固相萃取SPE技術(shù).doc

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1、固相萃取SPE技術(shù)一、固相萃取概念及基本原理：固相萃取(SolidPhaseExtraction,簡(jiǎn)稱SPE)是從八十年代中期開始發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)樣品前處理技術(shù)。由液固萃取和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái)。主要通過(guò)固相填料對(duì)樣品組分的擇性吸咐及解吸過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分離，純化和富集。主要目的在于降低樣品基質(zhì)干擾，提高檢測(cè)靈敏度。固相萃取的基本原理和方法：SPE技術(shù)基于液-固相色譜理論，采用選擇性吸附、選擇性洗脫的方式對(duì)樣品進(jìn)行富集、分離、純化，是一種包括液相和固相的物理萃取過(guò)程；也可以將其近似的看作一種簡(jiǎn)單的色譜過(guò)

2、程。固相萃取(SPE)是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品通過(guò)一吸附劑，保留其中被測(cè)物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量良溶劑洗脫被測(cè)物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測(cè)物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測(cè)物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測(cè)物質(zhì)。二、固相萃取方法的優(yōu)點(diǎn)相對(duì)于傳統(tǒng)的液液萃取法和蛋白沉淀法，固相萃取具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)：1.無(wú)需特殊裝置和材料,操作簡(jiǎn)單2.集樣品富集及凈化與一身，提高檢測(cè)靈敏度的最佳方法3.比液液萃取更快，

3、節(jié)省溶劑4.可自動(dòng)化批量處理5.重現(xiàn)性好三、固相萃取的分類固相萃取填料按保留機(jī)理分為：正相:Silica,NH2,CN,Diol,Florisil,Alumina反相：C18,C8,Ph,C4,NH2,CN,PEP,PS等離子交換：SCX,SAX,COOH,NH2等混合型：PCX,PAX,C8/SCX等按填料類型共分為4類：1．鍵合硅膠：C18(封端),C18-N(未端),C8,CN,NH2,PSA,SAX,COOH,PRS,SCX,Silica,Diol。在SPE中最常用的吸附劑是硅膠或鍵合相的硅膠即在硅膠

4、表面的硅醇基團(tuán)上鍵合不同的官能團(tuán)。其pH適用范圍2-8。鍵合硅膠基質(zhì)的填料種類較多，具有多選擇性的優(yōu)點(diǎn)。2．高分子聚合物：PEP,PAX,PCX,PS,HXN。3．吸附型填料：Florisil(硅酸鎂),PestiCarb(石墨化碳),氧化鋁(Alumina-N中性，Alumina-A酸性，Alumina-B堿性)。4．混合型及專用柱系列：PestiCarb/NH2，SUL-5(磺胺專用柱)，HXN(磺酰脲除草劑專用柱)，DNPH-Silica(空氣中醛酮類化合物檢測(cè)專用柱)三、固相萃取裝置及基本操作步驟關(guān)于

5、固相萃取小柱：常見的固相萃取柱分為三部分：醫(yī)用聚丙烯柱管，多孔聚丙烯篩板(20μm)和填料(多為40-60μm，80-100μm)。常用規(guī)格：100mg/1ml,200mg/3ml,500mg/3ml,1g/6ml等。以100mg/1ml為例，其中100mg為填料的質(zhì)量，1ml是空柱管的體積。一次性使用：為避免交叉污染，保證檢測(cè)可靠性，SPE柱通常是一次性使用的。針對(duì)填料保留機(jī)理的不同(填料保留目標(biāo)化合物或保留雜質(zhì))，操作稍有不同。如果填料保留目標(biāo)化合物，固相萃取操作一般有四步:活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造

6、一定的溶劑環(huán)境。上樣——將樣品用一定的溶劑溶解，轉(zhuǎn)移入柱并使組分保留在柱上。淋洗——最大程度除去干擾物。洗脫——用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)洗脫下來(lái)并收集。如果填料保留雜質(zhì)，固相萃取操作一般有三步：活化——除去柱子內(nèi)的雜質(zhì)并創(chuàng)造一定的溶劑環(huán)境。上樣——將樣品轉(zhuǎn)移入柱，此時(shí)大部分目標(biāo)化合物會(huì)隨樣品基液流出，雜質(zhì)被保留在柱上。故此步驟要開始收集。洗脫——用小體積的溶劑將組分淋洗下來(lái)并收集。合并收集液。此種情況多用于食品或農(nóng)殘分析中去除色素。五、SPE的展望鑒于SPE的優(yōu)點(diǎn)，該技術(shù)的應(yīng)用日益廣泛。據(jù)估計(jì)在以下幾個(gè)方面有

7、所發(fā)展：1.用球形硅膠或高聚物作為填料基質(zhì)和改進(jìn)合成方法，提高柱效和重現(xiàn)性。引進(jìn)新型選擇性高或特效性的填料和具有不同極性的新SPE；2.為了滿足各種試樣的不同要求，提高工作效率和使用方便，繼續(xù)完善和改進(jìn)柱構(gòu)型；3.以新材料和填料制備SPE裝置，減少空白中的雜質(zhì)，擴(kuò)大SPE在痕量分析中的應(yīng)用。