shrna干擾胃泌素基因表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞bgc823增殖和遷移能力的抑制作用的論文

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1、shRNA干擾胃泌素基因表達(dá)對(duì)人胃癌細(xì)胞BGC823增殖和遷移能力的抑制作用的論文【摘要】目的構(gòu)建針對(duì)人胃泌素基因的shrna干擾表達(dá)載體，觀察胃泌素基因表達(dá)抑制對(duì)人胃癌細(xì)胞系bgc823細(xì)胞增殖和遷移能力的影響。方法根據(jù)人胃泌素序列設(shè)計(jì)并構(gòu)建3個(gè)靶向人胃泌素基因的shrna真核表達(dá)載體，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將胃泌素干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞系bgc823,經(jīng)g418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的陽(yáng)性細(xì)胞。通過(guò)rt-pcr技術(shù)篩選出表達(dá)抑制最強(qiáng)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞系。應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞周期變化情況。采用tr

2、ans-igration　　ofhumangastriccancercellbgc823　　liuyan1,gengpaili1,lüyouyong2　　(1.qinghaiuniversitymedicalcollege;　　2.pekinguniversityschoolofoncology，laboratoryofmolecularbiology)　　abstractobjectivetoconstructshrnaexpressionvectortargethumangastringene

3、andtoinvestigatetheeffectofshorthairpinrna(shrna)targetingonthecellcycleofgastriccancerbgc-823cells.methodsshrnaexpressingvectorstargetingtohumangastrinrnalevelofgastrinexpressionigrationcapabilityofstablytransfectedcellsinvitrobermodel.fcmedtodetectt

4、hecellcycle.resultstherebinantplasmidvectorrnaexpressioninbgc-823cells.bgc823cellsembranecellnumberdecreasedsignificantly.conclusionknockdoigrationcapability.　　keyigrationproliferation　　胃泌素(gastrin)是胃竇部和十二指腸的g細(xì)胞分泌的一種多肽類激素，在食物消化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。.它是刺激胃酸分泌的最重要的

5、激素，而且對(duì)胃腸道粘膜細(xì)胞有重要的營(yíng)養(yǎng)作用。而在近20年的研究中，胃泌素作為單純消化道激素的概念發(fā)生了巨大變化。研究發(fā)現(xiàn)胃泌素與其相應(yīng)受體結(jié)合后以自分泌方式對(duì)消化道腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等生物學(xué)過(guò)程進(jìn)行重要調(diào)控。而今，研究者更傾向于認(rèn)為對(duì)正常消化道上皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的自分泌調(diào)控作用是消化道胃泌素的最重要功能,胃泌素已成為一類重要的腫瘤自分泌生長(zhǎng)因子[1-3]。明晰胃泌素調(diào)控作用機(jī)制在闡明消化道腫瘤的發(fā)病機(jī)制，探索有效的內(nèi)分泌治療途徑方面具有十分重要的意義?！　na干擾(rnainterf

6、erence,rnai)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種序列特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，是機(jī)體用來(lái)抵抗病毒入侵和抑制轉(zhuǎn)座子活動(dòng)的自然機(jī)制[4，5]。細(xì)胞內(nèi)雙鏈rna在酶的作用下，形成20～25個(gè)堿基大小的小干擾rna(smallinterferingrna)，小干擾rna結(jié)合多組分核酸酶并使其激活，從而精確降解與序列相同的mrna，抑制該基因在細(xì)胞內(nèi)的翻譯表達(dá)。小干擾rna是研究未知基因功能的有力工具。近年來(lái)應(yīng)用sirna特異性地抑制病毒體內(nèi)和體外復(fù)制的研究取得了令人矚目的成果，為sirna作為基因治療藥物的發(fā)展

7、起到了推進(jìn)作用[6]。　　本實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建針對(duì)人gastrinmrna的shrna(shorthairpinrnas,shrna)真核表達(dá)載體，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系bgc823并篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，觀察其對(duì)胃癌細(xì)胞遷移和增殖能力的影響，從而為胃癌治療的分子靶點(diǎn)篩選提供實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)依據(jù)。　　1材料與方法　　1.1材料　　胃癌細(xì)胞bgc-823(北京腫瘤防治研究所分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室);載體psilencertm3.1(ambion公司);t4dna連接酶、bamhⅰ酶、hindⅲ酶(promega公司)

8、;g418(濃度為400μg/ml，gibco-brl公司產(chǎn)品);cdna第一鏈合成試劑盒、rt-pcr試劑盒(北京全式金公司);trizolreagent(gibco-invitrogen公司);lipofectamim2000(invitrogen公司);transem養(yǎng)基和10%胎牛血清(gibco公司)?！　?.2方法　　1.2.1shrna設(shè)計(jì)和合成：根據(jù)gastrin基因序列(nm_000805)、shrna設(shè)計(jì)規(guī)則及blast同源搜索選取、設(shè)計(jì)三對(duì)引物,每一對(duì)引物上游