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《大黃中蒽醌類(lèi)成分的提取、分離和鑒定.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、大黃中游離蒽醌類(lèi)成分的提取、分離與鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握蒽醌苷元的提取方法--雙相酸水減法2.掌握梯度PH萃取法提取分離大黃中各種蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羥基蒽醌類(lèi)化合物的顏色反應(yīng)及薄層色譜鑒別方法二、實(shí)驗(yàn)原理1.提取原理雙向酸水解法，為一相與酸水不相互溶的有機(jī)溶劑，另一相為酸水，加熱回流水解的方法。由于大黃中的羥基蒽醌類(lèi)化合物多以苷的形式存在，所以首先要將苷水解成苷元，本實(shí)驗(yàn)選用硫酸和乙酸乙酯作為雙向酸水解的溶劑，采用加熱回流方法，提取大黃藥材中的游離蒽醌類(lèi)化合物。根據(jù)苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，即在加熱回流提取過(guò)程中，稀硫酸可將蒽醌苷元水
2、解成苷元，游離出來(lái)的蒽醌苷元隨即溶于乙酸乙酯中，從而將蒽醌苷元提取出來(lái)。2.分離原理pH梯度萃取法羥基蒽醌類(lèi)化合物酸性強(qiáng)弱不同，用pH梯度法進(jìn)行分離。具有羧基或多個(gè)β位酚羥基的蒽醌可溶于5%碳酸氫鈉溶液；具有一個(gè)β位酚羥基的蒽醌可溶于5%碳酸鈉溶液；只具有α位酚羥基的蒽醌，酸性弱，只溶于氫氧化鈉溶液。以分離酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游離蒽醌的極性不同，采用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。（1）大黃中游離蒽醌的酸性強(qiáng)弱順序大黃酸（-COOH）＞大黃素（β酚-OH）＞蘆薈大黃素（醇-OH）＞大黃素甲醚（-OCH3）≈大黃酚（-CH3）（2）大黃中游離蒽醌的極性大小順序大黃酸＞大黃素＞蘆薈大黃素
3、＞大黃素甲醚＞大黃酚大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，但極性不同，可用硅膠柱色譜法進(jìn)行分離。三、實(shí)驗(yàn)方法1.總蒽醌苷元的提取、分離工藝流程大黃藥材（粗粉）50g加20%H2SO4100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷過(guò)濾乙酸乙酯提取液藥渣去除下層酸水層，再用蒸餾水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯層pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml）堿水層乙酸乙酯層滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，放置5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黃色結(jié)晶或黃色絮狀沉淀）堿水層乙酸乙酯層沉淀過(guò)濾，冰醋酸精制滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，放置0.2
4、5%NaOH溶液萃黃色結(jié)晶（大黃酸）沉淀物（橙色結(jié)晶或取三次（40ml/次）橙色絮狀沉淀）沉淀過(guò)濾，堿水層乙酸乙酯層丙酮精制滴加濃鹽酸，調(diào)5%NaOH溶液萃橙色結(jié)晶（大黃素）節(jié)pH=2，放置取三次（40ml/次）沉淀物調(diào)pH=2,沉淀過(guò)濾（橙色絮狀沉淀）黃色沉淀物乙酸乙酯層沉淀過(guò)濾，乙酸乙酯精制硅膠柱色譜黃色針晶洗脫劑為石油醚（60-90℃）（蘆薈大黃素）-乙酸乙酯（15：1）大黃酚和大黃素甲醚混合物2.總蒽醌苷元的提取大黃粗粉50g，置500ml燒瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后過(guò)濾，殘?jiān)鼦壢?，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸?/p>
5、層，乙酸乙酯提取液用蒸餾水洗2次（20ml/次），將乙酸乙酯放置在錐形瓶中，密封。3.游離蒽醌的分離和精制（1）將乙酸乙酯提取液置500ml分液漏斗中，用5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml），合并堿液，在攪拌下滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，放置，待沉淀析出完全后，過(guò)濾，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，得深褐色粉末，主為大黃素。沉淀干燥后，樣品加冰醋酸10ml加熱溶解，趁熱過(guò)濾，濾液放置析晶，過(guò)濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶，得黃色針晶為大黃酸。（2）大黃素的分離和精制經(jīng)NaHCO3溶液提取的乙酸乙酯液，繼用5%NaHCO3萃取三次，每次用量40ml，合并
6、酸堿，在攪拌下滴加濃鹽酸，調(diào)節(jié)pH=2，析出棕黃色沉淀，抽濾，水洗沉淀物至洗出液呈中性，60℃干燥，沉淀經(jīng)干燥后，用15ml丙酮熱熔，趁熱過(guò)濾，濾液靜置，析出橙色針晶，過(guò)濾后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶，得大黃素。（3）蘆薈大黃素的分離和精制經(jīng)Na2CO3提取過(guò)的乙酸乙酯液，再用0.25%NaOH溶液提取三次，每次用量40ml，合并后的堿液同（1）法處理。萃取液經(jīng)酸化后析出黃色沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黃色針晶的蘆薈大黃素。（4）大黃素甲醚和大黃酚混合物的分離和精制萃取除去蘆薈大黃素后余下的乙酸乙酯層，再用5%NaOH溶液萃取多次（每次100ml），至堿水液呈
7、無(wú)色為止，合并堿水層，加鹽酸至呈酸性（pH2~3），析出黃色沉淀，過(guò)濾，水洗至中性，干燥，為大黃酚和大黃素甲醚的混合物。將此混合物溶于乙酸乙酯，用硅膠柱色譜分離。（5）柱層析分離大黃酚和大黃素甲醚?裝柱取一玻璃層析柱，垂直固定在鐵架臺(tái)上，在管的下端墊入少量棉花，裝入100~200目硅膠（約1/3高，濕法裝柱）。?上樣將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅膠拌和均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。?洗脫將色
