cmyc反義核酸對(duì)乳腺癌mcf7細(xì)胞生長(zhǎng)及htert基因表達(dá)的影響

《cmyc反義核酸對(duì)乳腺癌mcf7細(xì)胞生長(zhǎng)及htert基因表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫(kù)。

1、cmyc反義核酸對(duì)乳腺癌MCF7細(xì)胞生長(zhǎng)及hTERT基因表達(dá)的影響：馬莉,稅青林,張莉娟,彭春,趙小平【摘要】目的探討脂質(zhì)體介導(dǎo)cmyc基因反義寡核苷酸（Antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide，ASODN）對(duì)MCF7細(xì)胞生長(zhǎng)及其人體端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT）基因表達(dá)的影響。方法將cmyc正、反義寡核苷酸（ODN）分別導(dǎo)入各組MCF7細(xì)胞中，MTT法、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈法及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)各組細(xì)胞生長(zhǎng)情況、hTERTmRNA的表達(dá)水平以及細(xì)胞凋亡率。結(jié)果c

2、mycASODN轉(zhuǎn)染MCF7細(xì)胞24h后，細(xì)胞生長(zhǎng)受到抑制（P＜0.05），并且hTERTmRNA表達(dá)明顯降低；隨著反義核酸作用時(shí)間的延長(zhǎng)，凋亡細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，細(xì)胞生長(zhǎng)及hTERT表達(dá)的下降隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸明顯。對(duì)照組、LRSODN組、LRASODN24h組與LRASODN48h、72h組相比有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。結(jié)論cmyc反義寡核苷酸能顯著下調(diào)細(xì)胞中hTERT基因的表達(dá)活性，誘導(dǎo)MCF7細(xì)胞凋亡，并抑制MCF7細(xì)胞生長(zhǎng)；在一定程度上，其效果與時(shí)間呈正相關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】乳腺腫瘤；cmyc；人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶；反義核酸；MCF7細(xì)胞　　Abstract：Obje

3、ctiveToinvestigatetheeffectsofcmycASODNonMCF7cellsgroycSODNandASODNtoMCF7cells,easuredtheproliferation,apoptosisratesandtheexpressionofhTERTmRNArespectivelybyMTTmethod,floetryanalysisandRTPCR.ResultsCR7cellsat24h,cellsgroeincreasing.ConclusioncmycASODNcaneffectivelyinhibittheMCF7cellsgroeto

4、adegree.　　Keys;cmyc;Humantelomerasereversetranscriptase;AntisenseOligonucleotide;MCF7cell　　0引言端粒酶是維持染色體結(jié)構(gòu)和功能穩(wěn)定的一種核糖核蛋白復(fù)合體，在幾乎所有的人類惡性腫瘤細(xì)胞中均高表達(dá)[1]。其最重要的成分是人端粒酶催化亞單位，又稱人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT），被認(rèn)為是端粒酶激活的限速因素。隨著hTERT基因克隆[2]成功，對(duì)其的調(diào)控研究成為端粒酶研究的重點(diǎn)。cmyc是一類參與細(xì)胞增殖與分化的原癌基因，通過(guò)基因擴(kuò)增

5、、逆轉(zhuǎn)錄酶插入和染色體易位等方式表達(dá)失調(diào)，在大多數(shù)的腫瘤中都有高水平的表達(dá)[3，4]，并且cmyc是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)hTERT基因表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子[5]。許多研究報(bào)道，在惡性腫瘤細(xì)胞中cmyc與hTERT的表達(dá)密切相關(guān)。Oh等[5]報(bào)道，與正常細(xì)胞相比，myc蛋白在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)顯著增高；激活或抑制myc蛋白表達(dá)可以改變hTERT啟動(dòng)子活性，認(rèn)為myc蛋白對(duì)hTERT啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)作用可能與其促進(jìn)腫瘤形成有關(guān)。而目前也有研究顯示[6]，cmyc與hTERT的表達(dá)調(diào)控?zé)o明顯相關(guān)性。由此可見，研究者們對(duì)于cmyc與hTERT的表達(dá)調(diào)控關(guān)系仍持不同意見。本研究選用cmyc和hTERT

6、均高表達(dá)的乳腺癌MCF7細(xì)胞，采用LipfectAMIM介導(dǎo)的反義核酸技術(shù)將cmyc反義核酸轉(zhuǎn)染入MCF7細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)抑制、細(xì)胞凋亡以及hTERT基因表達(dá)的變化，為針對(duì)端粒酶抑制的乳腺癌腫瘤基因治療提供理論依據(jù)，并從逆向角度進(jìn)一步探討cmyc對(duì)hTERT基因表達(dá)的調(diào)控作用?！　?材料與方法　　1.1細(xì)胞培養(yǎng)　　采用含5%FBS（60℃滅活30min）、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)人乳腺癌MCF7細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)選用指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞?！　?.2cmyc正、反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染cmyc正、反義寡核苷酸由上海San

7、gon公司合成并行全硫代磷酸化修飾，經(jīng)NCBIblast證實(shí)與人類其他已知基因無(wú)同源性。序列分別為：反義序列（ASODN）：5′AACGTTGAGGGGCAT3′；正義序列（SODN）：5′ATGCCCCTCAACGTT3′。將細(xì)胞分為對(duì)照組、LRSODN組與LRASODN組。轉(zhuǎn)染按照文獻(xiàn)報(bào)道[7]中所述，并有些改動(dòng)：ASODN和SODN的終濃度均為2.5μmol/L，脂質(zhì)體相對(duì)濃度為10％；對(duì)照組細(xì)胞只加同