高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法.doc

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1、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：附件面膜類化妝品中氟輕松檢測方法（高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法）1范圍本方法規(guī)定了面膜類化妝品中氟輕松的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于面膜類化妝品中氟輕松的定性定量測定。2方法提要面膜類化妝品用飽和氯化鈉溶液分散，用乙腈從分散液中提取氟輕松，用亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀提取液中大分子基質(zhì)，經(jīng)固相萃取小柱凈化，用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測，采用保留時間和特征離子對豐度比定性，以待測物質(zhì)相對應(yīng)離子峰

2、面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量。本方法的檢出限為0.03μg/g，定量限為0.05μg/g。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為純化水。3.1甲醇：色譜純。3.2乙腈：色譜純。3.3冰醋酸：優(yōu)級純。3.4飽和氯化鈉溶液。3.510%亞鐵氰化鉀溶液：稱取115g亞鐵氰化鉀K4Fe(CN)6·3H2O固體，用水溶解定容至1000mL。3.620%乙酸鋅溶液：稱取239g乙酸鋅C4H6O4Zn·2H2O固體，用水溶解定容至1000mL。3.7OasisHLB固相萃取小柱或相當(dāng)者：60mg，3mL。3.8標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：氟輕松，純度不小于99.0%；標(biāo)準(zhǔn)

3、物質(zhì)的分子式、相對分子質(zhì)量、CAS登錄號、化學(xué)結(jié)構(gòu)圖參見附錄A。3.9標(biāo)準(zhǔn)儲備液（ρ=1g/L）：準(zhǔn)確稱取氟輕松標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（3.8）10mg，精確到0.01mg，置于10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，于－18℃下冷凍保存。3.10標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：臨用時，取標(biāo)準(zhǔn)儲備液（3.9）適量，用乙腈稀釋成0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.80μg/mL系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（ESI源）。4.2分析天平：感量0.0001g；0.00001g。4.3渦旋混合器。4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000

4、r/min，容量10mL；50mL。4.5固相萃取裝置。5分析步驟5.1樣品處理5.1.1提取稱取樣品（帶有載體的面膜，去除載體后取樣）0.2g，精確至0.0001g，置15mL具塞離心管中，加入3mL飽和氯化鈉溶液（3.4），于渦旋混合器上混合使樣品分散，準(zhǔn)確加入2mL乙腈，充分渦旋提取2min，以5000r/min離心10min，吸出上層清液置于另一50mL具塞離心管中，下層溶液用2mL乙腈重復(fù)提取一次，合并兩次乙腈提取液，向提取液中加入40mL純化水，混勻，加入10%亞鐵氰化鉀溶液（3.5）0.2mL，混勻，加入20%乙酸鋅溶液（3.6）0.2mL，混勻，以500

5、0r/min離心10min，取全部上清液待進(jìn)行凈化處理。5.1.2凈化將OasisHLB固相萃取小柱（3.7）接上固相萃取裝置，小柱預(yù)先依次用甲醇5mL、水10mL進(jìn)行活化。將待凈化的樣品上清液（5.1.1）倒入漏斗，經(jīng)濾紙濾過后，濾液流經(jīng)小柱，待樣品溶液自然流盡后，用10%乙腈水溶液10mL清洗小柱，待清洗液自然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液。在柱出口處接一10mL具塞離心管，用甲醇4mL淋洗小柱，待甲醇自然流盡后，用吸球吹出小柱中的殘留液。取下離心管，將接收的甲醇用氮氣吹干，用50%的甲醇水溶液0.2mL重新溶解后測定（或根據(jù)需要的濃度用50%的甲醇水溶液重新溶解

6、定容后測定）。5.2基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液制備稱取空白樣品5份（帶有載體的面膜，去除載體后取樣），每份0.2g，精確到0.0001g，置15mL具塞離心管中，分別精密加入各濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.10）0.2mL，按樣品處理（5.2）步驟操作，將接收的甲醇用氮氣吹干，用50%的甲醇水溶液0.2mL重新溶解后測定。5.3色譜-質(zhì)譜參考條件5.3.1高效液相色譜參考分析條件色譜柱：SBC18，50mm×2.1mm（內(nèi)徑），1.8μm，或相當(dāng)者；柱溫：室溫；高效液相色譜流動相及參考分離條件見表1；進(jìn)樣量：5μL。表1高效液相色譜流動相及參考分離條件時間/min流速/(mL/min)

7、流動相A（水，含0.1%醋酸）流動相B（乙腈，含0.1%醋酸）00.368%32%30.368%32%120.325%75%140.325%75%14.10.368%32%160.368%32%5.3.2質(zhì)譜檢測參考條件電離方式：電噴霧電離，ESI（+）離子噴霧電壓：4kV；霧化氣：氮氣，38Psi；干燥氣：氮氣，流速：12L/min，溫度：350℃；碰撞氣：氬氣；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。氟輕松的質(zhì)譜測定參考參數(shù)見表2。表2氟輕松的質(zhì)譜測定參考參數(shù)藥物名稱出峰時間相對分子質(zhì)量母離子（錐孔電壓）子離子（碰撞能量）*氟輕松3.84mi