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1、RNA的生物合成RNABiosynthesis(Transcription)轉(zhuǎn)錄(transcription)是生物體以DNA為模板合成RNA的過(guò)程。轉(zhuǎn)錄RNADNA參與轉(zhuǎn)錄的物質(zhì):原料:NTP(ATP,UTP,GTP,CTP)模板:DNA酶:RNA聚合酶(RNApolymerase,RNA-pol)其他蛋白質(zhì)因子轉(zhuǎn)錄的模板DNA分子上轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段,稱為結(jié)構(gòu)基因(structuralgene)。轉(zhuǎn)錄的這種選擇性稱為不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄(asymmetrictranscription),它有兩方面含義:在DNA分子雙鏈上,一股
2、鏈用作模板指引轉(zhuǎn)錄,另一股鏈不轉(zhuǎn)錄;其二是模板鏈并非總是在同一單鏈上。5′···GCAGTACATGTC···3′3′···cgtgatgtacag···5′5′···GCAGUACAUGUC···3′N······Ala·Val·His·Val······C編碼鏈模板鏈mRNA蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯DNA雙鏈中按堿基配對(duì)規(guī)律能指引轉(zhuǎn)錄生成RNA的一股單鏈,稱為模板鏈(templatestrand),也稱作有意義鏈或Watson鏈。相對(duì)的另一股單鏈?zhǔn)蔷幋a鏈(codingstrand),也稱為反義鏈或Crick鏈。5?3?3?5?
3、模板鏈編碼鏈編碼鏈模板鏈結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄方向轉(zhuǎn)錄方向不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄RNA合成由RNA聚合酶催化(一)RNA聚合酶能直接啟動(dòng)RNA鏈的合成DNA依賴的RNA聚合酶催化合成RNA;RNA合成的化學(xué)機(jī)制與DNA依賴的DNA聚合酶催化DNA合成相似。(NMP)n+NTP→(NMP)n+1+PPiRNA延長(zhǎng)的RNADNA聚合酶在啟動(dòng)DNA鏈延長(zhǎng)時(shí)需要引物存在,而RNA聚合酶不需要引物就能直接啟動(dòng)RNA鏈的延長(zhǎng)。(二)原核生物RNA聚合酶由多個(gè)亞基組成核心酶(coreenzyme)全酶(holoenzyme)???????????轉(zhuǎn)錄起始階
4、段轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)階段真核生物具有3種不同的RNA聚合酶:RNA聚合酶Ⅰ(RNAPolⅠ)RNA聚合酶Ⅱ(RNAPolⅡ)RNA聚合酶Ⅲ(RNAPolⅢ)真核生物的RNA聚合酶RNA聚合酶和DNA的特殊序列——啟動(dòng)子(promoter)結(jié)合后,就能啟動(dòng)RNA合成。RNA聚合酶結(jié)合到DNA的啟動(dòng)子上起動(dòng)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄是不連續(xù)、分區(qū)段進(jìn)行的。每一轉(zhuǎn)錄區(qū)段可視為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位,稱為操縱子(operon)。操縱子包括若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因及其上游(upstream)的調(diào)控序列。5?3?3?5?結(jié)構(gòu)基因調(diào)控序列RNA-pol調(diào)控序列中的啟動(dòng)子是RNA聚合
5、酶結(jié)合模板DNA的部位,也是控制轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵部位。原核生物以RNA聚合酶全酶結(jié)合到DNA的啟動(dòng)子上而起動(dòng)轉(zhuǎn)錄,其中由σ亞基辨認(rèn)啟動(dòng)子,其他亞基相互配合。對(duì)啟動(dòng)子的研究,常采用一種巧妙的方法即RNA聚合酶保護(hù)法。RNA聚合酶保護(hù)法開(kāi)始轉(zhuǎn)錄TTGACAAACTGT-35區(qū)(Pribnowbox)TATAATPuATATTAPy-10區(qū)1-30-5010-10-40-205?3?3?5?RNA-pol辨認(rèn)位點(diǎn)(recognitionsite)5?5?RNA聚合酶保護(hù)區(qū)結(jié)構(gòu)基因3?3?用RNA聚合酶保護(hù)法研究轉(zhuǎn)錄起始區(qū)RNA聚合酶
6、全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合:一個(gè)典型的真核生物基因上游序列:5’3’調(diào)控序列TATA盒InrYYANYYTA-30+1TATAAA原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程TheProcessofTranscriptioninProkaryoteRNA聚合酶必須準(zhǔn)確地結(jié)合在轉(zhuǎn)錄模板的起始區(qū)域。DNA雙鏈解開(kāi),使其中的一條鏈作為轉(zhuǎn)錄的模板。一、轉(zhuǎn)錄起始需要RNA聚合酶全酶轉(zhuǎn)錄起始需解決兩個(gè)問(wèn)題:2.DNA雙鏈局部解開(kāi),形成開(kāi)放轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(opentranscriptioncomplex);1.RNA聚合酶全酶(?2????)與模板結(jié)合,形成閉合轉(zhuǎn)錄復(fù)
7、合體(closedtranscriptioncomplex);3.在RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng),形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物:RNApol(?2????)-DNA-pppGpN-OH3?轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物:5?-pppG-OH+NTP?5?-pppGpN-OH3?+ppi轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程:第一個(gè)磷酸二酯鍵生成后,σ亞基即從轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物上脫落,核心酶連同四磷酸二核苷酸,繼續(xù)結(jié)合于DNA模板上,酶沿DNA鏈前移,進(jìn)入延長(zhǎng)階段。二、原核生物的轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)時(shí)蛋白質(zhì)的翻譯也同時(shí)進(jìn)行1.?亞基脫落,RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu),與模板結(jié)合松
8、弛,沿著DNA模板前移;2.在核心酶作用下,NTP不斷聚合,RNA鏈不斷延長(zhǎng)。(NMP)n+NTP??(NMP)n+1+PPi轉(zhuǎn)錄空泡(transcriptionbubble):RNA-pol(核心酶)····DNA····RNA轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng):5?3?DNA原核生物轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的羽毛狀現(xiàn)象核糖體RNARNA聚合酶在同一DN