igf-ⅱ基因在肝細胞癌組織中表達的研究

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1、IGF-Ⅱ基因在肝細胞癌組織中表達的研究【關(guān)鍵詞】IGF-Ⅱ基因　肝細胞癌　　肝細胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是各種癌癥中惡性程度很高的一種癌瘤之一，本研究應用半定量RT-PCR技術(shù)從mRNA水平檢測IGF-Ⅱ基因在肝癌、癌旁和正常組織中的表達情況，分析其在肝癌發(fā)生中的作用，探討肝癌的發(fā)生機制并探索可用于肝癌早期診斷及篩選的分子標志物。1　材料與方法1.1　一般資料　病例為2002年12月～2003年12月青島大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院及青島市市立醫(yī)院肝膽外科手術(shù)患者。30例患者為HCC組，男22例，女

2、8例，年齡33～71歲，平均52歲，術(shù)中取癌區(qū)、癌旁區(qū)（距癌邊緣2～5cm）組織標本，各30份。10例肝血管瘤手術(shù)患者為正常對照組，男11例，女5例，年齡35～59歲，平均52歲，術(shù)中取正常肝組織標本。1.2　半定量RT-PCR?。?）組織單細胞制備；（2）Trizol法提取組織總RNA；（3）逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA：42℃1h，99℃5min,快速冷卻至4℃；（4）PCR檢測IGF-Ⅱ基因表達。甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）檢測逆轉(zhuǎn)錄效率并作為內(nèi)參照基因。41.3　PCR產(chǎn)物定量及分析　采用德國TanonGis-1000凝膠

3、圖象分析系統(tǒng)，掃描并計算電泳條帶光密度值作為PCR產(chǎn)物的相對含量。用IGF-Ⅱ基因與GAPDH光密度的比值代表IGF-Ⅱ基因的相對表達量。1.4　統(tǒng)計學處理　SPSS10.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，采用χ2檢驗法、方差分析及t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2　結(jié)果　　肝癌組、癌旁組和對照組IGF-ⅡExon4基因表達率分別為70.0%(21/30)、66.7%(20/30)和20.0%（22/30），IGF-ⅡExon4B基因表達率分別為:86.7%（26/30）、73.3%（22/30）和0。肝癌組和癌旁組比較：P均&

4、gt;0.05；肝癌組和對照組比較：P均<0.01；癌旁組和對照組比較：P均<0.053　討論　　人正常IGF-Ⅱ基因為長30×１０３的單拷貝基因，位于11pl5，其轉(zhuǎn)錄與表達受4種不同啟動子的調(diào)節(jié)（P1～P4），成人IGF-Ⅱ基因的表達主要受到肝組織特異的啟動子P1的驅(qū)動，表達水平很低［１］。4　　近年研究發(fā)現(xiàn)，癌前病變狀態(tài)的肝組織及HCC組織中常有IGF-Ⅱ的異常表達［２］，而且IGF-Ⅱ可通過內(nèi)分泌作用及自分泌/旁分泌途徑促進肝癌細胞的增殖與分化［３］，肝細胞在發(fā)生異常增殖和分化的某階段再次激活已關(guān)閉的P2、P

5、3、P4啟動子而產(chǎn)生胚胎表型的逆轉(zhuǎn)，導致類似胚胎樣細胞的表達，間接促進HCC血管形成。本研究結(jié)果顯示IGF-Ⅱ基因在30例肝癌組織及對應的癌旁組織中均呈高表達；在對照組正常肝組織中IGF-Ⅱ基因的表達水平極低，IGF-Ⅱ基因的異常表達且呈漸增趨勢，提示IGF-Ⅱ基因在HCC中的高表達與其發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。　　IGF-Ⅱ基因共有7個外顯子，其中P2控制Exon4及Exon5、6、7的轉(zhuǎn)錄，P3控制Exon4B及Exon5、6、7的轉(zhuǎn)錄，其區(qū)別在于Exon4和Exon4B的不同。通過半定量RT-PCR方法檢測Exon4和Exon4B

6、的表達，可以反映P2和P3的活性。本研究結(jié)果提示：P2和P3的高活性可能導致了IGF-Ⅱ基因的過量表達。IGF-Ⅱ基因在肝癌組織中胚胎性逆轉(zhuǎn)表達可能存在多種啟動子模式，最終的闡明還有待于更具體，更深層次的研究。　　IGF-Ⅱ基因在癌前狀態(tài)及肝癌組織中呈異常過量表達，可能是導致HCC發(fā)生發(fā)展的重要因素之一。IGF-Ⅱ基因檢測有可能成為肝癌早期診斷和篩選的手段之一。【參考文獻】4[１]KimKW,BaeSK,LeeOH,etal.InsulinlikegrowthfactorⅡinducedbyhypoxiamaycontribut

7、etoangiogenesisofhumanhepatocellularcarcinoma[J].CancerRes,1998,58(2):348-351.[2]SeoJH,KimKW,ParkBC.DifferentproteinbindingpatternintheP3promoterregionofthehumaninsulinlikegrowthfactorⅡgeneinthehumanlivercirrhosisandhepatocellularcarcinomatissues[J].JKoreanMedSci,199

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