丙型肝炎病毒核心抗原檢測在血液篩查中應用

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1、丙型肝炎病毒核心抗原檢測在血液篩查中應用【摘要】目的應用丙型病毒性肝炎核心抗原(HCV2cAg)ELISA檢測試劑,用于診斷早期丙型肝炎(HCV)病毒標志物。方法78份懷疑為HCV感染患者血清中采用ELISA法檢測的HCV核心抗原,并以HCVRNAPCR法和抗-HCV檢測結果作為比較。結果78份樣本中,PCR法測HCVRNA,陽性36例,陰性42例,ELISA法測HCV核心抗原,陽性34例,陰性44例,RT2PCR熒光定量法測抗-HCV,陽性29例,陰性49例;結論以PCR法測HCVRNA與多種方法檢測丙型肝炎病毒核心抗原的臨

2、床價值。?【關鍵詞】HCV核心抗原;HCV-RNA;抗-HCV;HCVRT2PCR輸血和注射是我國丙型肝炎病毒重要的傳播途徑,目前采用抗-HCV抗體檢測對血液進行篩查和疾病的診斷,使輸血后丙型肝炎的發(fā)生率大大降低。但是在HCV感染后至抗-HCV抗體產生之前有一段長約40～70d的窗口期,此時已具有傳染性,盡管使用的抗2HCVELISA試劑盒均為國家“批批檢”合格產品,但由于廠家之間使用HCV基因重組抗原質量及各抗原片段包被比例的不同,各廠家試劑間的靈敏度和特異性存在著一定差異,從而導致抗2HCV5檢測結果不一致,易產生假陽性或

3、漏檢等情況。由于在HCV感染后2～5周HCVRNA即可出現在感染者的外周血中,被視為HCV病毒復制的直接標志,可以縮短感染后血清陽轉前的檢測窗口期,以實現HCV感染的早期診斷。本實驗采用ELISA法檢測HCV核心抗原,并分別與HCVRNAPCR法測抗-HCV檢測結果相比較;評估HCV核心抗原檢測技術的臨床應用價值。現對河南省安陽市中心血站懷疑HCV78份病例進行檢測分析報告如下。?1資料與方法?1.1標本來源懷疑HCV感染的門診及住院患者血清標本78份。?1.2試劑HCV核心抗原檢測丙型肝炎病毒核心抗原試劑盒，HCVRNA檢測

4、HCVRNA熒光定量檢測試劑盒?？?HCV檢測丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒。?1.3主要儀器洗板機(ST236W)和酶標儀(ST2360)均為上海科華實業(yè)有限公司生產。PCR擴增儀(LightCycler?)?1.4方法78份血清標本分別用HCV2cAgELISA試劑和HCVRNA熒光定量RT2PCR試劑檢測,對其余血清標本僅行熒光定量RT2PCR試劑檢測。各種操作方法,結果判斷嚴格按說明書要求。?2結果? 578份樣本中,PCR法測HCVRNA,陽性36例,陰性42例,ELISA法測HCV核心抗原,陽性34例,陰性44例,RT

5、2PCR熒光定量法測抗-HCV,陽性29例,陰性49例;HCVRNAPCR、HCV核心抗原、抗-HCV陽性率分別為46.15%、43.58%、37.17%。同HCVRNAPCR檢測結果比較:HCV核心抗原檢測符合率90.08%、假陽性率3.31%、假陰性率6.61%;抗-HCV檢測符合率81.81%、假陽性率4.13%、假陰性率14.05%。?3討論?PCR法檢測的影響因素較多,在樣本收集、儲存和檢測方面都有嚴格的要求。而且要求昂貴精密的儀器、較高的實驗技藝,試劑也比較昂貴,又容易出現交叉污染導致假陽性結果,使得PCR技術的推

6、廣受到了極大的限制。目前對丙肝的檢測主要為檢測抗2HCV和HCVRNA。RT2PCR可定性和定量檢測出的HCVRNA,HCV感染后1～13d,應用HCVRNA和RT2PCR即可檢測到HCVRNA,2周后可檢出HCV2cAg,比抗體檢出平均約早30d。所以上述兩種方法對HCV感染的早期診斷價值相類似。建立早期簡便、敏感、特異的檢測丙肝抗原試劑,縮短感染的“窗口期”是降低丙型肝炎感染的有效途徑。如果單用第三代抗2HCV試劑A或試劑B檢測的陽性標本,再用HCVRNA熒光定量RT2PCR檢測陽性率分別為43.58%和37.1%,5其中

7、就可能存在漏檢或假陽性。其特異性和靈敏度都比較高,但由于各廠商所用抗原質量和各抗原片段包被比例的不同,因此生產的試劑在靈敏度和特異性方面存在一定差異,從而導致抗2HCV結果的不一致,易產生漏檢和假陽性等情況。我國研制抗HCV不同基因區(qū)抗體報道較多,亦有實驗室對制備的抗體進行雙抗體夾心檢測HCV抗原。國內外近幾年來探索應用HCV2cAg檢測HCV的報道較多。結果顯示,抗原檢測陽性率比文獻報道的在抗2HCV陽性標本中HCV2cAg陽性率(34.48%)明顯要高。比較而言,HCV2cAgELISA法快速、便捷,較適用于安全輸血中獻血

8、者的血液篩檢。HCV核心抗原檢測技術反映了HCV復制的間接指標,且實驗方法簡便、快捷、價廉,可以在3h內完成,所需設備簡單,可進行批量檢測。HCV2cAgELISA技術與抗2HCV有互補作用,二者同時檢測能提高HCV檢出結果的準確性,可明顯降低抗2HCV檢測的假陽性,減少血液