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1、天然腦活素促細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞衰老作用的研究作者：李映紅吳正治吳偉康李明張曉麗陳茵楊敏【摘要】目的：探討天然腦活素對(duì)人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞增殖能力和復(fù)制性衰老的影響及其機(jī)理。方法：光鏡下觀察MRC-細(xì)胞衰老表型，常規(guī)計(jì)數(shù)細(xì)胞代齡、傳代速度，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活度，X-Gal染色法觀察細(xì)胞衰老情況，計(jì)數(shù)衰老細(xì)胞百分率。結(jié)果：天然腦活素可維持細(xì)胞的非衰老表型，增加MRC-細(xì)胞代齡，天然腦活素孵育MRC-細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力較空白老齡對(duì)照組明顯升高，細(xì)胞的增殖速度顯著加快。另外，天然腦活素連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞在老齡階段衰老細(xì)胞數(shù)顯著低于老齡對(duì)照細(xì)
2、胞。結(jié)論：天然腦活素可升高M(jìn)RC-細(xì)胞增殖能力，有效延緩細(xì)胞的復(fù)制性衰老?！娟P(guān)鍵詞】天然腦活素；人胚肺成纖維細(xì)胞；增殖活度；復(fù)制性衰老；延緩〔Abstract〕ObjectiveToexploretheeffectsofNaturalCerebrolysinoncellproliferationactivityandreplicativesenescenceofhumanembryoniclungdiploidfibroblasts(MRC-5cells)anditsmechanism.MethodsToobservethechan
3、gesofsenescentphenotypebylightmicroscope,countthepassageagesandvelocity,detectthepotentialofcellproliferationbyMTT.ThechangesofcellssenescenceofNaturalCerebrolysin-effectedMRC-5cellswerestudiedbyX-Galstainingmethod,andthepositivecellratesofsenescencecellsweredetectedan
4、danalyzed.．ResultsNaturalCerebrolysinmaintainedunalteredcellmorphologyandincreasedlifespanofMRC-5byatleast18-21passages.Comparingwiththecontrolseniumcells,theproliferationpotentialofMRC-5cellsincubatedwithNaturalCerebrolysinwasincreasedobviously(P〔KeyWords〕NaturalCereb
5、rolysin;Humanembryoniclungdiploidfibroblasts;Proliferationactivity;Delay;Replicativesenescence衰老是細(xì)胞的重要生命現(xiàn)象之一，絕大多數(shù)正常細(xì)胞被認(rèn)為僅有有限的分裂能力，當(dāng)其經(jīng)過一定的倍增之后，將進(jìn)入終末增殖狀態(tài)，稱為細(xì)胞衰老。一般來講，人類胚胎的成纖維細(xì)胞在達(dá)到衰老時(shí)，能夠復(fù)制0代左右，由于這種衰老是由分裂傳代而達(dá)到的，故又稱之為復(fù)制性衰老[1]。探討細(xì)胞衰老的分子機(jī)理是人類認(rèn)識(shí)自我研究的重要組成部分，從分子水平研究衰老過程中基因及調(diào)控變化，
6、已成為目前衰老機(jī)理研究的主要方向，同時(shí)研究開發(fā)延緩衰老的藥物將為提高人類生存質(zhì)量提供重要保證，也為衰老相關(guān)疾病的防治提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。天然腦活素為結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)和現(xiàn)代藥效學(xué)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化篩選而成，本研究在以往基礎(chǔ)上以人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象，觀察了天然腦活素對(duì)MRC-細(xì)胞表型、細(xì)胞代齡、傳代速度、細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力及衰老相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在探討其延緩MRC-細(xì)胞復(fù)制性衰老的作用及其機(jī)理。1材料與方法材料細(xì)胞株與動(dòng)物MRC-細(xì)胞是人胚肺成纖維細(xì)胞，由美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)提供，并規(guī)定代及以下為年輕細(xì)胞，50代及以上為老年細(xì)胞，采用
7、含10%胎牛血清的EMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。新西蘭家兔，雄性，體重kg，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，經(jīng)1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)之后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。藥品及試劑研究用藥天然腦活素由深圳市中西醫(yī)結(jié)合臨床研究所進(jìn)行生藥鑒定并由西安楊森制藥廠制備成臨床安全級(jí)粉劑，純度為8%。胎牛血清、EMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。MTT購(gòu)自Sigma公司。β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色試劑盒購(gòu)自美國(guó)KPL公司。其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純級(jí)。主要儀器BIO-RAD80型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，LEicaDM16000B型圖象分析系統(tǒng)，SANYOMCO-15AC型二氧化碳培養(yǎng)箱。1.方法實(shí)
8、驗(yàn)分組共分組，年輕對(duì)照組；空白老齡對(duì)照組；天然腦活素低劑量組；天然腦活素中劑量組；天然腦活素高劑量組，年輕對(duì)照組和空白老齡對(duì)照組以含10%正?？瞻籽宓腅MEM培養(yǎng)，天然腦活素低、中、高劑量組分別以含.5%、5%、10%天然腦活素含藥
