培養(yǎng)過(guò)程中的顯微觀察與應(yīng)用

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1、實(shí)驗(yàn)二、培養(yǎng)過(guò)程中的顯微觀察與應(yīng)用姓名：***班級(jí)：生物工程學(xué)號(hào)：***一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怙@微觀察技術(shù)在顯微觀察中的重要性，掌握顯微觀察中應(yīng)該使用哪些參數(shù)來(lái)了解生茶進(jìn)程、指導(dǎo)生產(chǎn)過(guò)程。以及如何獲的這些參數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)儀器電子顯微鏡，分別培養(yǎng)了24h、48h、72h的酵母，血球計(jì)數(shù)板，美藍(lán)染色劑，蓋玻片，載玻片。三、實(shí)驗(yàn)步驟取出擦拭干凈的血球計(jì)數(shù)板，在中部蓋一片蓋玻片。用滴管吸取稀釋了10倍培養(yǎng)了24小時(shí)的酵母菌并滴在血球計(jì)數(shù)板的中部斜坡處，由于毛細(xì)現(xiàn)象，液滴會(huì)充滿血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)區(qū)。將血球計(jì)數(shù)板放在調(diào)試好的電子顯微鏡下，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)區(qū)，換用高倍鏡直到得到計(jì)數(shù)區(qū)的清晰圖像，分

2、別查出左上，左下，右上，右下，中間5個(gè)中格酵母菌的數(shù)目并記錄。用以上方法繼續(xù)記錄48和72小時(shí)的菌數(shù)。取出一片載玻片，滴一滴培養(yǎng)24小時(shí)的酵母菌液，并滴加一滴美藍(lán)試劑，用蓋玻片蓋好后放在顯微鏡下觀察，等1分鐘后，分別取5個(gè)視野查出酵母菌總數(shù)，出芽數(shù)，和死亡數(shù)（被全部染色）并記錄。用同樣方法記錄48和72小時(shí)的數(shù)據(jù)。使用形態(tài)分析軟件對(duì)培養(yǎng)不同時(shí)間的酵母菌的直徑大小進(jìn)行分析，將得到的數(shù)據(jù)記錄。一、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)類別時(shí)間細(xì)胞數(shù)量（個(gè)）稀釋倍數(shù)（倍）菌液濃度（個(gè)/ml）12345總數(shù)24h31573191095000048h653342110105000072h74852261013000

3、00項(xiàng)目時(shí)間視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)（個(gè)）出芽（個(gè)）死亡（個(gè)）出芽率（%）死亡率（%）平均出芽率（%）平均死亡率（%）細(xì)胞大小（μm）24h（稀釋10倍）404410.0010.007.42610.08420.3332236.259.3828133.5710.7137245.4110.81425411.909.5248h（稀釋5倍）214819.0538.1017.77429.6626.51214519.0523.81315516.1316.13235821.7434.783141112.9035.4872h（未稀釋）93172818.2830.1116.39429.92824.851

4、16173514.6630.17101183017.8229.70109162914.6826.60121204016.5333.06一、實(shí)驗(yàn)結(jié)論24h：有一部分出芽，少部分死亡48h：細(xì)胞變得更加飽滿，出芽數(shù)增多，死亡數(shù)也增多72h：細(xì)胞形態(tài)變小，出芽數(shù)大致不變，死亡數(shù)繼續(xù)增高二、實(shí)驗(yàn)小結(jié)1、染色時(shí)間要把握好，時(shí)間太短不能著色，時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)有大量細(xì)胞死亡，影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。時(shí)間大致控制在1-2分鐘。2、當(dāng)視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)過(guò)多，找出合適的稀釋倍數(shù)，再進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。三、思考題1、影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的操作因素有哪些？答：操作上的失誤，計(jì)數(shù)時(shí)的誤差，染色的時(shí)間都會(huì)影響到檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。2、堿性

5、染色的機(jī)理是什么？答：由于細(xì)胞新陳代謝作用,細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力,能使堿性染色劑例如美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o(wú)色的還原型,而對(duì)代謝作用微弱或死細(xì)胞,無(wú)此還原能力或還原能力極弱,而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色.1、不同培養(yǎng)階段的數(shù)據(jù)說(shuō)明了什么？答：說(shuō)明酵母菌的生長(zhǎng)符合單細(xì)胞微生物的典型生長(zhǎng)曲線，有著延滯期，指數(shù)期，穩(wěn)定期以及衰亡期。