【同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)】優(yōu)質(zhì)課《病毒學(xué)》 第一章- 病毒學(xué)的發(fā)展歷程

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【同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)】優(yōu)質(zhì)課全國特級教師江新歡博士教授《病毒學(xué)》第一章病毒學(xué)基礎(chǔ)

1正常機(jī)體患病機(jī)體功能代謝形態(tài)研究角度不同研究對象不同病理學(xué)病理生理學(xué)生理學(xué)

2病例:陳××女63歲病史：五個月前胃疼，逐漸加重，服胃舒平、去痛片等稍見緩解。三個月前持續(xù)胃痛、胃脹、嘔吐，并有便血和嘔血。入院后體檢發(fā)現(xiàn)鎖骨上多個淋巴結(jié)腫大變硬，肝臟腫大。胃腸透視發(fā)現(xiàn)胃小彎側(cè)近幽門處有充盈缺損，B超顯示肝臟有多個大小不等強(qiáng)回聲團(tuán)。臨床采用化療和營養(yǎng)支持療法。以后患者逐漸消瘦、貧血，腹脹及腹水，并出現(xiàn)咳血、咳膿痰及呼吸困難等癥狀，X線顯示肺部多發(fā)散在、界限清楚的圓形病灶，多靠近胸膜，之間可見散在模糊片狀陰影。經(jīng)抗感染治療無效，入院后二個月死亡。

3解剖所見：身體極度消瘦，體重30kg。左鎖骨上淋巴結(jié)腫大。腹水2500ml，橙紅、半透明狀。????胃：胃小彎近幽門處有一橢圓形腫瘤，中央有一4cm×3cm之潰瘍，潰瘍邊緣不規(guī)整隆起，切面呈灰白色、質(zhì)硬，潰瘍底凸凹不平，有處見出血壞死。鏡下見大量腺樣細(xì)胞巢侵入粘膜下層、肌層及漿膜層。細(xì)胞異型性明顯，核分裂像多見。????肝臟：體積增大，表面及切面可見大小不一的灰白色結(jié)節(jié)，境界清楚。鏡下見結(jié)節(jié)內(nèi)為不規(guī)則腺樣細(xì)胞巢，細(xì)胞異型性明顯，可見核分裂像。????肺臟：表面及切面可見多發(fā)散在的灰白色結(jié)節(jié)，境界清楚，鏡下病變與肝臟內(nèi)結(jié)節(jié)相同。雙肺下葉還可見散在黃白色1cm左右實變病灶，鏡下見病灶內(nèi)細(xì)支氣管腔內(nèi)大量中性粒細(xì)胞及壞死滲出物，上皮細(xì)胞有壞死脫落，細(xì)支氣管周圍肺泡腔有中性粒細(xì)胞及液體滲出。????淋巴結(jié)：胃周邊淋巴結(jié)、腸系膜、大網(wǎng)膜、縱隔、肝門、肺門等處淋巴結(jié)腫大變硬，切面灰白，鏡下病變相同，正常淋巴結(jié)結(jié)構(gòu)破壞，內(nèi)見腺樣細(xì)胞巢。????卵巢：雙側(cè)均有多數(shù)灰白色大小不等結(jié)節(jié)。鏡下所見與肝臟內(nèi)結(jié)節(jié)相同。

4討論：1、此患者的臨床診斷、病理診斷和死亡原因？2、通過此例如何判斷腫瘤的良惡性？3、腫瘤對機(jī)體的危害有哪些表現(xiàn)？4、腫瘤的轉(zhuǎn)移方式有哪些？此例表現(xiàn)如何？

5疾病是一個極其復(fù)雜的過程。在病原因子和機(jī)體反應(yīng)功能的相互作用下，患病機(jī)體有關(guān)部分的形態(tài)結(jié)構(gòu)、代謝和功能都會發(fā)生種種改變，這是研究和認(rèn)識疾病的重要依據(jù)。如何學(xué)好病理學(xué)？教材是關(guān)鍵?。。e人我不告訴他?。?/p>

6認(rèn)識課本一、目錄二、學(xué)習(xí)資源——P163三、教學(xué)大綱——P164

7總論—多種疾病的共性，共同的病因、發(fā)生、發(fā)展、病變規(guī)律，為學(xué)好各論打好基礎(chǔ)。各論—闡明各種疾病各自的特殊規(guī)律，是學(xué)習(xí)某種疾病的特性。要學(xué)好病理學(xué)，必須總論與各論密切結(jié)合，理論與觀察標(biāo)本相結(jié)合，病理改變與臨床表現(xiàn)相結(jié)合。掌握疾病的特殊與一般、局部與整體、鏡下與大體、結(jié)構(gòu)與功能的辯證關(guān)系。

8用一種動態(tài)、變化、聯(lián)系和辨證的觀念學(xué)習(xí)，形態(tài)結(jié)構(gòu)、代謝功能、發(fā)病機(jī)制和對機(jī)體的影響是各章節(jié)的重點。注意總論和各論之間的關(guān)系。鉆入書本后要學(xué)會跳出來，用整體的觀念掌握書本的內(nèi)容。

9第一章緒論與疾病概論目的要求：1、熟悉病理學(xué)的任務(wù)；病理學(xué)的范圍及在醫(yī)學(xué)中的地位；病理學(xué)的研究方法及學(xué)習(xí)方法。2、熟悉疾病的概念、原因；疾病發(fā)展過程中的共同規(guī)律；疾病的經(jīng)過與結(jié)局。

10一、病理學(xué)及其任務(wù)（一）概念病理學(xué)(pathology):是研究疾病的病因、發(fā)病機(jī)制、病理變化（形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能、代謝）和轉(zhuǎn)化規(guī)律，從而闡明疾病本質(zhì)的一門醫(yī)學(xué)科學(xué)。。第一節(jié)緒論形態(tài)結(jié)構(gòu)功能代謝病變轉(zhuǎn)歸

11病理學(xué)既是醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科，同時又是一門實踐性很強(qiáng)的具有臨床性質(zhì)的學(xué)科，稱為診斷病理學(xué)或外科病理學(xué)。作用——是通過闡明疾病的本質(zhì)，為臨床診治和疾病預(yù)防提供了科學(xué)的理論依據(jù)。

12二、病理學(xué)的任務(wù)---為防治疾病提供理論依據(jù)。病因發(fā)病機(jī)制經(jīng)過轉(zhuǎn)歸形態(tài)結(jié)構(gòu)機(jī)能代謝的變化具體研究疾病的

13二、病理學(xué)的范圍及在醫(yī)學(xué)中的地位1、在基礎(chǔ)教育中占很重要地位，是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)之間的橋梁課。2、臨床病理學(xué)診斷是一級診斷，具權(quán)威性。“doctor’sdoctor”病理生理學(xué)——研究疾病功能代謝的改變。病理解剖學(xué)——研究疾病形態(tài)的改變。（病理學(xué)）病理學(xué)

14基礎(chǔ)課臨床課

15病理學(xué)的地位（與其他基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科的關(guān)系）內(nèi)科學(xué)外科學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)兒科學(xué)……橋梁學(xué)科生物學(xué)生物化學(xué)生物物理學(xué)解剖與組織胚胎學(xué)免疫學(xué)分子生物學(xué)生理學(xué)……

16三、病理學(xué)的研究方法及學(xué)習(xí)方法魯?shù)婪颉の籂枃[(RudolfVirchow）1821～1902德國病理學(xué)家、政治家和社會改革家。19世紀(jì)中葉魏爾嘯（P.Virchow）創(chuàng)立細(xì)胞病理學(xué)

17三、病理學(xué)的研究方法1、人體病理學(xué)研究方法1）尸體解剖（尸檢autopsy）對死者的遺體進(jìn)行病理剖驗。作用有：確定死因；發(fā)現(xiàn)某些特殊疾??；收集、積累各種疾病的病理資料；推進(jìn)器官移植手術(shù)的開展。

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19尸檢：１.取材方式:用器械從尸體2.優(yōu)點:直觀性3.缺點:不能反映病變動態(tài)變化過程。4.意義:(1)查明死因,明確診斷,協(xié)助臨床總結(jié)經(jīng)驗,提高診斷和治療水平。(2)積累大量人體病理材料。(3)幫助解決醫(yī)療糾紛。

202）活組織檢查（活檢biopsy）對活體組織采用局部切除、鉗取、針吸、搔刮等方法，進(jìn)行取材檢查。目的在于：在活體情況下對患者作出診斷；對術(shù)中患者作出診斷，協(xié)助選擇術(shù)式和手術(shù)范圍；隨診觀察病情，判斷療效；利于采用組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)等方法。

21?

22活體組織檢查：１.取材方式:用器械從活體2.優(yōu)點:組織新鮮,保真,有助于診斷3.缺點:取材受限4.意義:用于診斷和療效判斷,尤其是良惡性腫瘤的鑒別。?

