培養(yǎng)過程中的顯微觀察與應用

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1、實驗二、培養(yǎng)過程中的顯微觀察與應用姓名：***班級：生物工程學號：***一、實驗目的了解顯微觀察技術在顯微觀察中的重要性，掌握顯微觀察中應該使用哪些參數(shù)來了解生茶進程、指導生產(chǎn)過程。以及如何獲的這些參數(shù)。二、實驗儀器電子顯微鏡，分別培養(yǎng)了24h、48h、72h的酵母，血球計數(shù)板，美藍染色劑，蓋玻片，載玻片。三、實驗步驟取出擦拭干凈的血球計數(shù)板，在中部蓋一片蓋玻片。用滴管吸取稀釋了10倍培養(yǎng)了24小時的酵母菌并滴在血球計數(shù)板的中部斜坡處，由于毛細現(xiàn)象，液滴會充滿血球計數(shù)板的計數(shù)區(qū)。將血球計數(shù)板放在調(diào)試好的電子顯微鏡下，先用低倍鏡找到計數(shù)區(qū)，換用高倍鏡直到得到計數(shù)區(qū)的清晰圖像，分

2、別查出左上，左下，右上，右下，中間5個中格酵母菌的數(shù)目并記錄。用以上方法繼續(xù)記錄48和72小時的菌數(shù)。取出一片載玻片，滴一滴培養(yǎng)24小時的酵母菌液，并滴加一滴美藍試劑，用蓋玻片蓋好后放在顯微鏡下觀察，等1分鐘后，分別取5個視野查出酵母菌總數(shù)，出芽數(shù)，和死亡數(shù)（被全部染色）并記錄。用同樣方法記錄48和72小時的數(shù)據(jù)。使用形態(tài)分析軟件對培養(yǎng)不同時間的酵母菌的直徑大小進行分析，將得到的數(shù)據(jù)記錄。一、實驗數(shù)據(jù)類別時間細胞數(shù)量（個）稀釋倍數(shù)（倍）菌液濃度（個/ml）12345總數(shù)24h31573191095000048h653342110105000072h74852261013000

3、00項目時間視野內(nèi)細胞總數(shù)（個）出芽（個）死亡（個）出芽率（%）死亡率（%）平均出芽率（%）平均死亡率（%）細胞大?。é蘭）24h（稀釋10倍）404410.0010.007.42610.08420.3332236.259.3828133.5710.7137245.4110.81425411.909.5248h（稀釋5倍）214819.0538.1017.77429.6626.51214519.0523.81315516.1316.13235821.7434.783141112.9035.4872h（未稀釋）93172818.2830.1116.39429.92824.851

4、16173514.6630.17101183017.8229.70109162914.6826.60121204016.5333.06一、實驗結論24h：有一部分出芽，少部分死亡48h：細胞變得更加飽滿，出芽數(shù)增多，死亡數(shù)也增多72h：細胞形態(tài)變小，出芽數(shù)大致不變，死亡數(shù)繼續(xù)增高二、實驗小結1、染色時間要把握好，時間太短不能著色，時間太長會有大量細胞死亡，影響實驗數(shù)據(jù)。時間大致控制在1-2分鐘。2、當視野內(nèi)細胞數(shù)過多，找出合適的稀釋倍數(shù)，再進行觀察和計數(shù)。三、思考題1、影響檢測數(shù)據(jù)的操作因素有哪些？答：操作上的失誤，計數(shù)時的誤差，染色的時間都會影響到檢測數(shù)據(jù)的準確性。2、堿性

5、染色的機理是什么？答：由于細胞新陳代謝作用,細胞內(nèi)具有較強的還原能力,能使堿性染色劑例如美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型,而對代謝作用微弱或死細胞,無此還原能力或還原能力極弱,而被美藍染成藍色或淡藍色.1、不同培養(yǎng)階段的數(shù)據(jù)說明了什么？答：說明酵母菌的生長符合單細胞微生物的典型生長曲線，有著延滯期，指數(shù)期，穩(wěn)定期以及衰亡期。