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1、培氟沙星抗體的制備 摘要：為了制備培氟沙星(PFLX)抗體，采用N-羥基琥珀酰亞胺活性酯法將培氟沙星分別與牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)，制備免疫抗原PFLX-BSA和檢測抗原PFLX-OVA，用PFLX-BSA免疫小鼠以獲得高效價的抗體。結(jié)果顯示，免疫抗原PFLX-BSA紫外光譜具有藥物和蛋白的疊加特性，其最大吸收峰在277.5nm處，說明載體蛋白BSA與PFLX成功偶聯(lián)，可用于動物免疫。檢測抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm處，說明載體蛋白OVA與PFLX成功偶聯(lián)，可用作檢測抗原進(jìn)行包被。間接EL
2、ISA檢測結(jié)果表明，所得小鼠抗血清效價較高，均達(dá)1∶32000以上，說明有特異性抗體產(chǎn)生。該研究成功制備了抗培氟沙星抗體，也進(jìn)一步證明藥物偶聯(lián)成功。 關(guān)鍵詞：培氟沙星；免疫；多克隆抗體 中圖分類號：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：0439－８11406－1222-03 ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＭｕｌｔｉｃｌｏｎｅＡｎｔｉｂｏｄｙｏｆＰＦＬＸ ＬＩＡＮＧＳｈｕ－ｚｈｅｎ，ＳＵＮＸｉｕ－ｍｅｉ，ＷＥＩＤｏｎｇ，ＧＵＯＹａｎ－ｃｈｕｎ ?。粒猓螅簦颍幔悖簦海裕铮穑颍铮洌酰悖澹恚酰欤簦椋悖欤铮睿澹幔睿簦椋猓铮洌铮妫?/p>
3、ＦＬＸ．ＰＦＬＸｗｅｒｅｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎａｎｄｏｖａｌｂｕｍｉｎｂｙｕｓｉｎｇＮ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅａｃｔｉｖｅｄｅｓｔｅｒｍｅｔｈｏｄｔｏｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｉｍｍｕｎｅａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＢＳＡａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＯＶＡ．ＴｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸ－ＢＳＡｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈｈｉｇｈｔｉｔｅｒ．Ｔｈｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｉｍｍｕｎｅａｎｔ
4、ｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＢＳＡｈａｄｔｈｅｓｔａｃｋｉｎｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｅｄｉｃａｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔｓｍａｘｉｍｕｍａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｗａｓ２７７．５ｎｍ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｖｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎＢＳＡｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｉｎａｎｉｍａｌｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．ＴｈｅｍａｘｉｍｕｎａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｐｅａｋｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎＰＦＬＸ－ＯＶＡｗａｓ２７５ｎｍ，ｉｎｄｉｃａ
5、ｔｉｎｇｖｅｃｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎＯＶＡｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄｗｉｔｈＰＦＬＸａｎｄｉｔｃｏｕｌｄｔａｋｅｎａｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｇｅｎｆｏｒｃｏａｔｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｉｎｄｉｒｅｃｔＥＬＩＳＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅａｎｔｉｓｅｒｕｍｔｉｔｅｒｓｏｆｍｉｃｅｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒａｎｄｒｅａｃｈｅｄｏｖｅｒ１∶３２０００，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｂｏｄｙｗａｓｐｒｏｄｕｃｅｄ．Tｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａ
6、ｉｎｓｔＰＦＬＸｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｐｒｅｐａｒｅｄ，ｗｈｉｃｈｆｕｒｔｈｅｒｐｒｏｖｅｄｔｈａｔＰＦＬＸｗｅｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｕｐｌｅｄ． ?。耍澹鳎铮颍洌螅簆ｅｆｌｏｘａｃｉｎ；ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ；ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ 氟喹諾酮類藥物是一類廣譜高效抗菌藥，幾乎適用于臨床常見的各種細(xì)菌感染性疾病。但由于該類藥物的廣泛應(yīng)用，且常伴有不合理用藥和濫用藥情況的發(fā)生，因ＦＱs殘留而產(chǎn)生的不良反應(yīng)問題越來越多。ＦＱs殘留不但對人體有直接的危害，如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿
7、系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)的不良反應(yīng)、皮膚過敏反應(yīng)及光敏反應(yīng)、軟骨毒性、生殖毒性、跟腱炎等［１］，更為嚴(yán)重的是動物性食品中較低濃度的藥物殘留通過食物鏈向人類傳播，容易誘導(dǎo)人類致病菌對其耐藥性的增強(qiáng)，從而不利于該類藥物在人類疾病的治療［２，３］。同時，耐藥菌株傳遞所帶來的危害性，使新開發(fā)的ＦＱs類藥品的市場周期大大縮短，并且已發(fā)現(xiàn)某些ＦＱs具有潛在致癌性［４］。ＦＱs在動物性食品中的殘留及耐藥性問題已引起世界各國的普遍重視。一些國家、地區(qū)或組織對ＦＱs的使用和最高殘留限量都做了規(guī)定，因此，檢測與監(jiān)控ＦＱs的殘留，必須要建立一種高效、快速、靈敏
8、度高的檢測方法。 本研究以ＰＦＬＸ為研究對象，通過Ｎ－羥基琥珀酰亞胺活性酯法［５］將ＰＦＬＸ藥物分別與牛血清白蛋白偶聯(lián)制備免疫抗原，與卵清白蛋白偶聯(lián)制備檢測抗原。對合成的完全抗原，分別用紫外光譜掃描進(jìn)行理化鑒定，用間接ＥＬＩＳＡ進(jìn)行免疫學(xué)鑒定，用ＰＦＬＸ－ＢＳ