233）細(xì)胞學(xué)檢查（細(xì)胞診cytology）采集病變部位自然分泌液、滲出物、排泄物或人工獲取的各種脫落細(xì)胞進(jìn)行染色觀察。(1)自然分泌物(2)體液及排泄物(3)穿刺針取(4)刮片、刷片

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25脫落cell學(xué)檢查：１.取材方式:2.優(yōu)點:3.缺點:4.臨床意義:從有腔器官或管道獲取簡便,損傷少準(zhǔn)確性不高協(xié)助診斷及普查

262、實驗病理學(xué)研究方法1）動物實驗通過復(fù)制人類疾病模型或動物自發(fā)性疾病，研究疾病的病因、發(fā)病和轉(zhuǎn)歸的規(guī)律。此外可進(jìn)行一些不宜在人體上進(jìn)行的研究。

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28動物實驗：１.方式:在動物上建立疾病模型2.優(yōu)點:彌補(bǔ)人體研究的不足3.缺點:不能直接套用

292）器官、組織和細(xì)胞培養(yǎng)將器官、組織或細(xì)胞在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)，研究不同病因作用下病變發(fā)生發(fā)展的過程。

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31四、病理學(xué)的觀察方法1、大體觀察大小、形態(tài)、重量、色澤、質(zhì)地、表面及切面狀況。

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332、組織學(xué)與細(xì)胞學(xué)觀察取病變組織制成切片或細(xì)胞學(xué)涂片，經(jīng)不同染色后用光鏡觀察。

34隨著社會的進(jìn)步，人類學(xué)習(xí)、工作、生活方式和環(huán)境有了改變，疾病的發(fā)生原因、種類也發(fā)生了很大的變化。因此，在學(xué)習(xí)病理學(xué)時，要以“生物-心理-社會”這一新的醫(yī)學(xué)模式去認(rèn)識疾病，去指導(dǎo)我們學(xué)習(xí)這一課程。

35第二節(jié)疾病概論疾病的概念、疾病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的普遍規(guī)律。健康與疾病是一組對應(yīng)的概念，至今尚無完整的定義，兩者間缺乏明確的判斷界限。

36不生病就是健康嗎？

37健康的定義：健康（health）是指軀體、精神和社會適應(yīng)上的完好狀態(tài)，而不僅是沒有疾病或虛弱。至少包含強(qiáng)壯的體魄和健全的心理精神狀態(tài)。表現(xiàn)為：精神飽滿、樂觀、勇于克服困難、事業(yè)性強(qiáng)、群眾關(guān)系良好。

387:30：起床。7:30―8:00：在早飯之前刷牙。8:00―8:30：吃早飯。8:30―9:00：避免運動。9:30：開始一天中最困難的工作。10:30：讓眼睛離開屏幕休息一下。11:00：吃點水果13:00：在面包上加一些豆類蔬菜。14:30―15:30：午休一小會兒。16:00：喝杯酸奶。17:00―19:00：鍛煉身體。19:30：晚餐少吃點。21:45：看會電視。23:00：洗個熱水澡。23:30：上床睡覺。你做到了嗎？

39三、亞健康是介于健康與疾病中的一種狀態(tài)，也成為第三狀態(tài)健康亞健康疾病處理得當(dāng)處理不當(dāng)

40其表現(xiàn)形式：軀體性~：疲乏無力，精神不振心理性~：煩躁易怒，失眠焦慮人際交往~：關(guān)系不穩(wěn)定，心理距離變大，孤獨感。

41販賣“亞健康”亞健康對人體危害極大，應(yīng)注意克服不良的生活習(xí)慣；調(diào)整好個人心態(tài)，適應(yīng)瞬息萬變的社會；及時消除疲勞，積極運動，提高身體健康素質(zhì)；有針對性地選用保健食品。

42亞健康健康疾病

43一、疾病的概念（一）疾?。╠isease）是機(jī)體在一定病因作用下，自穩(wěn)調(diào)節(jié)紊亂而導(dǎo)致的異常生命活動過程，也是機(jī)體在病因作用下所發(fā)生的損傷與抗損傷斗爭的過程。

44由于病因的侵入，機(jī)體發(fā)生自穩(wěn)調(diào)節(jié)的紊亂，導(dǎo)致?lián)p傷和抗損傷反應(yīng)，機(jī)體的功能、代謝和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生異常變化，而這些變化又可使機(jī)體各器官系統(tǒng)之間以及機(jī)體與外界環(huán)境之間的協(xié)調(diào)關(guān)系發(fā)生障礙，從而引起各種癥狀、體征和行為異常。

45什么是自穩(wěn)調(diào)節(jié)（內(nèi)穩(wěn)態(tài)，homeostasis）是指在多種調(diào)節(jié)機(jī)制的作用下，機(jī)體內(nèi)環(huán)境的理化性質(zhì)、各組織細(xì)胞及整體的功能與代謝保持相對穩(wěn)定的狀態(tài)為穩(wěn)態(tài)。.狹義的機(jī)體內(nèi)環(huán)境：細(xì)胞外液▲

46癥狀——指病人主觀上的異常感覺。如頭痛、頭暈、惡心、嘔吐等。體征——指疾病時，客觀檢查的異常變化。如肺部啰音、心臟雜音、肝大等。

47（二）病理過程在不同疾病中共同存在的機(jī)能、代謝，和形態(tài)變化的過程。如炎癥、發(fā)熱、缺氧、休克等。它們可以見于不同疾病，一個疾病可包含幾種病理過程。因此病理過程本身不是一個疾病，不會獨立存在，而是疾病的組成部分。

48疾病病理過程原因特定因素引起多種原因?qū)е路秶硇钥梢允蔷植恳部梢允侨硇韵嗷リP(guān)系包括多種病理過程是疾病的組成成分★疾病與病理過程的區(qū)別

49病因?qū)W（Etiology）研究疾病發(fā)生的原因和條件的科學(xué)。二、疾病的原因任何疾病都有原因。

501.生物性因素（biologicalfactors）2.理化因素（physicalandchemicalfactors）3.營養(yǎng)因素（nutritionalfactors）4.遺傳因素（geneticfactors）5.先天性因素（congenitalfactors）6.免疫因素（immunologicalfactors）7.社會、心理因素（socialandpsychologicalfactors）（一）疾病發(fā)生的原因（病因）病因（cause）:指引起疾病必不可少的、決定疾病特異性的因素（如結(jié)核桿菌、乙肝病毒等）。

51病因的分類生物性因素病原微生物和寄生蟲特點:有一定的入侵門戶和定位;病原體和機(jī)體相互作用是最常見的致病因子，致病力的強(qiáng)弱與其入侵機(jī)體的數(shù)量和侵襲力有關(guān)。全世界每年死亡的人約1/3因感染性疾病

52病因的分類理化因素——物理性因素機(jī)械力溫度氣壓電流電離輻射外傷、骨折凍傷、燒傷、中暑潛水員病電擊傷放射傷

53“反應(yīng)停”兒童（海豹肢）病因的分類理化因素——無機(jī)和有機(jī)化學(xué)毒物、藥物

54（三）營養(yǎng)因素各類必需或營養(yǎng)物質(zhì)缺乏或過剩。營養(yǎng)不良營養(yǎng)過剩

55病因的分類遺傳性因素基因突變?nèi)旧w異常舟舟，知名指揮家，出生于1978的愚人節(jié)。先天性愚型兒。智力只相當(dāng)于幾歲的小孩子。

56（五）先天性因素指妊娠期能損害胎兒生長發(fā)育的有害因素唇裂無腦兒

57(六）免疫因素◆過敏反應(yīng)（支氣管哮喘、蕁麻疹）◆自身免疫性疾?。ㄈ硇约t斑狼瘡、類風(fēng)濕）◆免疫缺陷病

58（七）精神、心理、社會因素應(yīng)激性疾病、變態(tài)人格、身心疾病緊張的工作不良人際關(guān)系情緒反應(yīng)

59心身疾?。╬sychosomaticdisease）：是指一組表現(xiàn)為軀體癥狀，但是其發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后等方面與心理、社會因素有密切關(guān)系的疾病。

60三、疾病發(fā)展過程中的共同規(guī)律疾病種類繁多。每一種疾病的發(fā)展過程都有其自己的規(guī)律，但不同的疾病卻有一些共同規(guī)律。掌握了疾病發(fā)展變化的規(guī)律，不僅可以了解當(dāng)時所發(fā)生的變化，而且可以預(yù)計它可能的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，及早采取有效的預(yù)防和治療措施。

61（一）疾病發(fā)生的條件（condition)指那些能夠影響疾病發(fā)生的機(jī)體內(nèi)外因素。如:營養(yǎng)不良?結(jié)核病;嬰幼兒?呼吸道傳染?。ㄕT因）—加強(qiáng)病因作用、促進(jìn)疾病發(fā)生發(fā)展的因素。（危險因素）—與某個疾病明顯相關(guān)，但暫時分不清是原因還是條件。

62是研究疾病發(fā)生、發(fā)展過程中的一般規(guī)律和共同機(jī)制。3大規(guī)律(Fourlaws)：1、損傷與抗損傷2、因果交替3、局部與全身的關(guān)系（二）發(fā)病學(xué)（Pathogenesis）

631、損傷與抗損傷（1）損傷和抗損傷反應(yīng)間并無嚴(yán)格界限；（2）矛盾的兩個方面；（3）動態(tài)變化過程。若損傷↑→疾病惡化或死亡若抗損傷↑→病因去除，功能代謝和形態(tài)結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，機(jī)體逐漸康復(fù)。在疾病過程中，損傷與抗損傷斗爭是推動疾病發(fā)展的基本動力，兩者的強(qiáng)弱決定疾病的發(fā)展方向和結(jié)局。

