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《反義c-myc對mcf-細胞htert基因表達抑制作用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、瀘州醫(yī)學院碩士學位論文反義c-myc對MCF-7細胞hTERT基因表達抑制作用的研究姓名：馬莉申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學（遺傳）指導教師：稅青林20040501反義c-myc對MCF-7細胞hTERT基因表達抑制作用的研究摘要目的：研究脂質(zhì)體LipfectAMINETM（LR）介導的c-myc反義寡核苷酸（ASODN）對MCF-7細胞端粒酶催化亞單位hTERT基因表達的抑制效應，進一步闡明c-myc對hTERT基因的調(diào)控作用，并為針對端粒酶活性抑制的乳腺癌的基因治療提供理論依據(jù)。方法：培
2、養(yǎng)MCF-7細胞，待細胞生長狀態(tài)良好并達到指數(shù)生長期時，根據(jù)所購脂質(zhì)體的廠家推薦劑量，按照每孔脂質(zhì)體200μl，寡核苷酸500μl的劑量配成轉(zhuǎn)染復合物，加入各孔細胞中。研究設置對照組、LR-SODN組及LR-ASODN組，每組6個復孔。在轉(zhuǎn)染24小時、48小時、72小時后，分別收集各組細胞，用UNIQ柱式TRIZOL提取法提取各組總RNA，按MMLV一步法PCR（略作改進）進行hTERTmRNA表達的檢測，紫外凝膠成像分析儀進行凝膠電泳產(chǎn)物的灰度掃描，以hTERT與內(nèi)對照引物β-肌動蛋白（β-actin）
3、的比值表示hTERTmRNA相對表達量。實驗重復5次。數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，α=0.05。結(jié)果：1.1.2%變性甲醛瓊脂糖凝膠電泳分析RNA提取樣品顯示28S和18S兩條清晰帶，前者的質(zhì)量是后者的2倍，表明RNA提取成功，提取樣品可用作RT-PCR的擴增模板。2.RT-PCR擴增產(chǎn)物凝膠電泳分析顯示：各組在PUCMixMarker145bp處均可見明暗不一的hTERT擴增條帶，于540bp處可見明暗一致的β-actin擴增帶；3.凝膠灰度掃描以hTERT和內(nèi)參照引物β-actin的灰度比值表示hTERT
4、mRNA相對表達量。對照組的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.705、0.713、0.753、0.724和0.733；LR-SODN組24小時的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.704、0.714、0.750、0.724和0.731；48小時的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.703、0.713、0.747、0.726和0.730；72小時的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.699、0.716、0.742、0.719和0.730；LR-ASODN組24小時的5組hTERTm
5、RNA相對表達量分別為0.589、0.612、0.538、0.614和0.701；48小時的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.289、0.218、0.274、0.265和0.254；72小時的5組hTERTmRNA相對表達量分別為0.148、0.136、0.131、0.159和0.143。單因素方差分析顯示，LR-ASODN作用于MCF-7細胞24、48、72小時時hTERTmRNA相對表達量分別與LR-SODN、對照組相比有顯著性差異（P<0.01），LR-SODN作用于MCF-7細胞24、48
6、、72小時時hTERTmRNA相對表達量分別與對照組相比無顯著性差異（P>0.05）。并且ASODN對MCF-7細胞hTERT基因的抑制效果隨時間推移而逐漸升高。結(jié)論：1.LR介導的c-mycASODN能有效抑制MCF-7細胞中端粒酶hTERTmRNA表達水平，且抑制效果隨著時間的延長逐漸明顯。本研究通過抑制hTERT的促進因素—c-myc來改變hTERT活性，從逆向的角度進一步證明c-myc對hTERT基因表達具有正向調(diào)節(jié)作用；2.結(jié)合繼往c-mycASODN能有效抑制MCF-7細胞的生長及其c-myc
7、蛋白表達的研究結(jié)果，推測其機制為：LR介導c-mycASODN通過封閉c-myc基因抑制其蛋白表達，下調(diào)hTERT基因表達，進而下調(diào)端粒酶活性，使細胞生長受到抑制。3.通過c-myc反義寡核苷酸封閉c-myc基因表達，下調(diào)hTERT基因表達水平，降低端粒酶活性，是一條可行性的腫瘤治療策略。關鍵詞c-myc基因；反義寡核苷酸；hTERT；逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）Studyontheinhibitiveeffectofliposome-mediatedc-mycantisenseoligonucleot
8、ideontelomeraseactivityandhTERTgeneexpressionofMCF-7cellsAbstract：Objective:Thepurposeofthisstudywastoinvestigatetheinhibitiveeffectofliposome(LipfectAMINETM,LR)-mediatedc-mycantisenseoligonucleotide(ASODN)onhumante
