應(yīng)用金標(biāo)法檢測(cè)抗

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1、應(yīng)用金標(biāo)法檢測(cè)抗【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒；金標(biāo)法；酶聯(lián)免疫法；假陰性；假陽(yáng)性　?。壅菽康模簩?duì)金標(biāo)法快速檢測(cè)抗HCV的假陰性和假陽(yáng)性原因進(jìn)行分析。方法：以酶聯(lián)免疫法(ELISA)為標(biāo)準(zhǔn)，與膠體金法進(jìn)行比較及倍比稀釋試驗(yàn)。結(jié)果：檢測(cè)我院門診患者13400例,ELISA法陽(yáng)性320例，陽(yáng)性率2.4％；膠體金法陽(yáng)性330例，陽(yáng)性率2.5％；金標(biāo)法假陰性率6.2％，假陽(yáng)性率為0.2％。結(jié)論：膠體金法檢測(cè)抗HCV，具有操作簡(jiǎn)便，觀察直觀、快速、省時(shí)的特點(diǎn)，但有一定的假陰性和假陽(yáng)性率，其原因可能由人為因素及環(huán)境因素以及本身試劑原因造成的，但金標(biāo)法可為篩查健康人員丙型肝炎病毒

2、抗體的重要手段，對(duì)丙型肝炎的早期發(fā)現(xiàn)，預(yù)防及控制有重要價(jià)值和意義?！　。坳P(guān)鍵詞］丙型肝炎病毒；金標(biāo)法；酶聯(lián)免疫法；假陰性；假陽(yáng)性5　　丙型肝炎病毒(HCV)是世界范圍內(nèi)引起慢性肝臟疾病的主要病原，我國(guó)平均感染率為3.2%［1］，由于HCV感染后極易慢性化，大約75％以上的感染者將演變?yōu)槁愿腥?，并可引起肝硬化、肝癌等終末期肝?。?］，目前尚無(wú)有效的疫苗預(yù)防HCV感染及特效的治療藥物，因此，對(duì)健康人群進(jìn)行篩選及早期臨床診斷是有效控制丙型肝炎發(fā)生的重要手段。金標(biāo)法快速檢測(cè)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)［3］，1989年金標(biāo)法誕生至今，已廣泛應(yīng)用于免疫檢測(cè)各個(gè)領(lǐng)域。

3、金標(biāo)法雖具有快速、簡(jiǎn)便、標(biāo)本用量少、可用全血測(cè)定、不需儀器設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，但金標(biāo)法與ELISA檢測(cè)結(jié)果存在不相符現(xiàn)象，據(jù)統(tǒng)計(jì)不符合率在1％左右。應(yīng)用金標(biāo)法和酶聯(lián)免疫法(ELISA)同時(shí)檢測(cè)我院(2004年1月至2006年1月)13400例門診就診患者，統(tǒng)計(jì)有關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果，分析金標(biāo)法測(cè)定的假陽(yáng)性及假陰性情況如下?！　?材料與方法　　1.1材料　　1.1.1酶標(biāo)儀芬蘭Thermo公司MULTISKANMK3V；洗板機(jī)：芬蘭Thermo公司W(wǎng)ELLWASH4MK2?！　?.1.2試劑抗HCVELISA試劑由上海榮盛公司、3V公司提供?？笻CV金標(biāo)試紙條由新創(chuàng)公司、艾康生物技

4、術(shù)公司提供。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。定值HCV血清由衛(wèi)生部臨檢中心提供?！　?.1.3標(biāo)本我院2004年1月至2006年1月門診就診患者13400例。5　　1.2方法常規(guī)經(jīng)脈采血，采用金標(biāo)抗HCV快速試紙條對(duì)就診患者初篩。采集后的血液再用初、復(fù)檢抗HCVELISA試劑(兩個(gè)廠家)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果判斷ELISA法比色采用雙波長(zhǎng)450nm/630nm(參考波長(zhǎng)為630nm)，s/co值≥1者為陽(yáng)性．金標(biāo)試紙條在檢測(cè)線和對(duì)照線位置處各出現(xiàn)一條紫紅色線條為陽(yáng)性，未出現(xiàn)紫紅色線條為陰性，未出現(xiàn)紫紅色線未金標(biāo)試紙條失效，以ELISA法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)金標(biāo)法進(jìn)行對(duì)照,ELISA法

5、兩種試劑檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性的按陽(yáng)性統(tǒng)計(jì)。對(duì)20例初、復(fù)檢抗HCV都為陽(yáng)性，而一種金標(biāo)法試紙檢測(cè)均為陰性的標(biāo)本進(jìn)行分析，尋找假陰性原因。用兩個(gè)廠家的金標(biāo)試紙檢測(cè)20例假陰性標(biāo)本，分析不同廠家試紙條之間的靈敏度差異。20例假陰性標(biāo)本分別稀釋2倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍后，用兩個(gè)廠家的金標(biāo)抗HCV試紙檢測(cè)，分析是否存在“前帶”現(xiàn)象。對(duì)兩個(gè)廠家的金標(biāo)試紙條進(jìn)行靈敏度檢測(cè)，并與ELISA法比較?！　?結(jié)果與討論　　2.1統(tǒng)計(jì)13400例患者的抗HCV檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1?！　”?13400例患者的抗HCV檢測(cè)結(jié)果（略）　　統(tǒng)計(jì)20例假陰性標(biāo)本ELISA法檢測(cè)

6、結(jié)果，顯示S/CO均值為3.56(1.16～12.9)。對(duì)以上20例假陰性標(biāo)5本用兩個(gè)廠家的金標(biāo)抗HCV試紙檢測(cè)，一種為18例陰性，2例弱陽(yáng)性；一種為15例陰性，4例弱陽(yáng)性，1例陽(yáng)性。表明不同廠家抗HCV試紙的靈敏度存在差異。對(duì)20例假陰性標(biāo)本進(jìn)行了2倍、10倍、50倍、100倍、200倍、500倍稀釋，再分別用兩個(gè)廠家的金標(biāo)抗HCV試紙測(cè)定，一種為18例陰性，2例弱陽(yáng)性(2倍、10倍稀釋)，高倍稀釋均為陰性；一種為15例陰性，5例弱陽(yáng)性(2倍、10倍稀釋)，高倍稀釋均為陰性。表明這些標(biāo)本不存在“前帶”現(xiàn)象。應(yīng)用兩個(gè)廠家金標(biāo)試紙分別對(duì)1ng/ml抗HCV定值血清

7、檢測(cè)5次，有1個(gè)廠家抗HCV試紙檢測(cè)結(jié)果為陰性；反映不同試紙之間的靈敏度存在差異；兩個(gè)廠家試紙分別測(cè)定0.5ng/ml抗HCV定值血清，結(jié)果均為陰性；ELISA法檢測(cè)1ng/ml和0.5ng/ml抗HCV定值血清結(jié)果均為陽(yáng)性(S/CO＞1)，表明金標(biāo)法靈敏度明顯低于ELISA法。因此，從目前抗HCV試紙的靈敏度看，抗HCV試紙只能作為初篩試劑，初檢、復(fù)檢試劑采用ELISA法，以防止HCV漏檢的發(fā)生，保證臨床診斷和避免丙型肝炎傳播的發(fā)生。金標(biāo)抗HCV快檢的假陰性也可能由人為因素及環(huán)境因素造成［4］：如判斷結(jié)果時(shí)間不夠、反應(yīng)不充分、氣溫低(克服方法是冬天注意保溫或延

8、長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間)；加血量不足