人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1抑制白血病細(xì)胞增殖的研究

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1、人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1抑制白血病細(xì)胞增殖的研究【摘要】本研究通過體外實(shí)驗(yàn)探討人可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（sFLT1）對(duì)白血病細(xì)胞增殖的抑制作用。用RTPCR檢測(cè)白血病細(xì)胞株K562、HL60、U937和骨髓LTCICVEGFmRNA、VEGFR1（FLT1）mRNA的表達(dá)，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上述細(xì)胞VEGF和VEGFR1(FLT1)的表達(dá)，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF的含量，將sFLT1加入K562、HL60白血病細(xì)胞株和骨髓LTCIC培養(yǎng)體系中，應(yīng)用MTT法計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。結(jié)果顯示：白血病細(xì)胞株K562、

2、HL60、U937和骨髓LTCIC均表達(dá)VEGF，以K562表達(dá)VEGF量最高。K562和HL60細(xì)胞株還表達(dá)FLT1，U937細(xì)胞和骨髓LTCIC表達(dá)的FLT1表達(dá)量很低。sFLT1明顯抑制白血病細(xì)胞株K562及HL60的生長(zhǎng)，并且隨著sFLT1濃度的增加，其抑制率增加，以用藥后48小時(shí)抑制作用最明顯。結(jié)論：sFLT1能夠抑制某些白血病細(xì)胞株的生長(zhǎng)，其抑制效應(yīng)隨用藥濃度的增加而增加，而sFLT1對(duì)正常骨髓細(xì)胞增殖無影響。【關(guān)鍵詞】VEGFFLT1白血病細(xì)胞InhibitionofLeukemicCellProliferation

3、byHumanSolubleVEGFR1AbstractThecurrentstudyansolublevascularendothelialgroiccellsinvitro.Reversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)RNAandVEGFR1（FLT1）mRNAinK562,HL60,U937leukemiccelllinesandbonemarroetryentionedcells.VEGFconcentrationsinthecellculturesupernatantsinedb

4、yenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA).CellproliferationinedbyMTTafteraddingsFLT1toK562，HL60andLTCICculturesystem.TheresultshoiccelllinesandLTCIC,especiallyK562,K562andHL60celllinesalsoexpressedFLT1,butalittleexpressionanner.Thehighestinhibitionrateeleukemiccelllines,andthei

5、nhibitioneffectenhancesastheconcentrationofthesFLT1increase,butsFLT1notinfluencetheproliferationofnormalmarroiccell近年來越來越多的證據(jù)表明，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）與白血病的發(fā)生、發(fā)展、演變及預(yù)后相關(guān)，它可以促進(jìn)白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和轉(zhuǎn)移。因此以VEGF為靶點(diǎn)治療白血病已受到人們的廣泛關(guān)注，目前許多研究集中于抗VEGF單克隆抗體，VEGF受體抑制劑［1,2］，反義寡核苷酸［3-5］等制劑的研究。然而，這些制劑均非內(nèi)生性VEGF抑制

6、劑，sFLT1是內(nèi)生的VEGF受體的拮抗劑，可特異性地與VEGF相結(jié)合，從而抑制VEGF的生物學(xué)活性［6,7］。sFLT1能抑制VEGF所引起的白血病細(xì)胞的增殖，但目前對(duì)于sFLT1的研究尚處于探索階段，本研究以表達(dá)VEGF及其受體的白血病細(xì)胞株為研究對(duì)象，觀察sFLT1對(duì)白血病細(xì)胞株及正常造血細(xì)胞的影響。材料和方法試劑RPMI1640培養(yǎng)液、IMDM為Gibco產(chǎn)品；胎牛血清、馬血清、TRIZOL、DNAmarker、瓊脂糖、MTT均購自北京鼎國(guó)生物試劑公司；AMV逆轉(zhuǎn)錄酶為Promega產(chǎn)品，dNTPs、Oligod(T)、Taq酶為TaKa

7、Ra產(chǎn)品；VEGFELISA試劑盒、sFLT1凍干粉購自北京晶美公司；VEGF單克隆抗體、VEGFR1單克隆抗體購自美國(guó)R＆D公司。白血病細(xì)胞CML急性變白血病細(xì)胞株K562、人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系HL60，人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株U937為吉林大學(xué)第一醫(yī)院血液腫瘤科實(shí)驗(yàn)室保存株。3種細(xì)胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中，于37℃、5%CO2、飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，3-4天傳代1次。骨髓長(zhǎng)期培養(yǎng)起始細(xì)胞(LTCIC)取健康成年人抗凝骨髓5ml，按常規(guī)分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞，以含12。5%胎牛血清、12.5%馬血清的IMDM4ml重懸細(xì)胞

8、，建立Dexter培養(yǎng)體系，每周半量換液2次。VEGF和FLT1的檢測(cè)VEGF