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《天然腦活素促細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞衰老作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、天然腦活素促細(xì)胞增殖和抗細(xì)胞衰老作用的研究作者：李映紅吳正治吳偉康李明張曉麗陳茵楊敏【摘要】目的：探討天然腦活素對人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞（MRC-5）增殖能力和復(fù)制性衰老的影響及其機(jī)理。方法：光鏡下觀察MRC-5細(xì)胞衰老表型，常規(guī)計(jì)數(shù)細(xì)胞代齡、傳代速度，MTT法檢測細(xì)胞增殖活度，X-Gal染色法觀察細(xì)胞衰老情況，計(jì)數(shù)衰老細(xì)胞百分率。結(jié)果：天然腦活素可維持細(xì)胞的非衰老表型，增加MRC-5細(xì)胞代齡，天然腦活素孵育MRC-5細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力較空白老齡對照組明顯升高（P＜0.05），細(xì)胞的增殖速度顯著加快。另外，天然腦活素連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞在老齡階段衰老細(xì)胞數(shù)顯著低于老齡對照細(xì)
2、胞（P＜0.01）。結(jié)論：天然腦活素可升高M(jìn)RC-5細(xì)胞增殖能力，有效延緩細(xì)胞的復(fù)制性衰老?！娟P(guān)鍵詞】天然腦活素；人胚肺成纖維細(xì)胞；增殖活度；復(fù)制性衰老；延緩〔Abstract〕ObjectiveToexploretheeffectsofNaturalCerebrolysinoncellproliferationactivityandreplicativesenescenceofhumanembryoniclungdiploidfibroblasts(MRC-5cells)anditsmechanism.MethodsToobservethechangesofsene
3、scentphenotypebylightmicroscope,countthepassageagesandvelocity,detectthepotentialofcellproliferationbyMTT.ThechangesofcellssenescenceofNaturalCerebrolysin-effectedMRC-5cellsethod,andthepositivecellratesofsenescencecellsaintainedunalteredcellmorphologyandincreasedlifespanofMRC-5byatleast
4、18-21passages.paringcells,theproliferationpotentialofMRC-5cellsincubatedcells(P<0.01).Inaddition,thepositivecellrateofsenescencecellsultigenerationcultureinNaturalCerebrolysinthanthoseofcontrolseniumcells(P<0.01),andsimilartothoseofyoungcells.ConclusionAsaresult,otetheproliferatio
5、nactivityofMRC-5cellsanddelaythecellsreplicativesenescenceefficiently.〔KeyRC-5）為研究對象，觀察了天然腦活素對MRC-5細(xì)胞表型、細(xì)胞代齡、傳代速度、細(xì)胞生長增殖能力及衰老相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在探討其延緩MRC-5細(xì)胞復(fù)制性衰老的作用及其機(jī)理。1材料與方法1.1材料1.1.1細(xì)胞株與動(dòng)物MRC-5細(xì)胞是人胚肺成纖維細(xì)胞，由美國ATCC細(xì)胞庫提供（ATCCNo:CCL-171），并規(guī)定28代及以下為年輕細(xì)胞，50代及以上為老年細(xì)胞，采用含10%胎牛血清（FBS）的EMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。新西蘭家兔，
6、雄性，體重（1.5±0.2）kg，購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，經(jīng)1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)之后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。1.1.2藥品及試劑研究用藥天然腦活素由深圳市中西醫(yī)結(jié)合臨床研究所進(jìn)行生藥鑒定并由西安楊森制藥廠制備成臨床安全級(jí)粉劑，純度為98%。胎牛血清、EMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司。MTT購自Sigma公司。β-半乳糖苷酶細(xì)胞化學(xué)染色試劑盒購自美國KPL公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純級(jí)。1.1.3主要儀器BIO-RAD680型酶聯(lián)免疫檢測儀（USA），LEicaDM16000B型圖象分析系統(tǒng)（Germany），SANYOMCO-15AC型二氧化碳培養(yǎng)箱（Japan）。1.2方法1
7、.2.1實(shí)驗(yàn)分組共分5組，年輕對照組；空白老齡對照組；天然腦活素低劑量組；天然腦活素中劑量組；天然腦活素高劑量組，年輕對照組和空白老齡對照組以含10%正?？瞻籽宓腅MEM培養(yǎng)，天然腦活素低、中、高劑量組分別以含2.5%、5%、10%天然腦活素含藥血清的EMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，血清含量不足10%的用正?？瞻籽逖a(bǔ)充。1.2.2實(shí)驗(yàn)含藥血清的制備含藥血清的制備：將雄性新西蘭家兔隨機(jī)分為天然腦活素灌胃組、空白對照灌胃組，每組6只，根據(jù)成人治療量換算為家兔用量灌胃。每個(gè)家兔每天灌藥量相當(dāng)于上述配成的成藥液2~3mL。連續(xù)灌胃1個(gè)月，末次給藥后2h內(nèi)后行頸動(dòng)脈采