64異物單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)物理性屏障應(yīng)激狀態(tài)免疫反應(yīng)炎癥凝血化學(xué)解毒作用射線微生物應(yīng)激原致熱原致畸原致癌原創(chuàng)傷疾病的發(fā)展過程，就是損傷與抗損傷這一矛盾的斗爭過程。

652、因果交替(+)(-)進(jìn)一步的改變繼發(fā)另外的變化機(jī)體相應(yīng)變化原始病因在原始病因作用下，機(jī)體發(fā)生某些變化，這些變化又作為發(fā)病學(xué)原因，引起新的變化，因果不斷交替、推動疾病的發(fā)展。

66疾病中因果交替規(guī)律的發(fā)展，?？尚纬蓯盒匝h(huán)，從而使疾病不斷惡化，直到死亡。但如經(jīng)過恰當(dāng)?shù)闹委?，在疾病康?fù)的過程中也可形成良性循環(huán)，從而促進(jìn)機(jī)體的康復(fù)。在不同的疾病中以及在疾病的不同階段，因果交替的內(nèi)容是不同的。因此如果能及早采取措施在疾病發(fā)展的某一環(huán)節(jié)上打斷因果轉(zhuǎn)換和惡性循環(huán)，就可使疾病朝有利于康復(fù)的方向發(fā)展。

67因果交替外傷大出血心排出量↓回心血量↓血壓↓↓微循環(huán)淤血交感神經(jīng)興奮↓毛細(xì)血管開放微血管收縮組織缺血缺氧

68局部和整體顱內(nèi)感染敗血癥危險三角區(qū)癤內(nèi)眥靜脈上唇靜脈下唇靜脈面前靜脈

69腎性骨病糖尿病尿毒癥癤、癰

70序曲前奏高潮尾聲潛伏期前驅(qū)期臨床癥狀明顯期轉(zhuǎn)歸期疾病四、疾病的經(jīng)過與結(jié)局（一）疾病的分期

71（二）疾病的經(jīng)過與轉(zhuǎn)歸（抵抗力強(qiáng)）病因→機(jī)體（抵抗力弱）去除病因→不患病自穩(wěn)失衡功能代謝紊亂形態(tài)結(jié)構(gòu)改變癥狀、體征行為異常適應(yīng)力下降治療、抗損傷、病因去除→康復(fù)病情加重→死亡

72不完全康復(fù)：指疾病時損傷性變化得到控制，但基本病理變化尚未完全消失，經(jīng)機(jī)體代償后功能代謝恢復(fù)，主要癥狀消失，有時可留后遺癥。完全康復(fù)：指疾病時所發(fā)生的損傷性變化完全消失，機(jī)體的自穩(wěn)調(diào)節(jié)恢復(fù)正常。疾病的轉(zhuǎn)歸死亡康復(fù)生理性死亡：生命的自然終止，因各器官老化而發(fā)生的死亡。病理性死亡：因疾病而造成的病理性死亡。

73傳統(tǒng)死亡分為三個階段：瀕死期、臨床死亡期與生物學(xué)死亡期。瀕死期（臨終狀態(tài)）：患者腦干以上中樞神經(jīng)處于深度抑制狀態(tài)。體溫下降、意識模糊、血壓降低、心跳減弱和呼吸不規(guī)則等。臨床死亡期：患者延髓以上中樞神經(jīng)處于深度抑制狀態(tài)。心跳呼吸停止，但在一定時間內(nèi)（約5-6min）機(jī)體各組織仍進(jìn)行微弱的代謝。若及時搶救，特別是突然死亡患者，往往可挽救其生命。生物學(xué)死亡期：機(jī)體所有活動全部停止。臨床上出現(xiàn)尸冷、尸斑、尸僵并開始腐敗。這是不可逆階段。

74腦死亡成為判斷死亡的一個重要標(biāo)準(zhǔn)。死亡：是指機(jī)體作為一個整體的功能永久停止，但并不意味各器官組織同時均死亡。腦死亡：指腦干或腦干以上中樞神經(jīng)系統(tǒng)永久性地、不可逆性地喪失功能。無自主呼吸。植物人：腦干功能是正常的，昏迷只是由于大腦皮層受到嚴(yán)重?fù)p害或處于突然抑制狀態(tài)，病人可以有自主呼吸、心跳和腦干反應(yīng)。

75項目腦死亡植物狀態(tài)定義自主呼吸意識腦干反射恢復(fù)的可能性全腦功能喪失無喪失無無腦的認(rèn)知功能喪失有有睡眠—醒覺周期，但無意識有有

76鳳凰衛(wèi)視主持人劉海若美國女植物人特里·夏沃

77腦死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn)自主呼吸停止不可逆昏迷腦干神經(jīng)反射消失瞳孔散大或固定腦電波消失腦血流循環(huán)完全停止

78以腦死亡做為死亡標(biāo)志的意義（1）有利于準(zhǔn)確判斷死亡時間，節(jié)約醫(yī)藥資源；（2）確定終止復(fù)蘇搶救的界線；（3）為器官移植提供更多更好的供體。

79心跳停止呼吸停止各種反射消失臨床死亡的標(biāo)志

80對于醫(yī)生個體而言，要完成從：無情（針對實驗室器物）同情（針對救治現(xiàn)場痛苦）敬畏、悲憫（針對人類苦難）的精神境界“三級跳”

81課后作業(yè)：教材P5一、三補(bǔ)充：名詞解釋：誘因、康復(fù)、自穩(wěn)調(diào)節(jié)、心身疾病、健康問答題：1、何為活檢？與細(xì)胞學(xué)有何不同？2、舉例說明疾病中損傷和抗損傷相應(yīng)的表現(xiàn)和疾病發(fā)展中的意義？3、簡述腦死亡的診斷標(biāo)準(zhǔn)？4、病因與誘因的區(qū)別是什么？思考題：遺傳性疾病和先天性疾病的區(qū)別？

82ThankYou!

83第四節(jié)病毒的檢驗good

84常用的病毒檢驗方法包括：一、病毒的分離鑒定二、病毒感染性的檢測三、病毒顆粒檢測四、病毒的血清學(xué)檢查五、病毒的分子(蛋白和核酸)檢測

85一、病毒的分離鑒定病毒的分離與鑒定可為病毒感染提供最為直接的病原學(xué)證據(jù)，同時可為進(jìn)一步的病毒學(xué)研究提供材料。病毒的分離和鑒定（含義）：指從病人、帶毒者、外界環(huán)境中采集標(biāo)本經(jīng)過適當(dāng)?shù)奶幚?采用一系列物理、化學(xué)、生物學(xué)等手段,將病毒從標(biāo)本中分離出來,并通過有關(guān)特異性方法鑒定屬于何種病毒,這一方法稱為病毒的分離與鑒定。

86病毒的分離與鑒定包括：1、病毒材料的采集與準(zhǔn)備→2、病毒的分離與培養(yǎng)→3、病毒的形態(tài)學(xué)觀察→4、病毒的理化特性測定→5、病毒的血清學(xué)鑒定及病毒的分子生物學(xué)鑒定等基本過程。

87（一）標(biāo)本的采取與送檢病料采集適當(dāng)與否,直接影響病毒的檢測結(jié)果。一般可采集發(fā)病或死亡動物的組織病料、分泌物或糞便等,主要因動物及病毒的種類而異,例如檢測犬細(xì)小病毒或輪狀病毒,一般應(yīng)采腹瀉幼犬或犢牛的糞便;懷疑為口蹄疫的豬或牛,則應(yīng)采其水皰液及水皰皮送檢。

88應(yīng)注意下列原則：1.對本身帶有雜菌(如咽喉拭子、糞便)或易受污染的標(biāo)本，要進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)時，應(yīng)使用抗生素。2.因病毒在室溫中易失去活性，標(biāo)本應(yīng)低溫保存并盡快送檢。3.血清學(xué)診斷標(biāo)本的采取應(yīng)在發(fā)病初期和病后2～3w內(nèi)各取1份血清，以便對比雙份血清抗體效價的動態(tài)變化。

89標(biāo)本處理：采集樣本在接種細(xì)胞、雞胚或動物之前,都需要做適當(dāng)?shù)奶幚?以保證病毒分離的成功幾率。采集的器官或組織樣本：如肺臟、腦、肝、脾、淋巴結(jié)等,可取一小塊進(jìn)行充分研磨,加入含青、鏈霉素的Hanks液,離心取上清液作為接種物;鼻液、膿汁、乳汁等分泌物或滲出液、糞便,應(yīng)加入高濃度的抗生素,充分混勻后,置4℃冰箱內(nèi)處理2~4h或過夜,離心后取上清做接種用;咽喉拭子在取樣后應(yīng)迅速將其浸泡入含有2%小牛血清和一定濃度的青、鏈霉素的Hanks液中,充分刷洗棉拭子,反復(fù)凍融3~5次,離心后取上清液作為接種材料。

