細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定方案

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1、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定1?目的1.1?了解細(xì)菌生長(zhǎng)曲線特點(diǎn)及測(cè)定原理1.2?學(xué)習(xí)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線?2?原理????將少量細(xì)菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養(yǎng)基中，在適宜的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，定時(shí)測(cè)定培養(yǎng)液中的菌量，以菌量的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間作橫坐標(biāo)，繪制的曲線叫生長(zhǎng)曲線。它反映了單細(xì)胞微生物在一定環(huán)境條件下于液體培養(yǎng)時(shí)所表現(xiàn)出的群體生長(zhǎng)規(guī)律。依據(jù)其生長(zhǎng)速率的不同，一般可把生長(zhǎng)曲線分為延緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期。這四個(gè)時(shí)期的長(zhǎng)短因菌種的遺傳性、接種量和培養(yǎng)條件的不同而有所改變。因此通過測(cè)定微生物的生長(zhǎng)曲線，可了解各菌的生長(zhǎng)規(guī)律，對(duì)

2、于科研和生產(chǎn)都具有重要的指導(dǎo)意義。????測(cè)定微生物的數(shù)量有多種不同的方法，可根據(jù)要求和實(shí)驗(yàn)室條件選用。本實(shí)驗(yàn)采用比濁法測(cè)定，由于細(xì)菌懸液的濃度與光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度計(jì)測(cè)定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度，并將所測(cè)的OD值與其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間作圖，即可繪出該菌在一定條件下的生長(zhǎng)曲線，此法快捷、簡(jiǎn)便。3?材料3.1菌種???某細(xì)菌3.2培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基3.3?儀器和器具????721分光光度計(jì)，比色杯，恒溫?fù)u床，無菌吸管，試管，三角瓶。4?流程????種子液→標(biāo)記→接種→培養(yǎng)→測(cè)定5?方法??5.1種子液制備????取細(xì)菌

3、斜面菌種1支，以無菌操作挑取1環(huán)菌苔，接入肉膏蛋白胨培養(yǎng)液中（液體培養(yǎng)基接種法），靜止培養(yǎng)24h作種子培養(yǎng)液。5.2標(biāo)記編號(hào)????取盛有50mL無菌肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的250mL三角瓶11個(gè)，分別編號(hào)為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。5.3接種培養(yǎng)????用2mL無菌吸管分別準(zhǔn)確吸取2mL種子液加入已編號(hào)的11個(gè)三角瓶中，于37℃下振蕩培養(yǎng)。然后分別按對(duì)應(yīng)時(shí)間將三角瓶取出，立即放冰箱中貯存，待培養(yǎng)結(jié)束時(shí)一同測(cè)定OD值。5.4生長(zhǎng)量測(cè)定????將未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（空白對(duì)照）傾倒入比色杯中，選用600nm波

4、長(zhǎng)分光光度計(jì)上調(diào)節(jié)零點(diǎn)，作為空白對(duì)照，并對(duì)不同時(shí)間培養(yǎng)液從0h起依次進(jìn)行測(cè)定，對(duì)濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定，使其OD值在0.10.～0.65以內(nèi)，經(jīng)稀釋后測(cè)得的OD值要乘以稀釋倍數(shù)，才是培養(yǎng)液實(shí)際的OD值。6?結(jié)果6.1?將測(cè)定的OD值填入下表：時(shí)　間(h)??????對(duì)照????0????1.5????3????4????6??????8????10????12????14?????16????20光密度值（OD600）????0?????????????????????????????????????

5、???????6.2?以上述表格中的時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600?值為縱坐標(biāo)，繪制細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。Point：1液體培養(yǎng)基的配制以及接種方法2無菌操作技術(shù)3直接計(jì)數(shù)法