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1、第12卷第10期中國食品學(xué)報(bào)Vo1．12No．102012年l0月JournalofChineseInstituteofFoodScienceandTechnologyOct．20l2豆豉纖溶酶組分S一7FE一1的酶學(xué)性質(zhì)及體外溶栓特性分析張雪袁洪水辛欣z朱寶成一(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院河北保定071001河北省保定市衛(wèi)生監(jiān)督所河北保定071ooo)摘要從分自豆豉中的空氣芽孢桿茵(Bacill~aerius)S-7菌株中分離出1個(gè)具有較高活性的纖溶酶組分S一7FE-1，對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)以及體外溶栓、抗凝溶血特性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示：S-7FE一1的最適作用溫度30oC，最適反應(yīng)pH8．0，在p
2、H4~9，4-50℃之間活性穩(wěn)定；Fe使S-7FE一1完全失活，而其它離子對(duì)其作用不明顯：EDTA對(duì)S-7FE一1的活性抑制作用較大，PMSF能完全抑制其活性，表明該酶可能是含金屬離子的絲氨酸蛋白酶。體外溶栓試驗(yàn)結(jié)果表明，其具有良好的溶栓及抗凝作用，不會(huì)引起溶血現(xiàn)象。關(guān)鍵詞豆豉纖溶酶；酶學(xué)性質(zhì)；體外溶栓；體外抗凝；體外溶血文章編號(hào)1009—7848(2012)10—0040—07血栓性疾病是一類嚴(yán)重危害人類，尤其是中、菌(Bacillusacrius)S-7菌株，通過液體培養(yǎng)產(chǎn)生老年人身體健康和生命的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織豆豉纖溶酶，經(jīng)鹽析、透析以及離子交換層析后得調(diào)查顯示，全世界血栓性疾病
3、患者不少于1500到豆豉纖溶酶S-7FE—l，對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)以及體外萬人ll】。臨床實(shí)踐表明通過飲食可以預(yù)防血栓性疾溶栓、抗凝和溶血進(jìn)行研究，以期為進(jìn)一步研究其病的發(fā)生。酶學(xué)性質(zhì)和開發(fā)利用提供依據(jù)。豆豉是我國的一種藥食兼用的傳統(tǒng)發(fā)酵豆制品，《漢書》和《本草綱目》都有入藥記載。現(xiàn)代藥學(xué)1材料實(shí)踐證明豆豉具有降低血液黏度。降血脂，降膽固1．1材料醇，改善血液循環(huán)狀況．維持血細(xì)胞的正常形態(tài)和空氣芽孢桿菌S一7菌株，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)制功能等多種生理功能【。藥工程實(shí)驗(yàn)室分離篩選1987年，日本學(xué)者須見洋行首次從類似我國1．2試劑豆豉的納豆中分離提取到具有溶栓功能的納豆激纖維蛋白原，凝血酶，尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品，
4、均為酶(Nattokinase)[8-91，并證明它是由納豆桿菌發(fā)酵Sigma公司生產(chǎn)；其余試劑為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純產(chǎn)生的，具有抗血栓，抗腫瘤，降血壓，抗菌等作級(jí)。玉米粉與黃豆餅粉均為市售產(chǎn)品。用【101。我國目前從豆豉中也分離出豆豉纖溶酶，是1．3培養(yǎng)基一種絲氨酸蛋白酶，可水解血液纖維蛋白凝同形斜面培養(yǎng)基(g／L)：蛋白胨1O．0，牛肉膏5．O，成的血栓為小肽及氨基酸。并篩選出產(chǎn)豆豉纖溶NaC15．0，瓊脂15～20，pH7．2～7．4。酶的菌株——枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)[11-131、種子培養(yǎng)基(g／L)：蛋白胨1O．0，葡萄糖10．0，解淀粉芽孢桿菌(Baci
5、llusamyloliquefacieus)及蠟Na2HPO4·12H204．0，NaH2PO4·2H2O2．0，Mg—狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)[14-151等，其中以枯草SO4·7H2O0．5，pH7．0～7．2，分裝50mL／250mL三芽孢桿菌的報(bào)道最多。角瓶。本試驗(yàn)中采用從豆豉中篩選出的空氣芽孢桿發(fā)酵培養(yǎng)基(g／L)：玉米粉5．0，葡萄糖5．0，豆餅粉20．0，K2HPO4·12H202．0，KH2PO4"2H2O1．0，收稿日期：2011-10—20MgSO~。7H201．5，CaC12·2H200．5，NaC11．0，pH基金項(xiàng)目：河北省教育廳科研項(xiàng)目(No．
6、2009123)7．5，分裝30mL／250mL三角瓶作者簡(jiǎn)介：張雪，女，1986年出生，碩士生第12卷第l0期豆豉纖溶酶組分S-7FE—l的酶學(xué)性質(zhì)及體外溶栓特性分析412試驗(yàn)方法2．3．2豆豉纖溶酶組分S一7FE一1最適作用溫度2．1樣品制備及對(duì)溫度穩(wěn)定性測(cè)定將S-7FE一1纖溶酶液分將菌株空氣芽孢桿菌S一7制成斜面菌種，接別在4，30，40，50，60，70，100℃下處理l0，20，30種于種子培養(yǎng)基，于37℃、200r／min恒溫旋轉(zhuǎn)搖min，1h，2h，用2．2節(jié)法測(cè)定各處理后的酶活性。床培養(yǎng)20h．檢測(cè)含菌量，作為發(fā)酵用種子液，接以未經(jīng)保溫的酶液活力為100％，計(jì)算相對(duì)酶活力
7、。種于發(fā)酵培養(yǎng)基中。置37℃、200r／min恒溫旋轉(zhuǎn)取S-7FE—l纖溶酶液1OL，點(diǎn)在纖維蛋白搖床培養(yǎng)48h。板孑L內(nèi)，分別于30，40，50，60，70℃培養(yǎng)，用2．2節(jié)將發(fā)酵液8000r／min離心去菌體，在上清液方法測(cè)定各處理后的酶活性。以未經(jīng)保溫的酶液中加入硫酸銨鹽j沂，取飽和度30％～60％之間的沉活力為100％，計(jì)算相對(duì)酶活力。淀，用少量0．0lmol／LTris—HC1(pH8．0)溶解，去另將酶溶液于