90（二）病毒的分離與培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚和實驗動物可用于病毒的分離與培養(yǎng),其中細(xì)胞培養(yǎng)是用于病毒分離與培養(yǎng)最常用的方法。用于病毒分離與培養(yǎng)的細(xì)胞有原代細(xì)胞、二倍體細(xì)胞株和傳代細(xì)胞系,一般說來,本動物的原代細(xì)胞最為敏感,但不如傳代細(xì)胞方便易得.例如豬傳染性胃腸炎病毒初次分離最好用豬甲狀腺原代或二倍體細(xì)胞,但該細(xì)胞生長緩慢,通常用PD5(豬甲狀腺細(xì)胞系)取代。培養(yǎng)方法常用的有靜置培養(yǎng)和旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),有的病毒如輪狀病毒,初次分離時旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的成功率較靜置培養(yǎng)高。

911、病毒的分離不同的病毒分離時采用不同的分離方法,這主要取決于目的病毒的生物學(xué)特性。主要有細(xì)胞培養(yǎng)法、雞胚接種法、動物接種法等,而對細(xì)胞、雞胚不敏感,又沒有合適動物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。

92（1）動物接種法是最原始的病毒培養(yǎng)方法，根據(jù)病毒種類不同，選擇敏感動物及適宜接種部位，如嗜神經(jīng)性病毒（狂犬病毒）可接種于小鼠腦內(nèi)，痘病毒可接種于家兔角膜或皮內(nèi)。動物的接種途徑要根據(jù)病毒種類、實驗動物種類、接種材料等選擇合適的接種途徑。動物接種途徑的選擇正確與否對提高病毒分離成功率也起到重要作用。

93常見病毒常用實驗動物及接種途徑P37

94在動物實驗的期間或結(jié)束時采集動物血液檢測病毒或特異性抗體。實驗動物采血分為致死性采血和非致死性采血兩種。致死性采血是指盡量采集動物血,直至動物死亡。非致死性采血是指采集一定量的動物血而不致動物死亡。對采血動物,應(yīng)在禁食24h后采血。采血應(yīng)無菌操作。不同動物采用不同的采血方法。常用的有心臟采血法、眼眶采血法、頸靜脈采血法、頸動脈采血法、耳靜脈采血法等。根據(jù)實驗動物和實驗條件靈活選用。實驗動物采血

95雞胚對多種病毒敏感。不同病毒在雞胚的不同部位的生長特性差異很大,因此選擇適當(dāng)?shù)慕臃N途徑是病毒分離成功的關(guān)鍵。一般采用孵化9～14天的雞胚，根據(jù)病毒種類不同，將病毒標(biāo)本接種于雞胚的不同部位，最常用的雞胚接種部位有：尿囊腔、絨毛尿囊膜、卵黃囊和羊膜腔等。（2）雞胚培養(yǎng)法

96是將離體活組織塊或分散的組織細(xì)胞加以培養(yǎng)的技術(shù)總稱，為病毒分離鑒定中的最常用的基本方法。（3）細(xì)胞培養(yǎng)(cellculture)法或組織培養(yǎng)法(tissueculture)

97一般選擇生長旺盛的敏感細(xì)胞用于病毒分離。少數(shù)病毒例外,例如犬、豬等的細(xì)小病毒,病毒的復(fù)制有賴于分裂旺盛的細(xì)胞,因此需將病毒接種與細(xì)胞培養(yǎng)同步進(jìn)行。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在病毒發(fā)現(xiàn)、病毒研究、疫苗研制、抗病毒藥物篩選等病毒學(xué)發(fā)展的歷程中發(fā)揮著重要作用。

98常見人類病毒的敏感細(xì)胞P36P36

99（4）分子生物學(xué)技術(shù)對體外培養(yǎng)的細(xì)胞、雞胚、動物不敏感的病毒,可采用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),如基因克隆技術(shù),對病毒的全基因進(jìn)行克隆,構(gòu)建表達(dá)載體,并能表達(dá)出病毒樣顆粒。

100（三）病毒的鑒定步驟：1、初步鑒定2、接種動物的觀察3、最終鑒定

1011、初步鑒定(1)根據(jù)臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)特征與標(biāo)本來源。初步判定屬于哪一類病毒腦炎患者→腦脊液→乙型腦炎病毒秋季腹瀉病人→糞便→輪狀病毒發(fā)燒小孩（下肢麻痹）→糞便→脊髓灰質(zhì)炎病毒

102(2)病毒的生物學(xué)特性病毒或接種分離標(biāo)本后，細(xì)胞出現(xiàn)的病理性變化。不同的病毒具有不同的敏感細(xì)胞，而又能引起不同的細(xì)胞病變效應(yīng)。例如：上呼吸道標(biāo)本接種到細(xì)胞培養(yǎng)上,出現(xiàn)細(xì)胞融合,產(chǎn)生多核巨細(xì)胞現(xiàn)象，就要考慮副黏病毒、皰疹病毒、腎綜合征出血熱病毒、冠狀病毒、流感病毒等；接種到WI-38或人胚肺細(xì)胞培養(yǎng)上出現(xiàn)散在的、局部堆積的巨大細(xì)胞，則要考慮巨細(xì)胞病毒的可能性；腸道病毒能使細(xì)胞圓縮、變小、分散，往往全部細(xì)胞受到破壞；腺病毒能使細(xì)胞腫大，顆粒增多，細(xì)胞聚集成葡萄狀。①細(xì)胞病變效應(yīng)哪三種現(xiàn)象？

103②血吸附和血凝作用有些病毒感染細(xì)胞后,細(xì)胞膜上可鑲嵌著病毒基因編碼產(chǎn)生的糖蛋白,其中有些能吸附特定種類的紅細(xì)胞,或?qū)⒓?xì)胞培養(yǎng)單層刮下后,經(jīng)過適當(dāng)處理,可以凝集特定種類的紅細(xì)胞,此類糖蛋白在細(xì)胞表面形成刺突,稱為血凝素。如流感病毒、副黏病毒、風(fēng)疹病毒等感染細(xì)胞后可產(chǎn)生血吸附現(xiàn)象,或通過血凝實驗來證實病毒的存在。

104新城疫病毒能吸附和凝集豚鼠紅細(xì)胞風(fēng)疹病毒能吸附和凝集鴿子、綿羊等紅細(xì)胞病毒的血凝作用往往需要一定的pH和溫度,利用血吸附和血凝集現(xiàn)象可以為初步判定屬于何種病毒提供重要思路。例子

105③干擾現(xiàn)象一種病毒感染細(xì)胞后,可以干擾另一種病毒在該細(xì)胞內(nèi)的增殖,這種現(xiàn)象稱為干擾現(xiàn)象。利用干擾現(xiàn)象可以檢查出一些不引起細(xì)胞病變、血凝、血吸附的病毒。如：鼻病毒就可以利用干擾現(xiàn)象進(jìn)行初步鑒定。實驗組：感染人胚腎細(xì)胞管或培養(yǎng)板細(xì)胞用人或豚鼠紅細(xì)胞做血吸附實驗,如果陰性,用Hanks液洗滌3次,然后接種仙臺病毒,33℃培養(yǎng)48h,做血吸附實驗。對照組：正常細(xì)胞只接種仙臺病毒。實驗現(xiàn)象：如果對照組血吸附陽性,而實驗組陰性,說明先前接種的標(biāo)本中存在能干擾仙臺病毒增殖的病毒,此結(jié)果即為干擾試驗陽性。

106（3）病毒的理化特性測定包括病毒核酸類型鑒定、耐酸性試驗、脂溶劑敏感性試驗、耐熱性試驗、胰蛋白酶敏感性試驗等通常以細(xì)胞培養(yǎng)或雞胚培養(yǎng)為觀察體系,應(yīng)設(shè)立已知病毒為對照。病毒的理化特性是病毒鑒定的重要依據(jù)

107①代謝抑制法鑒定病毒核酸類型病毒核酸類型鑒定是病毒理化特性測定的最主要指標(biāo)。添加氟脫氧尿核苷(FUDR)或類似物于病毒培養(yǎng)物中,病毒復(fù)制被抑制者,即為DNA病毒,否則為RNA病毒,也可用DNA酶或RNA酶分別作用,以判定核酸的性質(zhì)。綠豆芽酶可降解單股核酸,用它可進(jìn)一步鑒定核酸是單股或雙股。

108可直接用純化的病毒核酸通過電鏡觀察，對其進(jìn)行鑒定。但技術(shù)要求較高。近年來,PCR核酸測序技術(shù)的應(yīng)用使得病毒核酸型鑒定的可行性大為增加。（觀看PCR視頻）

109②脂溶性試驗用乙醚或氯仿處理待檢病毒液,而后與未處理者比較其TCID50的變化,以判斷是否敏感。乙醚、氯仿、脫氧膽酸鈉等脂溶劑能破壞病毒的脂質(zhì)包膜。有包膜的病毒對脂溶劑敏感,受脂溶劑的處理能使病毒失去感染性;無包膜的病毒往往對脂溶劑有抵抗力。因此,用乙醚等可以鑒定所分離的病毒是否有包膜。

