應(yīng)用金標法檢測抗

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1、應(yīng)用金標法檢測抗【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒；金標法；酶聯(lián)免疫法；假陰性；假陽性　?。壅菽康模簩饦朔焖贆z測抗HCV的假陰性和假陽性原因進行分析。方法：以酶聯(lián)免疫法(ELISA)為標準，與膠體金法進行比較及倍比稀釋試驗。結(jié)果：檢測我院門診患者13400例,ELISA法陽性320例，陽性率2.4％；膠體金法陽性330例，陽性率2.5％；金標法假陰性率6.2％，假陽性率為0.2％。結(jié)論：膠體金法檢測抗HCV，具有操作簡便，觀察直觀、快速、省時的特點，但有一定的假陰性和假陽性率，其原因可能由人為因素及環(huán)境因素以及本身試劑原因造成的，但金標法可為篩查健康人員丙型肝炎病毒

2、抗體的重要手段，對丙型肝炎的早期發(fā)現(xiàn)，預(yù)防及控制有重要價值和意義。　?。坳P(guān)鍵詞］丙型肝炎病毒；金標法；酶聯(lián)免疫法；假陰性；假陽性5　　丙型肝炎病毒(HCV)是世界范圍內(nèi)引起慢性肝臟疾病的主要病原，我國平均感染率為3.2%［1］，由于HCV感染后極易慢性化，大約75％以上的感染者將演變?yōu)槁愿腥?，并可引起肝硬化、肝癌等終末期肝病［1］，目前尚無有效的疫苗預(yù)防HCV感染及特效的治療藥物，因此，對健康人群進行篩選及早期臨床診斷是有效控制丙型肝炎發(fā)生的重要手段。金標法快速檢測技術(shù)是近年來發(fā)展起來的一種新技術(shù)［3］，1989年金標法誕生至今，已廣泛應(yīng)用于免疫檢測各個領(lǐng)域。

3、金標法雖具有快速、簡便、標本用量少、可用全血測定、不需儀器設(shè)備等優(yōu)點，但金標法與ELISA檢測結(jié)果存在不相符現(xiàn)象，據(jù)統(tǒng)計不符合率在1％左右。應(yīng)用金標法和酶聯(lián)免疫法(ELISA)同時檢測我院(2004年1月至2006年1月)13400例門診就診患者，統(tǒng)計有關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果，分析金標法測定的假陽性及假陰性情況如下。　　1材料與方法　　1.1材料　　1.1.1酶標儀芬蘭Thermo公司MULTISKANMK3V；洗板機：芬蘭Thermo公司W(wǎng)ELLWASH4MK2。　　1.1.2試劑抗HCVELISA試劑由上海榮盛公司、3V公司提供?？笻CV金標試紙條由新創(chuàng)公司、艾康生物技

4、術(shù)公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。定值HCV血清由衛(wèi)生部臨檢中心提供?！　?.1.3標本我院2004年1月至2006年1月門診就診患者13400例。5　　1.2方法常規(guī)經(jīng)脈采血，采用金標抗HCV快速試紙條對就診患者初篩。采集后的血液再用初、復(fù)檢抗HCVELISA試劑(兩個廠家)進行檢測。結(jié)果判斷ELISA法比色采用雙波長450nm/630nm(參考波長為630nm)，s/co值≥1者為陽性．金標試紙條在檢測線和對照線位置處各出現(xiàn)一條紫紅色線條為陽性，未出現(xiàn)紫紅色線條為陰性，未出現(xiàn)紫紅色線未金標試紙條失效，以ELISA法結(jié)果為標準對金標法進行對照,ELISA法

5、兩種試劑檢測結(jié)果均為陽性的按陽性統(tǒng)計。對20例初、復(fù)檢抗HCV都為陽性，而一種金標法試紙檢測均為陰性的標本進行分析，尋找假陰性原因。用兩個廠家的金標試紙檢測20例假陰性標本，分析不同廠家試紙條之間的靈敏度差異。20例假陰性標本分別稀釋2倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍后，用兩個廠家的金標抗HCV試紙檢測，分析是否存在“前帶”現(xiàn)象。對兩個廠家的金標試紙條進行靈敏度檢測，并與ELISA法比較?！　?結(jié)果與討論　　2.1統(tǒng)計13400例患者的抗HCV檢測結(jié)果見表1?！　”?13400例患者的抗HCV檢測結(jié)果（略）　　統(tǒng)計20例假陰性標本ELISA法檢測

6、結(jié)果，顯示S/CO均值為3.56(1.16～12.9)。對以上20例假陰性標5本用兩個廠家的金標抗HCV試紙檢測，一種為18例陰性，2例弱陽性；一種為15例陰性，4例弱陽性，1例陽性。表明不同廠家抗HCV試紙的靈敏度存在差異。對20例假陰性標本進行了2倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍稀釋，再分別用兩個廠家的金標抗HCV試紙測定，一種為18例陰性，2例弱陽性(2倍、10倍稀釋)，高倍稀釋均為陰性；一種為15例陰性，5例弱陽性(2倍、10倍稀釋)，高倍稀釋均為陰性。表明這些標本不存在“前帶”現(xiàn)象。應(yīng)用兩個廠家金標試紙分別對1ng/ml抗HCV定值血清

7、檢測5次，有1個廠家抗HCV試紙檢測結(jié)果為陰性；反映不同試紙之間的靈敏度存在差異；兩個廠家試紙分別測定0.5ng/ml抗HCV定值血清，結(jié)果均為陰性；ELISA法檢測1ng/ml和0.5ng/ml抗HCV定值血清結(jié)果均為陽性(S/CO＞1)，表明金標法靈敏度明顯低于ELISA法。因此，從目前抗HCV試紙的靈敏度看，抗HCV試紙只能作為初篩試劑，初檢、復(fù)檢試劑采用ELISA法，以防止HCV漏檢的發(fā)生，保證臨床診斷和避免丙型肝炎傳播的發(fā)生。金標抗HCV快檢的假陰性也可能由人為因素及環(huán)境因素造成［4］：如判斷結(jié)果時間不夠、反應(yīng)不充分、氣溫低(克服方法是冬天注意保溫或延

8、長反應(yīng)時間)；加血量不足