枯草芽孢桿菌活菌數(shù)含量的測(cè)定操作規(guī)程.doc

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1、文件名稱枯草芽孢桿菌活菌數(shù)的測(cè)定操作規(guī)程文件編號(hào)編制人編制日期年月日頒發(fā)部門(mén)審核人審核日期年月日印制份數(shù)批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期年月日生效日期年月日分發(fā)部門(mén)質(zhì)量管理部、生產(chǎn)部目的：建立枯草芽孢桿菌活菌數(shù)含量的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范圍：本方法適用于的枯草芽孢桿菌活芽孢的測(cè)定責(zé)任人：內(nèi)容：1.儀器與工具：電子天平、生物顯微鏡、搖床、18×180mm試管、500ml三角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管2．試劑與試液：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉、無(wú)菌蒸餾水、等。3.檢測(cè)培養(yǎng)基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、瓊脂16g、氯化鈉5g、蒸餾水1

2、000ml，調(diào)至PH7.2，121℃滅菌30min。4.檢測(cè)步驟：4.1菌液制備：采樣量不少于500g，從所采的樣品中精確稱取10.00g試樣，加入已滅菌的帶玻璃珠（玻璃珠在80個(gè)左右）的500ml錐形瓶中，加入90ml已滅菌的無(wú)菌水，在搖床上200r/min搖動(dòng)60min，即成母液的菌懸液。4.2用1ml無(wú)菌吸管吸取1ml上述母液的菌懸液，加入9ml無(wú)菌水混勻成1：1×102稀釋的菌懸液，這樣依此稀釋，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等濃度（每個(gè)稀釋度必須更換無(wú)菌吸管）。4.3向每個(gè)滅菌培養(yǎng)平皿中倒

3、入約12ml培養(yǎng)基，混合均勻，待凝固后備用。4.4用1ml無(wú)菌吸管分別吸取不同稀釋濃度菌懸液0.2ml，加至已凝固好的培養(yǎng)基中，用涂布棒涂勻，在無(wú)菌操作臺(tái)中靜置30min后，倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h—24h。每個(gè)樣品取3個(gè)連續(xù)適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度重復(fù)3次，同時(shí)加入無(wú)菌水的空白對(duì)照，每個(gè)稀釋度取5個(gè)到10個(gè)菌落的菌體，涂片染色，顯微鏡觀察識(shí)別后計(jì)數(shù)菌落。5.菌落計(jì)數(shù)：5.1以平板上出現(xiàn)20個(gè)——200個(gè)菌落數(shù)的稀釋度平板為記數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，并確定為稀釋倍數(shù)。5.2當(dāng)只有一個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)在20個(gè)——200個(gè)之間時(shí)

4、，則以該平均菌落數(shù)乘以其稀釋倍數(shù)。5.3若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)在20個(gè)——200個(gè)之間時(shí)，應(yīng)按兩者菌落數(shù)之比值來(lái)決定。6、結(jié)果統(tǒng)計(jì)與計(jì)算根據(jù)菌落數(shù)特征判定，分別數(shù)出平板中的枯草芽孢桿菌菌數(shù)及雜菌數(shù)（雜菌是指除枯草芽孢桿菌外的其他菌種）。統(tǒng)計(jì)算出同一稀釋度三個(gè)平皿上菌落平均數(shù)（B）和雜菌數(shù)（E）。6.1有效活菌總數(shù)按式（1）計(jì)算；A=10×B×C×5………………………………………(1)式中：A——有效活菌總數(shù)，cfu/gB——菌落活菌數(shù)；C——稀釋倍數(shù)。6.2雜菌率按式（2）計(jì)算：EE+AD=×100……………………(

5、2)式中：D——雜菌率，%E——雜菌數(shù)。