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1、·106·中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志2014年第24卷第2期doi：10．3969／j．issn．1005-0264．2014．02．016一種簡(jiǎn)便實(shí)用的大鼠Kupffer細(xì)胞的分離與鑒定方法姜雪強(qiáng)馮紅萍田德英1．湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院感染科(湖北十堰，442000)2．華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院感染科．摘要目的：研究一種簡(jiǎn)便實(shí)用的大鼠Kupffer細(xì)胞(KCs)的分離與鑒定方法。方法：原位兩步灌流法對(duì)大鼠肝臟進(jìn)行沖洗消化；利用Pereoll液進(jìn)行不連續(xù)密度梯度離心分離KCs；；選擇性貼壁純化KCs；臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞存活率；吞噬實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞功能；
2、ED1單克隆抗體免疫熒光細(xì)胞化學(xué)鑒定KCs；顯微鏡下觀察KCs形態(tài)變化。結(jié)果：獲取的KCs數(shù)量為(2．41±0．32)×10／只，其中活細(xì)胞數(shù)量占(92．3±2．12)％；吞噬實(shí)驗(yàn)顯示(95．2±2．58)％的細(xì)胞內(nèi)存在碳素顆粒；免疫熒光化學(xué)檢測(cè)證明KCs純度為(96．3-4-1．46)％；在顯微鏡下觀察KCs形態(tài)，36h細(xì)胞形態(tài)變得不規(guī)則，3d后呈星形或多角形，體外培養(yǎng)可以存活7—10d。結(jié)論：此種KCs分離方法操作相對(duì)簡(jiǎn)便，獲取的細(xì)胞數(shù)量、活性功能、純度等方面均能達(dá)到進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)要求，值得推廣。關(guān)鍵詞Kupffer細(xì)胞；細(xì)胞分離；細(xì)胞
3、鑒定AsimpleandpracticalmethodforisolatingandidentifyingratliverKupfercellsJIANGXue-qiang。，F(xiàn)ENGHong-ping，TIANDe—ying2．1．DepartmentofInfectiousDiseases，DongfengGeneralHospital，HubeiUniversityofMedicine(ShiyanHubei，442000)China2．TongfiHospital，HuazhongUnive~ityofSc&ceandTechno
4、logy(WuhanHubei，430022)ChinaAbstractObjective：TointroduceasimpleandpracticalmethodforisolatingandidentifyingratliverKupffercells(KCs)．Methods：Theliverwasperfusedanddigestedinsitubytwowaysofliverperfusion．DiscontinuousdensitygradeintcentrifugationinPercollwasusedtoisolatin
5、gKCs．KCswaspurifidebyselectiveadherence．UsingtrypanbluedyemethodtomeasureactivityofKCs，phagocytosisexperimentstofunction，ED1immunofluorescencecytoehemistrytopurity．MorphologicalchangesofKCswereobservedundermicroscope．Results：KCsactivitywasmeasured：thenumberofalivecellswas
6、(92．34-2．12)％．T0talamountofKCsisolatedineachratwas(2．41±0．32)×10inaverage．KCsphagocyticexperimentshowedthatthenumberofcells(95．24-2．58)％hadfunction．ED1immunofluorescenceeytoehemistrystainingshowedcellpuritywas(96．34-1．46)％．ThemorphologyofKCsbecameirregularafter36hours，spi
7、ndleorpolygonalafter3days．KCscouldkeepalive7—10daysinvitroculture．Conclusion：TheisolationmethodsofKCswasrelativelysimple．Theacquirecellswerequiteuptothestandareforfurtherexperimentsinquantity，activityandpurity．KeyWordsKupfercells；cellisolation；cellidentification肝臟Kupfer細(xì)胞
8、(KCs)是機(jī)體單核一巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的最兩步原位灌注法結(jié)合Precoll密度離心法成功分離了大鼠KCs，大組成分，數(shù)量約占80％一90％，在機(jī)體免疫、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定其純度活性功能均達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求，為相
