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《天然腦活素促細胞增殖和抗細胞衰老作用的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、天然腦活素促細胞增殖和抗細胞衰老作用的研究作者：李映紅吳正治吳偉康李明張曉麗陳茵楊敏【摘要】目的：探討天然腦活素對人胚肺二倍體成纖維細胞（MRC-5）增殖能力和復(fù)制性衰老的影響及其機理。方法：光鏡下觀察MRC-5細胞衰老表型，常規(guī)計數(shù)細胞代齡、傳代速度，MTT法檢測細胞增殖活度，X-Gal染色法觀察細胞衰老情況，計數(shù)衰老細胞百分率。結(jié)果：天然腦活素可維持細胞的非衰老表型，增加MRC-5細胞代齡，天然腦活素孵育MRC-5細胞的細胞增殖能力較空白老齡對照組明顯升高（P＜0.05），細胞的增殖速度顯著加快。另外，天然腦活素連續(xù)培養(yǎng)的細胞在老齡階段衰老細胞數(shù)顯著低于老齡對照細
2、胞（P＜0.01）。結(jié)論：天然腦活素可升高MRC-5細胞增殖能力，有效延緩細胞的復(fù)制性衰老?！娟P(guān)鍵詞】天然腦活素；人胚肺成纖維細胞；增殖活度；復(fù)制性衰老；延緩〔Abstract〕ObjectiveToexploretheeffectsofNaturalCerebrolysinoncellproliferationactivityandreplicativesenescenceofhumanembryoniclungdiploidfibroblasts(MRC-5cells)anditsmechanism.MethodsToobservethechangesofsene
3、scentphenotypebylightmicroscope,countthepassageagesandvelocity,detectthepotentialofcellproliferationbyMTT.ThechangesofcellssenescenceofNaturalCerebrolysin-effectedMRC-5cellsethod,andthepositivecellratesofsenescencecellsaintainedunalteredcellmorphologyandincreasedlifespanofMRC-5byatleast
4、18-21passages.paringcells,theproliferationpotentialofMRC-5cellsincubatedcells(P<0.01).Inaddition,thepositivecellrateofsenescencecellsultigenerationcultureinNaturalCerebrolysinthanthoseofcontrolseniumcells(P<0.01),andsimilartothoseofyoungcells.ConclusionAsaresult,otetheproliferatio
5、nactivityofMRC-5cellsanddelaythecellsreplicativesenescenceefficiently.〔KeyRC-5）為研究對象，觀察了天然腦活素對MRC-5細胞表型、細胞代齡、傳代速度、細胞生長增殖能力及衰老相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在探討其延緩MRC-5細胞復(fù)制性衰老的作用及其機理。1材料與方法1.1材料1.1.1細胞株與動物MRC-5細胞是人胚肺成纖維細胞，由美國ATCC細胞庫提供（ATCCNo:CCL-171），并規(guī)定28代及以下為年輕細胞，50代及以上為老年細胞，采用含10%胎牛血清（FBS）的EMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。新西蘭家兔，
6、雄性，體重（1.5±0.2）kg，購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，經(jīng)1周的適應(yīng)性飼養(yǎng)之后進行實驗。1.1.2藥品及試劑研究用藥天然腦活素由深圳市中西醫(yī)結(jié)合臨床研究所進行生藥鑒定并由西安楊森制藥廠制備成臨床安全級粉劑，純度為98%。胎牛血清、EMEM培養(yǎng)基購自美國Gibco公司。MTT購自Sigma公司。β-半乳糖苷酶細胞化學(xué)染色試劑盒購自美國KPL公司。其他試劑均為國產(chǎn)分析純級。1.1.3主要儀器BIO-RAD680型酶聯(lián)免疫檢測儀（USA），LEicaDM16000B型圖象分析系統(tǒng)（Germany），SANYOMCO-15AC型二氧化碳培養(yǎng)箱（Japan）。1.2方法1
7、.2.1實驗分組共分5組，年輕對照組；空白老齡對照組；天然腦活素低劑量組；天然腦活素中劑量組；天然腦活素高劑量組，年輕對照組和空白老齡對照組以含10%正常空白血清的EMEM培養(yǎng)，天然腦活素低、中、高劑量組分別以含2.5%、5%、10%天然腦活素含藥血清的EMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)，血清含量不足10%的用正常空白血清補充。1.2.2實驗含藥血清的制備含藥血清的制備：將雄性新西蘭家兔隨機分為天然腦活素灌胃組、空白對照灌胃組，每組6只，根據(jù)成人治療量換算為家兔用量灌胃。每個家兔每天灌藥量相當(dāng)于上述配成的成藥液2~3mL。連續(xù)灌胃1個月，末次給藥后2h內(nèi)后行頸動脈采
