使用OxytonaISSR分子標(biāo)記罌粟的分子特征.doc

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1、使用OxytonaISSR分子標(biāo)記罌粟的分子特征摘要：大紅罌粟第OxytonaBernh種，屬于罌粟屬，廣泛存在于土耳其本土植物。它們含有的高生物堿含量具有重要商業(yè)價(jià)值。因?yàn)槔浰趯俨糠諳xytona也有類似的形態(tài)特征，所以不容易區(qū)分這些種類。我們使用的跨簡單重復(fù)序列（ISSR）分子標(biāo)記系統(tǒng)，以確定本節(jié)的分子特征。在這項(xiàng)研究中，從土耳其的5個(gè)不同地區(qū)收集到180個(gè)品種，用20個(gè)ISSR引物就行研究。共獲得82條帶，其中80為多態(tài)。平均遺傳距離是0.35，香農(nóng)指數(shù)為0.50，多態(tài)率為96.97％。引物AT10數(shù)目帶最少，而引物AT19和AT3擁有最大數(shù)量。總之，ISSR標(biāo)記系統(tǒng)可以用于

2、第Oxytona分類。關(guān)鍵詞：罌粟；Oxytona；ISSR；分子標(biāo)記；系統(tǒng)發(fā)育1引言土耳其是許多物種基因起源的地方。屬于罌粟科的物種分布在北半球。有世界各地50類群和110種罌粟在土耳其自然生長。罌粟有許多種類，包括多年生草本植物，由大紅罌粟石斛，葒體育L.和P.偽東方。他們的生物堿含量十分的重要，如可待因和蒂巴因。罌粟屬是一年生植物，因?yàn)樗膯岱群涂煽ㄒ虻暮扛咭虼丝梢陨虡I(yè)化種植的，而大紅可以生產(chǎn)生物堿蒂巴因，它可以轉(zhuǎn)化為某些阿片鎮(zhèn)痛藥，如可待因，嗎啡酮，羥考酮。屬于第Oxytona物種可以利用形態(tài)學(xué)，細(xì)胞學(xué)，植物化學(xué)來區(qū)分，但區(qū)別并不總是很清楚。部分Oxytona是多倍體的結(jié)

3、構(gòu)。P.大紅是二倍體（2N=14），P.葒是四倍體（為2n=28）和P偽東方是異源六倍體（為2n=42）。據(jù)報(bào)道，罌粟往往是非法種植的。園林植物與體育葒混合種植，區(qū)分P.大紅，P.葒和P偽東方在增長其營養(yǎng)階段是困難的。以前形態(tài)學(xué)觀察變化與染色體數(shù)目包括花色，花瓣上，苞片黑的斑點(diǎn)，葉分析的基礎(chǔ)上的變化。然而，在罌粟種間的形態(tài)學(xué)和化學(xué)分類學(xué)特征方面的歧視仍然存在一些問題因?yàn)榄h(huán)境條件可能會(huì)影響他們的各種特性，以及種間雜交（米洛等，1988;奧亞拉等，1990;利維和米洛，1991）。因?yàn)樗鼈兊奈锓N特異性的重要性，因此能正確識(shí)別物種非常重要。遺傳多樣性是在不同的地區(qū)加入提供這種多樣性可以大

4、大有助于高效種質(zhì)資源的管理和利用的發(fā)展戰(zhàn)略之間的遺傳關(guān)系的植物育種計(jì)劃的知識(shí)很重要。形態(tài)特征的測量是其中估計(jì)物種的遺傳多樣性的一種方法。他們是常用的參數(shù)，因?yàn)樗鼈兲峁┝肆炕倪z傳變異，同時(shí)評(píng)估基因型表現(xiàn)相關(guān)生長環(huán)境的一個(gè)簡單的技術(shù)。然而，評(píng)估形態(tài)特征是密集和植物的表型可塑性使得環(huán)境變化的一個(gè)主要問題。簡單重復(fù)序列（ISSR）標(biāo)記聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）使用單一的擴(kuò)增引物微衛(wèi)星基序?yàn)槟繕?biāo)的簡單序列的子集組成的重復(fù)為基礎(chǔ)。固態(tài)繼電器，或微衛(wèi)星和ISSR分析已確認(rèn)為分子標(biāo)記輔助選擇有用的分子標(biāo)記，遺傳多樣性，種群遺傳分析，可以用在不同品種的其他用途分析。然而，這種標(biāo)記系統(tǒng)從未使用過的罌粟

5、節(jié)Oxytona的遺傳特征。本研究的目的是確定在第Oxytona的遺傳多樣性。其中地理來源，染色體數(shù)目和分子標(biāo)記數(shù)據(jù)的相關(guān)性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。2材料與方法2.1植物材料共有180種質(zhì)第Oxytona在這項(xiàng)研究中使用。葒體育和P.偽東方種質(zhì)采自埃爾津詹省，錫瓦斯，通杰利，和尼代的野外植物，保藏號(hào)為分別99，23，135，。四個(gè)大紅罌粟品種都來自農(nóng)業(yè)部的安卡拉大學(xué)學(xué)院。所有品種都根據(jù)染色體數(shù)目計(jì)算，他們歸納為4P.烏飯，P.50葒，106P.偽東方，和20個(gè)未知種質(zhì)。將植物種植在Gaziosmanpa?a大學(xué)的研究領(lǐng)域。2.2DNA的提取從180個(gè)品種提取新鮮的嫩葉?？侱NA采用Fermen

6、tas公司的基因組DNA提取試劑盒隔離DNA制備物以1％瓊脂糖凝膠電泳定量。用100的終濃度納克mL-1的分離的DNA用于PCR分析2.3ISSR分析二十個(gè)ISSR引物（AT1-AT20通用引物）是從?ontek（?ontek有限公司，土耳其）獲得。每次25毫升PCR反應(yīng)含20納克基因組DNA模板，10X緩沖液無鎂（BioBasic，加拿大），20毫米硫酸鎂10毫米的dNTPs，1單位TaqDNA聚合酶（Promega公司，美國），和0.4微米每個(gè)ISSR引物。PCRamplificationswere在阿波羅儀表ATC401梯度熱循環(huán)儀進(jìn)行。在94℃下進(jìn)行PCR擴(kuò)增程序?yàn)?分鐘，

7、接著進(jìn)行40個(gè)循環(huán)：94℃30秒，在42-63℃下進(jìn)行60秒，并在72℃持續(xù)2分鐘。最后，該過程被延長為72℃7分鐘。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行表征于1％瓊脂糖凝膠（浸漬）在120伏2.5小時(shí)，可視化用溴化乙錠（0.5克/毫升）在UV光下，然后使用凝膠-邏輯200影像系統(tǒng)（伊斯曼-柯達(dá)公司，美國）拍照。ISSR分子片段的大小是由使用1kb的DNA梯（SibEnzymeM11，美國）為標(biāo)準(zhǔn)估算。3.結(jié)果二十個(gè)ISSR引物對(duì)180種質(zhì)進(jìn)行分析。ISSR引物產(chǎn)生82條帶，平均每個(gè)引物擴(kuò)增