白毒鵝膏菌漆酶的產(chǎn)酶條件、酶學(xué)性質(zhì)及用于染料脫色的研究.pdf

《白毒鵝膏菌漆酶的產(chǎn)酶條件、酶學(xué)性質(zhì)及用于染料脫色的研究.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、大學(xué)生科研論叢理論研究第一期白毒鵝膏菌漆酶的產(chǎn)酶條件、酶學(xué)性質(zhì)及用于染料脫色的研究于濤王方忠董翠玲徐國(guó)英（海洋學(xué)院2004級(jí)本科生）指導(dǎo)教師：朱啟忠摘要：從威?，旂焐缴喜杉拇笮驼婢泻Y選出漆酶高產(chǎn)菌株白毒鵝膏菌。對(duì)其產(chǎn)漆酶最適培養(yǎng)條件、漆酶的分離純化、動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、染料的脫色等方面進(jìn)行了研究。培養(yǎng)與產(chǎn)酶條件的單因素和正交試驗(yàn)分析表明：麩皮20g/L，酵母膏5g/L，裝液量1/5，溫度25℃，培養(yǎng)8d時(shí)產(chǎn)酶活達(dá)到最高，為365u／mL。經(jīng)鹽析、透析、纖維素離子交換和凝膠過(guò)濾四步純化，粗酶液被純化了22.03倍，比活力達(dá)23

2、0.59u/mg，酶活回收率達(dá)22.02%。測(cè)定了該酶的基本酶學(xué)性質(zhì)，最適pH和最適反應(yīng)溫度分別為4.6和20℃，在pH5.0-5.4和低于60℃時(shí)有較好的穩(wěn)定性，以鄰聯(lián)甲苯胺為底物的表觀Km值為66.7μmol/L；Ba2+、Cu2+、、SO42-離子對(duì)漆酶有激活作用，而Ag2+、Cl—、Fe3+離子則有抑制作用。研究表明白毒鵝膏菌漆酶能使7種工業(yè)染料脫色，其中直接黑G和中性黃GL在pH值5、溫度30℃條件下，5U/mL的漆酶與直接黑G和中性黃GL反應(yīng)的Km值分別為3.2mg/L和25.1mg/L，Vmax值分別為2.

3、70mg/L*m和3.25mg/L*min。關(guān)鍵詞:漆酶；白毒鵝膏菌；培養(yǎng)條件；酶學(xué)性質(zhì)；染料脫色漆酶(對(duì)苯二酚:氧氣氧化還原酶，E.C.1.10.3.2)是一種多銅酶，它是藍(lán)色氧化酶家族中的一員。[1]催化多種芳香族化合物特別是酚類(lèi)的氧化，并且伴隨著分子氧還原為水。現(xiàn)在已經(jīng)在植物、真菌、昆蟲(chóng)和細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)具有漆酶活性的多銅氧化酶，并且主要見(jiàn)于真菌。有關(guān)研究表明，真菌漆酶是一種胞外糖蛋白，分子量大約在60-85kDa之間。其中10-30%是碳水化合物[1][2]。在白腐菌中漆酶通常以多重基因編碼的同工酶的形式產(chǎn)生。不同來(lái)源

4、的真菌漆酶，在分子量、對(duì)溫度和pH的適應(yīng)性以及耐受能力、酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等特征方面都有一定的差異，這些差異不僅表現(xiàn)在異種微生物之間，以及在同種微生物的不同菌株之間，也表現(xiàn)在同株微生物漆酶的同工酶之間。[3][4][5]漆酶是一種能夠應(yīng)用于一系列不同工業(yè)反應(yīng)如生物燃料電池、生物傳感器、紙漿漂白、作為酶標(biāo)[6][7][8]反應(yīng)中的標(biāo)簽、具有生物修復(fù)功能、綠色有機(jī)物質(zhì)的合成等，具有十分吸引人的應(yīng)用前景?，F(xiàn)在的研[9]究熱點(diǎn)包括高產(chǎn)漆酶菌株的篩選和對(duì)新的漆酶的研究、酶的結(jié)構(gòu)研究、闡明蛋白內(nèi)電子轉(zhuǎn)移和氧還原為[10][11]水的機(jī)制、

5、漆酶的電化學(xué)性質(zhì)等等。在漆酶的應(yīng)用研究中，漆酶的染料脫色作用尤為引人注目。據(jù)最新資料統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年印染廢水排放[12]量，占總工業(yè)廢水排放量的35%，己成為危害最大的難以治理的重要污染源.許多染料在厭氧的環(huán)境下會(huì)[13-14]轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)或致癌物質(zhì)。由于染料自身特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，往往不能有效地被凝結(jié)、臭氧、活性炭[15-16][17]等單一技術(shù)處理。生物處理法由于綠色環(huán)保、運(yùn)行成本低，且可獲得較高的脫色率，成為當(dāng)前印染廢水脫色研究的熱點(diǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)漆酶的研究多集中在彩絨革蓋菌和毛栓菌等白腐菌漆酶，而對(duì)白毒鵝膏菌漆酶的

6、研究還未見(jiàn)報(bào)道。作者從瑪珈山夏季常見(jiàn)大型真菌中篩選到一株非白腐菌漆酶高產(chǎn)菌株——白毒鵝膏菌（Amanitaverna(Bull.:Fr.)Pers.exVitt），本文報(bào)道了該菌產(chǎn)生漆酶的條件，漆酶的純化、酶學(xué)性質(zhì)及對(duì)染料的脫色作用，這對(duì)進(jìn)一步開(kāi)發(fā)漆酶資源具有積極意義。一、材料與方法(一)材料1、菌種:白毒鵝膏菌（Amanitaverna(Bull.:Fr.)Pers.exVitt）由作者采自威海市瑪珈山上并經(jīng)組織培養(yǎng)分離而來(lái),經(jīng)培養(yǎng)鑒定為白毒鵝膏菌,測(cè)定發(fā)現(xiàn)具有較高的漆酶產(chǎn)生能力。2、試劑:鄰聯(lián)甲苯胺（上?；瘜W(xué)試劑總廠

7、分析純）；其它化學(xué)試劑均為分析純或化學(xué)純。本文發(fā)表于《河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》ISSN1673-2383CN41-1378/N第3期，第52-56頁(yè)大學(xué)生科研論叢理論研究第一期3、儀器:722E型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)，SL-Ⅱ數(shù)控層析冷柜。4、液體培養(yǎng)基:馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2P043g/L，MgSO41.5g/L，VB10.01g/L，酵母膏5g/L。5、綜合馬鈴薯固體培養(yǎng)基:1.1.4中的液體培養(yǎng)基去掉酵母膏，加入瓊脂20g/L。（二）方法1、培養(yǎng)方法250mL三角瓶中裝

8、液體培養(yǎng)基50mL.接入6--7日齡平板菌種3片(l0mm)130r/min.28℃.恒溫振蕩培養(yǎng)。2、粗酶液制備在培養(yǎng)的第8d取樣.4000r/min離心15min，上清液即為粗酶液，冰箱保存?zhèn)溆?。[18]3、酶活測(cè)定0.lmol/LpH4.6的醋酸緩沖液3.5mL，加入3.36mmo1/L的鄰聯(lián)甲苯胺0.5mL，