黃曲霉檢測(cè)方法研究進(jìn)展綜述

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1、《科技論文寫(xiě)作與實(shí)踐》課程論文黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展姓名：謝桂煥專(zhuān)業(yè)年級(jí)：09生物信息學(xué)學(xué)號(hào)：0905670"總成績(jī)：完成時(shí)間：2012-11-13黃曲霉毒素檢測(cè)方法研究進(jìn)展謝桂煥(福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院09生物信息學(xué)福州350002)摘要：黃曲霉毒素是劇毒性物質(zhì)，多在食品川發(fā)現(xiàn)，對(duì)人類(lèi)危害極大。概述了黃曲霉毒素的理化性質(zhì)及危害，討論了黃曲霉毒素的各種檢測(cè)方法如薄層層析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等，并對(duì)未來(lái)黃曲霉毒素的檢測(cè)方法進(jìn)行了展望。關(guān)鍵詞：黃曲霉素；危害；檢測(cè)方法引言：食品安全是人們都極其關(guān)注的

2、，尤其是綠色食品和有機(jī)食品概念的提出更加增加人們對(duì)食品安全的關(guān)注。食品安全的影響因素很多，其中AF的危害是比較突出的一個(gè)問(wèn)題⑴。黃曲霉毒素(Aflatoxin,簡(jiǎn)稱(chēng)AF)是由真菌黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一組強(qiáng)毒性的次生代謝產(chǎn)物，尤其AFB1是目前發(fā)現(xiàn)的真菌類(lèi)毒素屮毒性最大、污染范圍最廣的毒素Z—⑵。對(duì)它的研究是目前國(guó)內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn)。在世界不同地區(qū)發(fā)現(xiàn)了這些真菌大量存在于供人類(lèi)食用的食品中，AF污染已導(dǎo)致嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題⑶。自20世紀(jì)60年代以來(lái)，有關(guān)AF的危害被大量報(bào)道，以致AF已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素。因

3、此，尋求準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法⑷，對(duì)AF進(jìn)行高效的定性定量的分析，是AF研究的一個(gè)重要方面。正文KAF的概況AFT在紫外線下發(fā)特定的熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為藍(lán)紫色熒光的B族和黃綠色熒光的G族兩大類(lèi)及其衍生物⑸。最具有代表性為AFB1、黃曲霉毒B2(AFB2)、黃曲霉毒素Gl(AFG1)、黃曲霉毒素G2(AFG2)。AF難溶于水、己烷、石油醯，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑。在中性溶液屮較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸性溶液川稍有分解，在pH9~10的強(qiáng)堿溶液屮迅速分解成無(wú)毒的鹽，易被堿或強(qiáng)氧化劑破壞。純品

4、為無(wú)色結(jié)晶，耐高溫，分解溫度為268e,紫外線對(duì)低濃度AF有一定的破壞性。在口然條件下，食品中AF穩(wěn)定性很強(qiáng)。被AFB1污染的稻谷，室溫下自然存放可長(zhǎng)達(dá)20多氛AF主要存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米等食物中，食用了被AF污染的食物后，會(huì)對(duì)機(jī)體造成損害甚至危及生命。AF對(duì)人和動(dòng)物危害與AF抑制蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。研究表明&刀，AF的細(xì)胞毒作用是干擾RNA和DNA的合成，進(jìn)而干擾細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，導(dǎo)致全身性傷害oAFBl具有很強(qiáng)的致畸、致癌、致突變的作用，其毒性因動(dòng)物的種類(lèi)、年齡、性別、體況以及營(yíng)養(yǎng)狀況的不同存在差異

5、，年幼動(dòng)物、雄性動(dòng)物較敏感，主要損害動(dòng)物的肝臟。經(jīng)常食用含有AF飼料的奶牛,其產(chǎn)奶量明顯下降，同時(shí)奶中含有代謝物AFM1和AFM2等毒素。人食用了被AF污染的食物，會(huì)通過(guò)消化系統(tǒng)進(jìn)入肝臟、腎臟等內(nèi)臟屮，部分會(huì)存在肌肉等組織屮。試驗(yàn)證明，用含有AF的食物來(lái)喂食小鼠，其先后出現(xiàn)肝癌、胃癌、腎小管腺癌等病變。AFB1與DNA的共價(jià)結(jié)合抑制DNA的甲基化，從而改變基因表達(dá)和細(xì)胞分化，激活哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)致癌基因的轉(zhuǎn)化形成。食用被AFT污染的食品，會(huì)出現(xiàn)急性中毒，臨床表現(xiàn)以黃疸為主，并有嘔吐、厭食和發(fā)燒等癥狀，重癥者甚至死亡。

6、2、檢測(cè)方法2.1薄層層析法（TLC）TLC是測(cè)定AF的主要方法，多數(shù)國(guó)家都把它做為國(guó)標(biāo)中的主耍測(cè)定方法。其原理是樣品經(jīng)過(guò)提収、柱層析、洗脫、濃縮、薄層板展開(kāi)分離后，在365nm紫外燈下,AFB1、AFB2、AFG1和AFG2分別顯示紫色、藍(lán)紫色、綠色和綠色熒光。并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來(lái)確定其含量。所用設(shè)備簡(jiǎn)單、費(fèi)用低廉、容易學(xué)握，適用大量樣品的分離、篩選，一般的實(shí)驗(yàn)室均可開(kāi)展，屬于定性和半定暈檢測(cè)。Stroka181開(kāi)發(fā)出的光度檢測(cè)器在檢測(cè)AF時(shí)，最低限可以檢測(cè)到Ing。Otta等囹在TLC上結(jié)合光度計(jì)

7、，不僅能把樣品提純，而且也能同時(shí)1次對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。江湖等〔訕利用TLC檢測(cè)農(nóng)產(chǎn)品中的AFT,AFB1>AFB2>AFG1、AFG2的檢出限達(dá)018、014、017、014Lg/kg。TLC有單向展開(kāi)和雙向展開(kāi)法，其中雙向展開(kāi)法能進(jìn)一步除去樣品川的雜質(zhì)，提高靈敏度，省略了柱層析等凈操作步驟。TLC法由于設(shè)備簡(jiǎn)單，一般實(shí)驗(yàn)室都能滿足，利于普及，仍是現(xiàn)在檢測(cè)AFT的主要方法Z*02.2高效液相色譜法（HTLC）HPLC具有高分辨率，分析吋間較短等優(yōu)點(diǎn)用此方法檢測(cè)黃曲霉毒素一般要經(jīng)過(guò)樣品純化、衍生，最后經(jīng)HTLC熒光

8、檢測(cè)器檢測(cè)。早期試驗(yàn)研究中使用的正相色譜分離、紫外檢測(cè)器測(cè)定HPLC的方法己被現(xiàn)代的反相色譜分離和熒光檢測(cè)器測(cè)定的方法所取代，并得到普遍應(yīng)用和發(fā)展。與紫外檢測(cè)器相比較，熒光檢測(cè)器具有靈敏度高、選擇性好以及干擾峰少的優(yōu)點(diǎn)。由于AF的熒光強(qiáng)度較弱，直接測(cè)定會(huì)影響其靈敏度和準(zhǔn)確度。試驗(yàn)中可以對(duì)AF進(jìn)行衍生以增強(qiáng)其熒光強(qiáng)度.常用的衍生方法有:柱前三氟乙酸銜生方法、柱