實(shí)驗(yàn)4測定細(xì)菌生長曲線課件.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)4、測定細(xì)菌生長曲線一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解細(xì)菌生長曲線的特征，認(rèn)識微生物在一定條件下生長繁殖的規(guī)律。2.掌握用細(xì)菌懸液的渾濁度間接測定細(xì)菌生長的方法。3.學(xué)習(xí)液體培養(yǎng)基的配制及接種方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容測定大腸桿菌、枯草桿菌的生長曲線將一定量的細(xì)菌接種在液體培養(yǎng)基內(nèi)，一定條件下培養(yǎng)，細(xì)菌的生長繁殖具有一定的規(guī)律性。以細(xì)菌活菌數(shù)的對數(shù)作縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時間作橫坐標(biāo)，可繪成一條曲線，稱為生長曲線。三、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)菌的生長曲線分為：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰退期。其表示細(xì)菌從開始生長到死亡全過程的動態(tài)。測定微生物的生長曲線對于了解和把

2、握生物的生長規(guī)律是很有幫助的。測定微生物生長曲線的方法有血球計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法、稱重法和比濁法等。比濁法：由于細(xì)菌懸液的濃度與混濁度成正比。故可用分光光度計(jì)測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度。將所測的光密度值（OD）與其對應(yīng)的培養(yǎng)時間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線（注意：由于光密度表示的是培養(yǎng)液的總數(shù)，包括活菌與死菌所測的生長曲線衰亡期不明顯）。微生物的典型生長曲線圖Ⅰ.延滯期，Ⅱ.指數(shù)期，Ⅲ.穩(wěn)定期，Ⅳ.衰亡期四、實(shí)驗(yàn)儀器、材料和用具儀器：搖床、分光光度計(jì)、取液器。微生物材料大腸桿菌菌液、枯草桿菌菌液培

3、養(yǎng)基肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基用具玻璃比色皿，三角瓶，酒精燈，接種環(huán)。五、準(zhǔn)備步驟準(zhǔn)備菌種：將大腸桿菌和枯草桿菌分別接到于肉湯蛋白胨液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)14-18h。另準(zhǔn)備大腸桿菌和枯草桿菌斜面種子各1支。接種：分別取5ml大腸桿菌或枯草桿菌液接種到裝有100ml培養(yǎng)液的三角瓶中，放搖床37℃，200rmp振蕩培養(yǎng)。同時分別從大腸桿菌或枯草桿菌斜面取菌接種于100ml培養(yǎng)液中，同樣條件培養(yǎng)。測定（OD）每小時吸取200ul培養(yǎng)液到2800ul蒸餾水中搖勻，以蒸餾水為對照，選420nm波長進(jìn)行光密度（OD值）的測定（注意

4、應(yīng)測定0h的光密度值）。每臺分光光度計(jì)固定在1個參比杯，每人只能在同一臺分光光度計(jì)上測量（注意波長調(diào)好后，不要動波長旋鈕）。1）繪制大腸桿菌和枯草桿菌在兩種接種方法下的生長曲線。（標(biāo)出生長曲線中四個時期的位置和名稱）2）為什么用比濁法測定的細(xì)菌生長只是表示細(xì)菌的相對生長狀況？3）生長曲線中為什么會出現(xiàn)穩(wěn)定期和衰退期？在生產(chǎn)實(shí)踐中怎樣縮短延遲期？怎樣延長對數(shù)期及穩(wěn)定期？怎樣控制衰退期？4）接種時種子在什么條件下為宜，液體種子比斜面種子為什么優(yōu)越？六、結(jié)果與討論