110病毒粒的結(jié)構(gòu)模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包膜子粒

111處理方法:將病毒懸液2000~3000r/min離心20min,取上清液,分成兩組：一組為試驗組：按與乙醚4:1的比例振蕩混合均勻,管口密封好,4℃過夜后,2000~3000r/min離心20min。此時液體分為兩層,上層為乙醚,下層為病毒液。吸取下層部分,避免混有乙醚。另一組為對照組：不加乙醚,處理方法同試驗組。將兩組的病毒液同時測定病毒滴度,如果試驗組病毒滴度明顯降低,與對照組有明顯差異,說明病毒對乙醚敏感,屬于有膜病毒。如果兩組的病毒滴度沒有顯著差異,說明病毒對乙醚有抵抗力,屬于無膜病毒。

112③耐酸性試驗?zāi)退嵝栽囼灪椭軇┟舾行栽囼炇亲畛Ｗ龅膬身椑砘笜?biāo)。耐酸性試驗設(shè)置緩沖液pH為3和7的病毒做比較。通過腸道傳播的病毒對酸有抵抗力,借此可鑒別某些病毒。如腸道病毒與鼻病毒同為RNA病毒,腸道病毒對酸有抵抗力,而鼻病毒則沒有。

113處理方法:試驗組：病毒懸液用0.1mol/L的HCl調(diào)pH至3.0,37℃放置2h后,用5.6%的NaHCO3調(diào)pH至7.2對照組：除了不加酸外,其他步驟和試驗組相同。將兩組同時測定病毒滴度,如果試驗組病毒滴度明顯降低,與對照組有顯著差異,說明病毒對酸敏感,不屬于腸道病毒。如果兩組的病毒滴度沒有顯著差異,說明病毒對酸有抵抗力,屬腸道病毒。

1142、接種動物的觀察根據(jù)動物的感染范圍,可初步推斷屬于何種病毒。接種動物的觀察是非常重要的,通過觀察試驗動物的反應(yīng)有時也可初步鑒定何種病毒。每天都需要觀察,有時1d需要觀察數(shù)次。

115觀察指標(biāo):①動物發(fā)病的潛伏期,病毒感染都有一定的潛伏期。因此,潛伏期在病毒的初步鑒定方面也是非常重要的。如乙腦小鼠腦內(nèi)接種潛伏期一般為4d,狂犬病腦內(nèi)接種潛伏期一般為6~8d。②接種動物的飲食情況是否有變化,活動與飲食能力是否發(fā)生改變,糞便是否有變化。③每天在同一時間測量動物的體重和體溫,比較接種前后變化情況。④觀察局部或全身性反應(yīng),如出現(xiàn)毛松、軟弱無力、震顫、不安、抽搐,甚至死亡等全身癥狀,可考慮神經(jīng)系統(tǒng)感染的可能性。對照組不接種病毒,用生理鹽水代替,其他步驟和觀察指標(biāo)與試驗組完全相同。

1163、最終鑒定病毒的最終鑒定需要免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法、電子顯微鏡與免疫電子顯微技術(shù)等特異性方法加以鑒定。（1）病毒的血清學(xué)鑒定（2）病毒的分子生物學(xué)鑒定（3）電子顯微鏡技術(shù)

117（1）病毒的血清學(xué)鑒定病毒分離后,可用已知的抗病毒血清或單克隆抗體,對分離毒株進(jìn)行血清學(xué)鑒定,以確定病毒的種類、血清型及其亞型。常用的血清學(xué)試驗有血清中和試驗、血清抑制試驗、免疫熒光試驗等。此外,可采用一些血清學(xué)技術(shù)如免疫沉淀技術(shù)和免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)分析病毒的結(jié)構(gòu)蛋白成分。

118①中和試驗基本原理：特異性的抗病毒免疫血清（即中和抗體）和病毒體表面的抗原結(jié)合后,使病毒不能吸附于敏感細(xì)胞,或兩者結(jié)合后抑制了病毒的穿入和/或脫殼過程。因此,病毒就失去了感染的能力。中和試驗是以測定病毒的感染力為基礎(chǔ)的,試驗必須在培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi),或動物、雞胚等活體內(nèi)進(jìn)行,而且都必須是對病毒敏感的。以病毒受免疫血清中和后的殘存感染力為依據(jù),判定中和抗體的滴度。中和試驗需要設(shè)對照試驗。

119結(jié)果判定的科學(xué)依據(jù)：用細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行試驗時,可依據(jù)細(xì)胞病變情況、蝕斑數(shù)量、顏色反應(yīng)等。用雞胚進(jìn)行試驗時,可依據(jù)雞胚的死亡數(shù)、絨毛尿囊膜斑點數(shù)量和特征、血凝素產(chǎn)生情況等;用動物進(jìn)行試驗時,可依據(jù)動物死亡數(shù)、發(fā)病數(shù)、出現(xiàn)癥狀數(shù)等。

120操作步驟：中和試驗常用的有兩種方法：一種是固定病毒數(shù)量,一般用100TCID50的病毒與等量一系列倍比稀釋的血清進(jìn)行中和試驗。然后接種于動物、雞胚或細(xì)胞中，用Reed-Muench法計算50%感染的血清中和終點。另一種是固定血清用量與等量一系列對數(shù)稀釋的病毒進(jìn)行中和試驗。

121病毒毒價單位：半數(shù)致死量(LD50)作為毒價測定單位，即經(jīng)規(guī)定的途徑，以不同的劑量接種試驗動物，在一定時間內(nèi)能致半數(shù)試驗動物死亡的劑量。用雞胚測定時，毒價單位為雞胚半數(shù)致死量(ELD50)或雞胚半數(shù)感染量(EID50)。用細(xì)胞培養(yǎng)測定時，用組織細(xì)胞半數(shù)感染量(TCID50)。在測定疫苗的免疫性能時，則用半數(shù)免疫量(IMD50)或半數(shù)保護(hù)量(PD50)。

122病毒毒價的測定（微量法）(1)病毒的制備將病毒接種于單層細(xì)胞，37℃吸附1h后加入維持液，置溫箱培養(yǎng)；逐日觀察，待細(xì)胞病變（CPE）達(dá)75%以上，收獲病毒懸液凍融或超聲波處理，以3000r/min離心10min，取上清液，定量分裝成1ml小瓶置-70℃保存?zhèn)溆茫x用的病毒必須是對細(xì)胞有較穩(wěn)定的致病力。

123(2)病毒毒價測定取置-70℃冰箱保存的病毒一瓶，將病毒在96孔培養(yǎng)板上作10倍遞進(jìn)稀釋即10-1，10-2，10-3……，每孔病毒懸液量為50μl，每個稀釋度作8孔，每孔加入100μl細(xì)胞懸液，每塊板的最后一行設(shè)8孔細(xì)胞對照，制備細(xì)胞懸液的濃度以使細(xì)胞在24h內(nèi)長滿單層為度。把培養(yǎng)板置5%CO2溫箱37℃培養(yǎng)，從48h-14d逐日觀察細(xì)胞病變，記錄結(jié)果。

124中和試驗可應(yīng)用于：1.病毒株的種型鑒定：中和試驗具有較高的特異性，利用同一病毒的不同型的毒株或不同型標(biāo)準(zhǔn)血清，即可測知相應(yīng)血清或病毒的型，所以中和試驗不但可以定屬而且可以定型。2.測定血清抗體效價：中和抗體出現(xiàn)于病毒感染的較早期，在體內(nèi)的維持時間較長。動物體內(nèi)中和抗體水平的高低，可顯示動物抵抗病毒的能力。3.分析病毒的抗原性。

125②血凝抑制試驗基本原理:某些病毒具有血凝素,能選擇性地作用于個別種類的哺乳動物的紅細(xì)胞表面的受體,病毒附著于細(xì)胞而發(fā)生凝集反應(yīng),稱為紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象(簡稱血凝)。如果將病毒特異性抗體加入病毒或血凝素懸液中,作用一定時間后,由于抗原(血凝素)與抗體發(fā)生特異性結(jié)合,這種結(jié)合妨礙了病毒血凝素對紅細(xì)胞的附著,因而血凝現(xiàn)象被抑制,這種試驗稱為血凝抑制試驗。

126用簡式表示:病毒+紅細(xì)胞→→凝集病毒+抗體+紅細(xì)胞→→凝集被抑制

127③免疫熒光試驗基本原理：有些熒光素能和抗體分子結(jié)合,并且保持抗體活力,和相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合,并形成免疫復(fù)合物。此種復(fù)合物因有熒光素作標(biāo)記,借助熒光顯微鏡,能觀察到它的存在及位置,從而可以確定相應(yīng)的病毒抗原。

128免疫熒光試驗分直接法和間接法兩種:直接法:直接法是將熒光素標(biāo)記在病毒特異性抗體分子上,標(biāo)記的抗體直接與固定在載玻片細(xì)胞內(nèi)的病毒抗原結(jié)合,然后于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。直接法的優(yōu)點是簡便、特異;缺點是敏感性較低,只能檢測一種病毒抗原。

129間接法:將熒光素標(biāo)記在抗人或抗動物抗體即抗抗體分子上,用來檢測抗體與病毒抗原形成的復(fù)合物,因此間接法有兩對抗原抗體系統(tǒng)。間接法的優(yōu)點是敏感性高，標(biāo)記一種抗體可用于多種抗原的檢測;缺點是有時出現(xiàn)非特異性熒光,所以對操作要求更高。

