大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取、分離和鑒定.ppt

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1、實(shí)驗(yàn)一大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取、分離和鑒定實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、熟悉蒽醌類(lèi)成分的提取分離方法。2、掌握PH梯度提取法的原理和操作技術(shù)。3、學(xué)習(xí)用硅膠柱色譜法分離大黃酚和大黃素甲醚。4、學(xué)習(xí)羥基蒽醌類(lèi)化合物的鑒定方法。實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)根據(jù)大黃中的蒽醌苷類(lèi)在酸性條件下加熱，可水解成游離羥基蒽醌和糖，而游離羥基蒽醌不溶于水，可溶于乙醚、氯仿等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，從水解物中將游離羥基蒽醌提出。再利用游離羥基蒽醌的酸性不同，采用PH梯度萃取法將其分離。大黃酸R1=HR2=COOH大黃素R1=CH3R2=OH蘆薈大黃素R1=CH2OHR2=H大黃素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黃酚R1=CH3R2=H實(shí)

2、驗(yàn)器材：試藥：大黃粗粉、牛黃上清丸、含水氯仿（水飽和）、甲醇、乙醚、20%硫酸溶液、冰醋酸、5%碳酸氫鈉溶液、5%碳酸鈉溶液、0.25%氫氧化鈉溶液、5%氫氧化鈉溶液、鹽酸、丙酮、乙酸乙酯、醋酸鎂、柱層析用硅膠（100～200目）、硅膠-CMC硬板、石油醚（沸程60-90℃）-乙酸乙酯（15∶1）、石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶5∶1）等儀器：回流裝置一套、蒸發(fā)皿、層析槽、試管、梨形分液漏斗、水浴鍋、電爐、薄層板、點(diǎn)樣毛細(xì)管等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法：一、游離蒽醌的提取稱(chēng)取大黃粗粉50g，加20%硫酸溶液50ml，充分?jǐn)嚢杌靹?，加氯?00ml，熱水浴上回流提取1小時(shí)，過(guò)濾得氯仿濾液。藥渣繼用氯

3、仿200ml回流1小時(shí)，過(guò)濾，合并兩次氯仿提取液于圓底燒瓶中，加沸石數(shù)粒，水浴上蒸餾回收氯仿至200毫升（可減壓抽干氯仿）。二、PH梯度萃取分離1.大黃酸的分離和精制：將含有總蒽醌的氯仿液放入分液漏斗中，加5%碳酸氫鈉溶液萃取數(shù)次（每次20～30m1），至萃取堿水液呈淡紅色為止。合并萃取堿液，加鹽酸至呈酸性（PH2～3），析出黃色沉淀。過(guò)濾，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性。干燥后加冰醋酸10ml加熱溶解，趁熱過(guò)濾，濾液放置析晶，過(guò)濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶，得黃色針狀結(jié)晶為大黃酸。2.大黃素的分離和精制：用碳酸氫鈉液萃取后的氯仿液加5%碳酸鈉溶液萃取數(shù)次（每次20～30m1），（方法同

4、上述碳酸氫鈉溶液的處理）。萃取液經(jīng)酸化后析出棕黃色沉淀，過(guò)濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀經(jīng)干燥后，用15ml丙酮熱溶，趁熱過(guò)濾，濾液靜置，析出橙色針狀結(jié)晶，過(guò)濾后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶，得大黃素。3.蘆薈大黃素的分離和精制：用碳酸鈉液萃取后的氯仿液加0.25%氫氧化鈉溶液萃取數(shù)次（每次20～30m1），（方法同上述碳酸氫鈉溶液的處理）。萃取液經(jīng)酸化后析出黃色沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。4.大黃酚和大黃素甲醚的分離和精制：萃取除去蘆薈大黃素后余下的氯仿層，再用5%氫氧化鈉溶液200ml分兩次萃取，至堿水液呈無(wú)色為止，合并堿水層，加鹽酸至

5、呈酸性（PH2～3），析出黃色沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚的混合物。將此混合物溶于乙酸乙酯，用硅膠柱色譜分離。5.柱層析法分離大黃酚和大黃素甲醚（1）裝柱取一玻璃層析柱，垂直固定在鐵架臺(tái)上，在管的下端墊入少量棉花，裝入100～200目硅膠（約1/3高，濕法裝柱）。（2）上樣將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅膠拌和均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。（3）洗脫將色譜柱活塞打開(kāi)，洗脫劑為石油醚（沸程60-90℃）-乙酸乙酯（15∶1）混合液。（4）收集洗脫液25ml一份，分別收集，回收溶劑至小體積，放

6、置，即可析出結(jié)晶，合并相同晶形部分。先洗脫下的化合物為大黃酚，后洗脫下的化合物為大黃素甲醚。三、鑒定1、蒽醌類(lèi)成分化學(xué)鑒定（1）堿液試驗(yàn)分別取各蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克置于小試管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml，觀察顏色變化。凡有互為鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍(lán)紫至藍(lán)色，其它羥基蒽醌呈紅色。（2）醋酸鎂試驗(yàn)分別取蒽醌結(jié)晶數(shù)毫克，置于小試管中，各加乙醇1ml使溶解，滴加0.5%醋酸鎂乙醇溶液，觀察顏色變化。2、薄層層析檢識(shí)對(duì)照品的處理：取牛黃上清丸制劑（含大黃）3克,切碎,加甲醇50m1冷浸24小時(shí),過(guò)濾,取濾液5m1蒸干,殘?jiān)铀?0m1使溶解,加鹽酸1m1,置水浴上加熱30分鐘,冷卻,用乙醚20m1分

7、兩次萃取,合并乙醚液,蒸干,殘?jiān)右宜嵋阴ナ谷芙獬?m1,為供試品溶液。吸附劑：硅膠G-CMC-Na板展開(kāi)劑：石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸（15∶5∶1）上層溶液點(diǎn)樣：提取的大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的醇溶液及處理后的牛黃上清丸的醇溶液顯色劑：自然光下觀察，記錄黃色斑點(diǎn)出現(xiàn)的位置，然后再用濃氨氣熏或噴5%醋酸鎂甲醇溶液，斑點(diǎn)顯紅色。觀察記錄：記錄圖譜并計(jì)算Rf值。