，就能保持標(biāo)本流處于穩(wěn)流狀態(tài)。外面包被有高速流動(dòng)的鞘液，實(shí)現(xiàn)標(biāo)本與鞘液穩(wěn)定的同軸流動(dòng)狀態(tài)。同時(shí)利用液流聚焦原理，使標(biāo)本流直徑變小，通常只有10～20μm，避免細(xì)胞多個(gè)重疊進(jìn)入檢測(cè)區(qū)。激光散射法系統(tǒng)基本組成1、光源氣體（氦－氖）激光或固體（半導(dǎo)體）激光（單色光）；鎢光源（多色光）。2、鞘流維持顆粒于液流中央，順序、單個(gè)、恒速向前流動(dòng)，即流體動(dòng)力學(xué)聚焦。3、細(xì)胞懸液被檢測(cè)細(xì)胞（顆粒）的懸液，由氣壓導(dǎo)入流動(dòng)池。4、光檢測(cè)器接受來(lái)自各種角度的散射光或吸收