130操作步驟：首先制備含有病毒抗原的細(xì)胞片：在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中加入載玻片,讓細(xì)胞在載玻片上生長,并感染病毒。根據(jù)病毒復(fù)制特性,一定時間后用冷丙酮固定,用抗體和/或熒光標(biāo)記抗體染色。于熒光顯微鏡下觀察、記錄結(jié)果。

131（2）病毒的分子生物學(xué)鑒定分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于病毒的鑒定：包括病毒基因的PCR擴(kuò)增及其序列分析,核酸雜交技術(shù),病毒全基因組序列測定分析等,從而可獲得分離毒株的基因組信息,依據(jù)基因組序列繪制遺傳進(jìn)化樹分析比較分離毒株的遺傳變異情況,確定分離毒株的基因類型。

132（3）電子顯微鏡技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚培養(yǎng)和動物培養(yǎng)的病毒可以借助電子顯微鏡技術(shù),包括超薄切片和負(fù)染技術(shù),觀察標(biāo)本中的病毒形態(tài)結(jié)構(gòu),尤其是形態(tài)結(jié)構(gòu)比較特殊的病毒,如腺病毒、痘病毒、冠狀病毒、輪狀病毒、流感病毒、彈狀病毒等具有更特殊的鑒別價值。

133某些病毒感染早期的標(biāo)本和某些難以培養(yǎng)的病毒可以用電子顯微鏡技術(shù)觀察標(biāo)本中的病毒顆粒。如可以從甲型肝炎病人的糞便中檢出甲型肝炎病毒顆粒,從嬰幼兒腹瀉的糞便中檢出輪狀病毒和諾沃克病毒顆粒等。有時在臨床上對水痘——帶狀皰疹病毒和天花病毒引起的皰疹很難區(qū)別,借助電子顯微鏡技術(shù)可在數(shù)小時內(nèi)做出明確的鑒別診斷。

134二、病毒感染單位的測定病毒的滴度（titer）：樣本中病毒的濃度病毒滴度可以通過用系列稀釋的病毒接種細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或?qū)嶒瀯游?檢測病毒增殖的情況而確定。常用于病毒感染單位測定的技術(shù)有空斑試驗、終點稀釋法、熒光-斑點試驗、轉(zhuǎn)化試驗等,最常用的是前兩種。

1351.空斑試驗是一種檢查和準(zhǔn)確測定病毒滴度的方法。將稀釋的病毒懸液加入單層細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。病毒吸附后，再覆蓋一層融化的半固體營養(yǎng)瓊脂，使病毒在單層細(xì)胞培養(yǎng)中有限擴(kuò)散。結(jié)果是每一個有感染性的病毒在單層細(xì)胞中可產(chǎn)生一個局限性的感染灶。用活性染料(如中性紅)染色，則活細(xì)胞著色，受病毒感染而破壞的細(xì)胞不著色，形成肉眼可見的空斑/蝕斑(plaque)。每個蝕斑是由一個感染性病毒顆粒形成的，稱作空斑形成單位(plaqueformingunit,PFU)。病毒懸液中的感染性病毒量的滴度可用PFU／ml表示。

136根據(jù)樣本的稀釋度和空斑數(shù),計算每毫升空斑形成單位(PFU),即可確定病毒的滴度。為了盡量減小計算病毒滴度的誤差,進(jìn)行空斑試驗時應(yīng)對病毒液做系列稀釋,依據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)板(瓶、皿)的面積,僅計算含20~100個空斑的培養(yǎng)板,因超過100個空斑的培養(yǎng)板會導(dǎo)致計數(shù)不準(zhǔn)確?？瞻咴囼炇羌兓偷味ú《镜囊粋€重要手段,只是并非所有病毒或毒株都能形成空斑。

1372.終點稀釋法終點稀釋法〈endpointdilutionassay)用于測定幾乎所有種類的病毒滴度,包括某些不能形成空斑的病毒,并可用以確定病毒對動物的毒力或毒價。將病毒做系列稀釋,選擇4~6個稀釋度,接種一定數(shù)量的細(xì)胞、雞胚或動物,每個稀釋度做3~6個重復(fù)。使用細(xì)胞培養(yǎng),可通過CPE來判定組織培養(yǎng)半數(shù)感染量(TCID50)。在雞胚或動物,是以死亡或發(fā)病來測定。動物實驗：以感染發(fā)病作為指標(biāo)時,可計算半數(shù)感染量(ID50);以體溫反應(yīng)作為指標(biāo)時,可計算半數(shù)反應(yīng)量(RD50)。用雞胚測定時,可計算雞胚半數(shù)致死量(ELD50)或雞胚半數(shù)感染量(EID50)

1383.熒光-斑點試驗是空斑試驗的一種改良方法,用于測定細(xì)胞培養(yǎng)時不會引致CPE的病毒滴度,如豬瘟病毒。該方法的起始步驟與空斑試驗一致.在病毒充分吸附和基因表達(dá)之后,用甲醇或丙酮固定細(xì)胞,用針對病毒蛋白的抗體進(jìn)行處理,然后加入熒光素標(biāo)記的二抗。將細(xì)胞置熒光顯微鏡下觀察,病毒感染細(xì)胞形成熒光斑點,病毒的滴度以每毫升熒光斑點形成單位。

1394.轉(zhuǎn)化試驗用于測定某些不形成空斑的反轉(zhuǎn)錄病毒的滴度。Rous肉瘤病毒轉(zhuǎn)化雞胚細(xì)胞就是一個例子.受到轉(zhuǎn)化的細(xì)胞可形成小的斑點,容易與其余的單層細(xì)胞相互區(qū)別。感染性以每毫升斑點形成單位（focus-formingunit，F(xiàn)FU）表示。

140三、病毒顆粒的檢測方法：電鏡技術(shù)、血凝試驗、病毒酶活性測定、綠色熒光蛋白標(biāo)記最直觀的方法是用電子顯微鏡（electronmicroscopy，EM）觀察病毒顆粒病毒濃度要求：﹥107如：某些病毒料中含毒量較高,如輪狀病毒引致的腹瀉的糞便,EM觀察較易發(fā)現(xiàn)病毒,但像口蹄疫病毒或豬瘟病毒,病料中一般含毒量較低,EM不作為常規(guī)檢驗手段。1、電鏡技術(shù)

141免疫電鏡(IEM)免疫電鏡(IEM)技術(shù)是應(yīng)用病毒的特異抗體的電鏡技術(shù),可檢出某些憑形態(tài)特征較難區(qū)分的病毒。由于抗體與病毒顆粒相結(jié)合,凝聚了樣本中的病毒。可提高檢出率。高滴度的抗血清或單克隆抗體是決定IEM成敗的關(guān)鍵材料。

1422、血凝試驗許多動物病毒,如正黏病毒科、副黏病毒科、腺病毒科的成員,能夠凝集某些動物(如雞、小鼠、豚鼠)或人的紅細(xì)胞。這些病毒含有可與紅細(xì)胞結(jié)合的蛋白質(zhì),如禽流感病毒的囊膜上有一種稱為血凝素的糖蛋自,可與紅細(xì)胞表面的N-乙酰神經(jīng)氨酸糖蛋自結(jié)合,引起紅細(xì)胞凝集。利用這種特性,可做血凝試驗來檢測這些病毒的存在。

143一般將病毒液在血凝反應(yīng)板上做倍比稀釋,加入紅細(xì)胞,未凝集的紅細(xì)胞呈圓點或紐扣狀沉于孔底,而凝集的紅細(xì)胞彌漫性格狀覆蓋整個孔。該方法快速,但如犬細(xì)小病毒檢驗樣本中的病毒粒子含量若少于lO9/g,敏感性則差。++++：血球完全凝集，成厚膜狀鋪于管底。+++：血球呈薄層貼附于管底，邊緣不整齊。++：中央呈小圓盤狀，邊緣凝集呈顆粒狀。+：中央呈彌散圓盤狀，邊緣有少量凝集顆粒?！簾o凝集，血球自然沉于管底呈一小圓盤狀。

1443、病毒酶活性測定一些動物病毒含有核酸聚合酶，可將病毒與放射性標(biāo)記的前體混合,測定其放射性活性,該方法常用于反轉(zhuǎn)錄病毒的反轉(zhuǎn)錄活性的檢測,因它們不能轉(zhuǎn)化細(xì)飽,也不能形成空斑。因酶活性與病毒粒子數(shù)量成比例關(guān)系,因此該方法可以快速跟蹤感染過程中病毒的增殖侑況。

1454、綠色熒光蛋白標(biāo)記用于檢測病毒的轉(zhuǎn)錄或翻譯過程,在活細(xì)胞中可直接觀察到，不需要固定細(xì)胞,也不需要底物或酶。可將綠色熒光蛋白的基因序列插入病毒基因組,不影響病毒蛋白的功能,用重組病毒感染細(xì)胞后,即可產(chǎn)生綠色熒光蛋白?？捎糜谘芯坎《镜膩喖?xì)胞定位,分析病毒在活細(xì)胞中的吸附、侵入、脫殼、復(fù)制、裝配和釋出過程.

