鈣離子在p物質(zhì)促胃癌細胞增殖過程中的作用

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1、鈣離子在P物質(zhì)促胃癌細胞增殖過程中的作用【摘要】目的:研究P物質(zhì)（SP）對體外培養(yǎng)的人低分化胃癌細胞系MKN45增殖的調(diào)節(jié)作用,探討鈣信號在其中的作用.方法:以第4代人胃癌細胞系MKN45為研究對象,用MTT方法觀察了不同濃度的SP，ASN1377642（NK1受體拮抗劑）、新霉素（PIP2拮抗劑）、尼卡地平(鈣通道阻斷劑）對MKN45增殖的影響.結果:對于體外培養(yǎng)的人低分化胃癌細胞系，不同濃度的SP(10,50,100nmol/L)可以顯著的刺激MKN45的增殖，其增殖率分別為57.23%，63.75%，52.95%（P<0.05）.不同濃度的ASN137764

2、2、尼卡地平和新霉素與MKN45預先孵育后SP促MKN45的增殖率顯著降低（P<0.05），但是增加上述藥物劑量其抑制效應并無顯著增加（P>0.05）.結論:SP可通過與NK1結合有效促進胃癌細胞增殖.ASN1377642,尼卡地平和新霉素可以顯著的抑制SP的促增殖效應，Ca2+可能在該過程中起重要作用.【關鍵詞】P物質(zhì)胃腫瘤細胞增殖0引言感覺神經(jīng)肽P物質(zhì)（substanceP,SP）是主要的速激肽之一，廣泛分布于包括神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)的各組織中，SP除具有神經(jīng)遞質(zhì)和炎性介質(zhì)的作用外，對多種細胞還具有促有絲分裂活性.研究［1-2］表明SP對多種細胞有促有絲分裂活性，

3、促進細胞的增殖，其中包括平滑肌細胞、上皮細胞以及一些神經(jīng)源性的腫瘤細胞等.SP通常是與G蛋白結合型受體結合后發(fā)揮生物學作用的，其中NK1受體是最重要的受體亞型，SP與NK1受體結合可激活細胞肌醇磷脂的水解、細胞內(nèi)Ca2+升高、cAMP水平增高以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）［3-4］，從而啟動細胞內(nèi)一系列信號事件，激動相應的第二信使而啟動多個代謝途徑.然而SP與胃癌細胞增殖的確切關系目前尚未闡明.本研究旨在觀察SP對體外培養(yǎng)的人胃癌細胞是否有促增殖作用以及鈣信號在其中的作用.為胃癌的臨床綜合治療提供新的實驗和理論基礎.1材料和方法1.1材料人胃低分化腺癌細胞系MKN45

4、（第四軍醫(yī)大學實驗動物中心）；SP（瑞士ALEXIS公司）；ASN1377642（德國Merck公司）；尼卡地平和新霉素（第四軍醫(yī)大學藥理學教研室）；噻唑藍(MTT)（美國Sigma公司）；小牛血清（Sigma）；RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco公司）；CO2孵箱(日本池本理化工業(yè)株式會社)，酶聯(lián)檢測儀(美國BioRad550型).1.2方法1.2.1細胞培養(yǎng)將人胃癌MKN45細胞培養(yǎng)于含100mL/L小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，添加青霉素及鏈霉素等.于37℃，50mL/LCO2的條件下常規(guī)培養(yǎng).取指數(shù)生長期2×107/L細胞傳代及接種于96孔板中，同時加入處理

5、藥物，培養(yǎng)48h.1.2.2實驗處理及分組將2×107/L細胞接種于96孔板，每組8個復孔.實驗組分組如下：①分別以10，50,100nmol/LSP與MKN45細胞供孵育48h；②分別以50，250，500nmol/LASN1377642預先與MKN45細胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；③分別以1×10-7，1×10-6，1×10-5mol/L尼卡地平預先與MKN45細胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育48h；④分別以1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L新霉素預先與MKN45細胞供孵育1h，然后加入10nmol/LSP孵育4

6、8h.同時設立空白對照組.1.2.3細胞增殖實驗經(jīng)各組藥物處理后的細胞，棄上清，每孔加入200μL新配制的5g/LMTT，37℃繼續(xù)孵育4h，棄上清加入150μL的二甲基亞砜（DMSO），混勻后用酶標儀在490nm波長測定吸光度（A）.腫瘤細胞增殖率=（實驗孔測定值/對照孔測定值-1）×100%.統(tǒng)計學處理：用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，所有計量資料以x±s表示，統(tǒng)計分析方法采用LSDt檢驗，以P<0.05作為具有顯著性差異.2結果2.1不同濃度的SP促胃癌細胞增殖作用10，50,100nmol/LSP具有明顯的促胃癌細胞MKN45增殖的作用.3種不同濃度的SP促胃癌細

7、胞的增殖率分別為：57.23%，63.75%，52.95%（P<0.05）.隨著SP濃度的增加，SP促胃癌細胞增殖率并不顯著增加，在100nmol/L濃度時，細胞增殖率反有下降趨勢（圖1）.2.2不同濃度的ASN1377642對SP促胃癌細胞增殖效應的影響用ASN1377642與MKN45預先孵育后能顯著抑制SP的促胃癌細胞增殖效應.50，250，500nmol/LASN1377642預先孵育后細胞的增殖率分別為24.54%，14.64%，14.23%（P<0.05）.隨著ASN13