146四、病毒的血清學(xué)診斷原理是用已知病毒抗原來檢測病人或動物血清中有無相應(yīng)抗體，故須待病人或動物感染后體內(nèi)產(chǎn)生抗體時才能檢出。另外，在采取臨床標(biāo)本及病人、動物血清應(yīng)注意病程，必須采取患者急性期血清與恢復(fù)期血清(雙份血清)進(jìn)行血清學(xué)試驗。若第2次血清抗體滴度比第1次高出4倍以上時，才有診斷意義。

147血清學(xué)技術(shù)1、免疫熒光技術(shù)2、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）3、免疫沉淀技術(shù)4、免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)5、中和試驗6、血凝試驗和血凝抑制試驗7、補(bǔ)體結(jié)合試驗

148（一）病毒抗原的直接檢出除對細(xì)胞培養(yǎng)中的病毒可進(jìn)行鑒定外,對一些血清型類別不多或在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中還不能成功培養(yǎng)的病毒,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)或酶聯(lián)免疫吸附實驗直接檢測病毒抗原是快速而簡單的方法。

1491.免疫熒光法(immunofluorescentassay，IF)根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的反應(yīng)特點,將熒光色素與待檢病毒的特異性抗體以化學(xué)的方法結(jié)合起來。將熒光標(biāo)記了的抗體在特定的條件下浸染標(biāo)本,使抗體與標(biāo)本中的抗原(病毒)發(fā)生結(jié)合反應(yīng),細(xì)胞內(nèi)的病毒或抗原可被熒光素標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,在熒光顯微鏡下可見斑點狀黃綠色熒光,根據(jù)所用抗體的特異性判斷為何種病毒感染。

150免疫熒光(IF)法用于鑒定病毒具有快速、特異的優(yōu)點。此方法主要包括直接免疫熒光法、間接免疫熒光法以及在間接法的基礎(chǔ)上發(fā)展而成的補(bǔ)體結(jié)合法。

1512.酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays,ELISA)ELISA使用病毒特異性抗體檢測標(biāo)本中的病毒抗原。ELISA法用于鑒定病毒具有簡便、快速、特異的優(yōu)點。

1523.免疫沉淀(immunoprecipitation)基于病毒特異性抗體與感染細(xì)胞或組織的可溶性提取物中的病毒蛋白的相互作用。病毒蛋白事先經(jīng)放射性同位素標(biāo)記的氨基酸進(jìn)行代謝標(biāo)記,將病毒與抗體作用,分離抗體-病毒蛋白復(fù)合物,然后將病毒蛋白從復(fù)合物中解離,再經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳,最后經(jīng)放射自顯影,可觀察到病毒蛋白帶條。

153該技術(shù)可用于分析病毒蛋白的許多特性,如存在于病毒粒子和感染細(xì)胞內(nèi)的病毒蛋白種類,蛋白的分子質(zhì)量,蛋白的合成動態(tài),亞細(xì)胞定位,病毒蛋白與其他病毒或細(xì)胞蛋白的結(jié)合情況。

1544.免疫轉(zhuǎn)印(immunoblotting)是基于抗體與固定在濾膜上的病毒蛋白質(zhì)的相互作用。病毒蛋白經(jīng)聚丙烯配胺凝膠電泳,然后轉(zhuǎn)印到對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)親和性的濾膜(如硝酸纖維素濾膜)上，經(jīng)免疫染色(如免疫酶染色)檢測結(jié)合在膜上的蛋白質(zhì)。由于結(jié)合到膜上的蛋白質(zhì)是變性的,因此識別非線性抗原表位的抗體不適合用于檢測。該方法可用于病毒蛋白的分析,其主要優(yōu)點在于不需要進(jìn)行病毒蛋白的標(biāo)記,因此適用于組織、器官或培養(yǎng)細(xì)胞中病毒蛋白的檢測。

155（二）病毒抗體的直接檢出應(yīng)用病毒特異性抗原檢測病毒感染患者血清中的抗體也是診斷病毒感染的的重要手段，可有IgG和IgM兩種。IgM抗體出現(xiàn)于病毒感染早期,可用于快速診斷病毒感染。

156IgG抗體出現(xiàn)較遲,在血清中存在的時間也較長,因此IgG類抗體用于臨床診斷必須具有早期和恢復(fù)期雙份血清,或有隨訪的血清,兩次標(biāo)本中抗體的效價需有4倍或以上的升高才有診斷價值。

157ELISA或免疫印跡法可檢測血清中針對某種病毒抗原亞單位的抗體,例如,該法已用于HIV患者抗體的確認(rèn)實驗。其他常用的方法還包括:1.中和試驗2.補(bǔ)體結(jié)合試驗3.血凝抑制試驗

1581.中和試驗(neutralizingtest,NTtest)是病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗。針對病毒的一些蛋白質(zhì)抗原或抗原表位的抗體與病毒結(jié)合后可以中和病毒的感染性。中和抗體(netralizingantibodies,NTAb)是作用于病毒表面抗原(衣殼或包膜)的抗體，同種不同型病毒間一般無交叉，特異性高，而且抗體在體內(nèi)維持時間長。因此流行病學(xué)檢查常用此法。

159病毒中和試驗可以在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動物上進(jìn)行,一般將抗體稀釋,與一定量的病毒混合,然后檢測其在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動物上的殘余感染性。終點是以抑制細(xì)胞病變(細(xì)胞培養(yǎng)〉或病毒復(fù)制〈雞胚或動物〉的抗體最高稀釋度來表示。中和試驗具有很強(qiáng)的特異性,是檢測病毒和新分離病毒毒株的鑒定最經(jīng)典的方法,也可用于檢測病毒感染動物血清中的抗體。

160可用來檢查患者血清中抗體的消長情況,也可用來鑒定未知病毒或研究病毒的抗原結(jié)構(gòu)。中和試驗的結(jié)果呈現(xiàn)“陽性”不一定表示正在感染中，也可能因以前有過隱性感染所致。因此，中和試驗適用于人群免疫情況的調(diào)查，在臨床診斷上較少使用。

1612.補(bǔ)體結(jié)合試驗(complementfixationtest,CFtest)用于檢測人或動物血清中的病毒抗體。用已知病毒內(nèi)部可溶性抗原來檢測病人或動物血清中相應(yīng)抗體。一般是血清中IgM類抗體。原理：病毒抗原與抗體的相互反應(yīng)可以引起補(bǔ)體結(jié)合,最終不會導(dǎo)致細(xì)胞膜溶解。在補(bǔ)體結(jié)合試驗中,利用紅細(xì)胞作為靶細(xì)胞，溶血系統(tǒng)作為指示系統(tǒng),因紅細(xì)胞膜的溶解易于觀察到。游離的補(bǔ)體可以溶解紅細(xì)胞膜。如果存在抗原抗體結(jié)合反應(yīng),將與補(bǔ)體發(fā)生結(jié)合,失去溶解紅細(xì)胞作用。

162利用加入“結(jié)合了溶血素(即紅細(xì)胞抗體)”的綿羊紅細(xì)胞可以檢測到是否存在病毒抗原。如果補(bǔ)體被病毒抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,則紅細(xì)胞仍然是完整的;相反,如果補(bǔ)體未被結(jié)合,紅細(xì)胞將在游離的補(bǔ)體的作用下被溶解。因補(bǔ)體結(jié)合試驗中常使用粗制的病毒抗原,因此該方法的特異性不是很高.

163“補(bǔ)體結(jié)合抗原”即CF抗原是病毒的內(nèi)部抗原，同種異型間常有交叉反應(yīng)，故特異性較中和試驗低。但“補(bǔ)體結(jié)合抗體”即CF抗體產(chǎn)生較早，消失較快，常用于病毒早期感染的診斷，故CF陽性可作為近期感染的指標(biāo)。

1643.血凝抑制試驗(hemagglutinatiainhibitiontest,HItest)許多病毒表面具有血凝素(HA)，能凝集雞、豚鼠、人等的紅細(xì)胞，稱血凝現(xiàn)象。這種現(xiàn)象能被相應(yīng)抗體（即抗血凝素抗體）所抑制，檢測血凝抑制抗體的試驗，稱HI試驗。即具有HA病毒的抗體，可阻斷病毒與紅細(xì)胞結(jié)合。原理是血凝素(HA)對應(yīng)的抗體，即抗血凝素抗體與病毒結(jié)合后，抑制了病毒表面的HA與紅細(xì)胞的結(jié)合。

165病毒+雞RBC=凝集（血凝試驗）病毒+特異性抗體+雞RBC=不凝集（血凝抑制試驗）本試驗簡易、經(jīng)濟(jì)，特異性高，常用于粘病毒、流感病毒及乙型腦炎病毒感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，也可鑒定病毒的型與亞型。

166五、病毒核酸的檢測指利用一些分子生物學(xué)技術(shù),如基因組電泳分析、核酸雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、酶切圖譜分析、寡核苷酸指紋圖、DNA芯片技術(shù)等,通過檢測病毒的核酸而確證樣本中病毒的存在。目前PCR等技術(shù)已廣泛用于病毒的檢測和病毒病的診斷。

167由于大多數(shù)病毒的基因均已克隆并已知道其核酸序列,因此可以利用病毒的基因作為探針(probes)進(jìn)行雜交以檢測標(biāo)本中有無相應(yīng)的病毒核酸,或針對病毒的序列設(shè)計相應(yīng)的引物,作多聚酶鏈反應(yīng)(PolymeraseChainReactionAssay,PCR)。近年隨著技術(shù)的進(jìn)步,已研制出多種高通量的檢測病毒核酸的技術(shù)。

1681、核酸雜交技術(shù)核酸雜交是病毒診斷領(lǐng)域中發(fā)展較快的一項新技術(shù),主要分為Southern雜交和Northern雜交兩大類。其基本原理是雙鏈DNA(或RNA)在加熱或堿處理下,變性解開成單鏈,然后用一條已知的特異性的核苷酸序列的單鏈DNA,以同位素或非放射性核素標(biāo)記后制成探針去與固態(tài)支持物上的變性單鏈DNA進(jìn)行雜交,再用放射自顯影技術(shù)或用生物素-親和素系統(tǒng)進(jìn)行檢查,以確定待測核酸中有無與探針DNA同源的DNA存在。

169由于病毒基因很多已成功地被克隆及進(jìn)行了核苷酸序列測定,因此可以利用特定的病毒基因作為探針,用核酸雜交的方法檢測標(biāo)本中有無相應(yīng)的病毒核酸。核酸雜交技術(shù)(nucleioacidhybridizationtechnique)方法包括有斑點核酸雜交、細(xì)胞內(nèi)原位雜交、DNA印跡雜交和RNA印跡雜交等。

1702、PCR技術(shù)近年來發(fā)展了一系列以PCR為基礎(chǔ)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù),用于檢測不易感或不能培養(yǎng)的病毒。此方法特異性強(qiáng)、敏感性高、簡便快速,已成功用于HCV、HⅣ、CMV、HPV等多種病毒性感染的臨床檢測中。由于PCR方法十分敏感,可檢出fg水平的病毒核酸,故操作時應(yīng)注意PCR產(chǎn)物的氣溶膠污染以防出現(xiàn)假陽性:此外,病毒核酸檢測陽性并不等于標(biāo)本中存在有感染性的活病毒。

171隨著PCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用,派生出了一系列的新技術(shù)和方法,根據(jù)不同的檢測目的可以選用相適應(yīng)的技術(shù)方法。利用實時定量PCR法(realtimequantitaticePCR)檢測病毒載量;利用原位(insitu)PCR法定位檢測細(xì)胞或組織中的病毒感染;利用巢式(nested)PCR可以提高PCR的敏感性和特異性等等。

1723、高通量的病毒核酸檢測技術(shù)突發(fā)傳染病病原體的快速鑒定————DNA芯片技術(shù)目前基因芯片主要有兩種：一種是DNA合成芯片,在芯片的特定部位原位合成寡核苷酸;另一種是DNA微集芯片,將克隆基因或PCR擴(kuò)增的基因片段有序地顯微打印到芯片上。

173DNA芯片技術(shù)的優(yōu)點一次性可以完成大量樣品DNA序列的檢測和分析,最新研發(fā)的高密度病原體基因芯片能檢測1700多種人類病毒。DNA芯片技術(shù)解決了傳統(tǒng)核酸雜交技術(shù)的許多不足,在病毒診斷和流行病學(xué)調(diào)查方面有著廣闊的應(yīng)用前景。

174六、病毒感染的快速診斷快速診斷主要是指從含有病毒標(biāo)本及感染機(jī)體的血清中檢測病毒顆粒、蛋白抗原、IgM抗體和核酸等，往往在數(shù)小時內(nèi)即可得出結(jié)果。

175(一)形態(tài)學(xué)檢查1.普通光學(xué)顯微鏡檢查2.電鏡和免疫電鏡檢查

1761、普通光學(xué)顯微鏡檢查法某些受病毒感染的細(xì)胞內(nèi),可形成與正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)和著色不同的斑塊,稱為包涵體。有些病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)增殖后，在細(xì)胞的一定部位(胞核、胞漿或兩者兼有)出現(xiàn)一個或數(shù)個、圓形或橢圓形、嗜酸性或嗜堿性的結(jié)構(gòu)，即包涵體。包涵體對病毒感染的診斷有一定價值。

177光學(xué)顯微鏡是病毒診斷的輔助方法之一,借助染色技術(shù)可以直接觀察病毒產(chǎn)生的核內(nèi)或胞漿內(nèi)包涵體和病毒感染細(xì)胞的具體形態(tài)。應(yīng)用光學(xué)顯微鏡檢查包涵體,根據(jù)不同病毒包涵體的形態(tài)、染色、存在部位的差異,可輔助診斷某些病毒性疾病。

178例如從病犬大腦海馬會發(fā)現(xiàn)胞漿中嗜酸性包涵體(內(nèi)基小體),即可確診為狂犬病;在麻疹病毒感染細(xì)胞的核內(nèi)及胞漿內(nèi)可找到一個或多個鮮紅色的圓形、橢圓形或不規(guī)則形態(tài)的包涵體,被稱為麻疹病毒包涵體。

1792、電鏡(electronmicroscopy,EM)檢查法電子顯微鏡技術(shù)可直接觀察病毒的大小、形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的動態(tài)過程。制作電鏡標(biāo)本的方法主要有超薄切片(厚度為100nm左右)、磷鎢酸負(fù)染法。超薄切片法也稱正染法,將細(xì)胞固定、脫水、包埋、切片、染色,然后觀察病毒顆粒,可顯示病毒形態(tài)及形態(tài)發(fā)生過程。

180負(fù)染色法敏感性低,通過富集病毒的辦法使樣品含有高濃度病毒顆粒(106~107/ml),經(jīng)磷鎢酸負(fù)染后直接用于電鏡檢查,可顯示病毒的結(jié)構(gòu)。這種方法可有助于診斷難以在細(xì)胞培養(yǎng)中增殖的病毒,例如從病人糞便標(biāo)本中觀察是否有輪狀病毒的感染。

1813、免疫電鏡技術(shù)術(shù)(immuneelectronmicroscopy,IEM)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結(jié)合,在亞細(xì)胞和超微結(jié)構(gòu)水平上對抗原物質(zhì)進(jìn)行定位分析的一種高度精確、靈敏的方法。特異性抗體用電子致密物質(zhì),如鐵蛋白、膠體金等標(biāo)記后,使之與抗原結(jié)合,在電鏡下觀察到標(biāo)記物所在位置,即為抗原抗體反應(yīng)的部位。

182在難以分辨病毒顆粒與其外周伴隨的結(jié)構(gòu)的情況下,若將病毒樣品制成懸液,加入特異性抗體,可使樣品中的病毒顆粒凝集成團(tuán),再用電鏡觀察可提高病毒的檢出率。利用這種方法從痘病毒、皰疹病毒感染的皰疹液中,以及疑為輪狀病毒感染的糞便或HBV感染者血清中均可快速檢出典型的病毒顆粒,能幫助早期診斷。

183(二)病毒蛋白抗原檢查用熒光素、放射性同位素、過氧化物酶等標(biāo)記抗體，采用免疫學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，檢測標(biāo)本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特異、快速等優(yōu)點。1.免疫熒光技術(shù)(immuno-fluorescence,IF)2.固相放射免疫測定(solid-phaseradioimmunoassay,SPRIA)3.酶免疫技術(shù)(enzymeimmunoassay,EIA)此法可檢測多種病毒及其抗體，主要是酶免疫組化法和酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)。

184(三)特異性IgM抗體的檢測檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染，特別是對證實孕婦感染風(fēng)疹病毒尤為重要，但應(yīng)注意類風(fēng)濕因子(IgM)的干擾。另外，檢測早期抗原的抗體是快速診斷的另一途徑。如檢測針對EBV的早期抗原(EA)、核心抗原(EANA)和衣殼抗原(VCA)等的抗體，可以區(qū)別急性或慢性EBV感染。此外，分子生物學(xué)檢測技術(shù)、氣相色譜技術(shù)等，均可用來分析和鑒定病毒感染。

185(四)檢測病毒核酸1.核酸雜交技術(shù)用于病毒檢測的有斑點雜交、細(xì)胞內(nèi)原位雜交、DNA印跡雜交、RNA印跡雜交等。2.核酸擴(kuò)增法目前多數(shù)病毒基因已通過分子克隆技術(shù)被明確了核苷酸序列，使得DNA擴(kuò)增技術(shù)逐步發(fā)展為常規(guī)診斷技術(shù)之一。3.基因芯片技術(shù)

186基因芯片又稱DNA芯片、生物芯片（biochip）。其原理是：將已知的生物分子探針或基因探針，大規(guī)?；蛴行蚺挪加谛K硅片等載體上，與待測樣品中的生物分子或基因序列相互作用和并行反應(yīng)，在激光的激發(fā)下，產(chǎn)生的熒光譜信號被接受器收集，計算機(jī)自動分析處理數(shù)據(jù)并報告結(jié)果。其優(yōu)點是：可以一次性完成大量樣品DNA序列的檢測和分析，解決了傳統(tǒng)核酸雜交技術(shù)的許多不足。芯片技術(shù)在病毒等微生物學(xué)診斷和流行病學(xué)調(diào)查方面有著廣闊的應(yīng)用前景。

187THEEND