黃曲霉檢測方法研究進展綜述

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1、《科技論文寫作與實踐》課程論文黃曲霉毒素檢測方法研究進展姓名：謝桂煥專業(yè)年級：09生物信息學學號：0905670"總成績：完成時間：2012-11-13黃曲霉毒素檢測方法研究進展謝桂煥(福建農(nóng)林大學生命科學學院09生物信息學福州350002)摘要：黃曲霉毒素是劇毒性物質(zhì)，多在食品川發(fā)現(xiàn)，對人類危害極大。概述了黃曲霉毒素的理化性質(zhì)及危害，討論了黃曲霉毒素的各種檢測方法如薄層層析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等，并對未來黃曲霉毒素的檢測方法進行了展望。關(guān)鍵詞：黃曲霉素；危害；檢測方法引言：食品安全是人們都極其關(guān)注的

2、，尤其是綠色食品和有機食品概念的提出更加增加人們對食品安全的關(guān)注。食品安全的影響因素很多，其中AF的危害是比較突出的一個問題⑴。黃曲霉毒素(Aflatoxin,簡稱AF)是由真菌黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一組強毒性的次生代謝產(chǎn)物，尤其AFB1是目前發(fā)現(xiàn)的真菌類毒素屮毒性最大、污染范圍最廣的毒素Z—⑵。對它的研究是目前國內(nèi)外關(guān)注的熱點。在世界不同地區(qū)發(fā)現(xiàn)了這些真菌大量存在于供人類食用的食品中，AF污染已導致嚴重的食品安全問題⑶。自20世紀60年代以來，有關(guān)AF的危害被大量報道，以致AF已成為最受人們關(guān)注的一種真菌毒素。因

3、此，尋求準確、快速、簡便的檢測方法⑷，對AF進行高效的定性定量的分析，是AF研究的一個重要方面。正文KAF的概況AFT在紫外線下發(fā)特定的熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為藍紫色熒光的B族和黃綠色熒光的G族兩大類及其衍生物⑸。最具有代表性為AFB1、黃曲霉毒B2(AFB2)、黃曲霉毒素Gl(AFG1)、黃曲霉毒素G2(AFG2)。AF難溶于水、己烷、石油醯，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺等有機溶劑。在中性溶液屮較穩(wěn)定，在強酸性溶液川稍有分解，在pH9~10的強堿溶液屮迅速分解成無毒的鹽，易被堿或強氧化劑破壞。純品

4、為無色結(jié)晶，耐高溫，分解溫度為268e,紫外線對低濃度AF有一定的破壞性。在口然條件下，食品中AF穩(wěn)定性很強。被AFB1污染的稻谷，室溫下自然存放可長達20多氛AF主要存在于霉變的花生、谷物、果仁和大米等食物中，食用了被AF污染的食物后，會對機體造成損害甚至危及生命。AF對人和動物危害與AF抑制蛋白質(zhì)的合成有關(guān)。研究表明&刀，AF的細胞毒作用是干擾RNA和DNA的合成，進而干擾細胞蛋白質(zhì)的合成，導致全身性傷害oAFBl具有很強的致畸、致癌、致突變的作用，其毒性因動物的種類、年齡、性別、體況以及營養(yǎng)狀況的不同存在差異

5、，年幼動物、雄性動物較敏感，主要損害動物的肝臟。經(jīng)常食用含有AF飼料的奶牛,其產(chǎn)奶量明顯下降，同時奶中含有代謝物AFM1和AFM2等毒素。人食用了被AF污染的食物，會通過消化系統(tǒng)進入肝臟、腎臟等內(nèi)臟屮，部分會存在肌肉等組織屮。試驗證明，用含有AF的食物來喂食小鼠，其先后出現(xiàn)肝癌、胃癌、腎小管腺癌等病變。AFB1與DNA的共價結(jié)合抑制DNA的甲基化，從而改變基因表達和細胞分化，激活哺乳動物細胞內(nèi)致癌基因的轉(zhuǎn)化形成。食用被AFT污染的食品，會出現(xiàn)急性中毒，臨床表現(xiàn)以黃疸為主，并有嘔吐、厭食和發(fā)燒等癥狀，重癥者甚至死亡。

6、2、檢測方法2.1薄層層析法（TLC）TLC是測定AF的主要方法，多數(shù)國家都把它做為國標中的主耍測定方法。其原理是樣品經(jīng)過提収、柱層析、洗脫、濃縮、薄層板展開分離后，在365nm紫外燈下,AFB1、AFB2、AFG1和AFG2分別顯示紫色、藍紫色、綠色和綠色熒光。并根據(jù)其在薄層上顯示的最低檢出量來確定其含量。所用設備簡單、費用低廉、容易學握，適用大量樣品的分離、篩選，一般的實驗室均可開展，屬于定性和半定暈檢測。Stroka181開發(fā)出的光度檢測器在檢測AF時，最低限可以檢測到Ing。Otta等囹在TLC上結(jié)合光度計

7、，不僅能把樣品提純，而且也能同時1次對多個樣品進行檢測。江湖等〔訕利用TLC檢測農(nóng)產(chǎn)品中的AFT,AFB1>AFB2>AFG1、AFG2的檢出限達018、014、017、014Lg/kg。TLC有單向展開和雙向展開法，其中雙向展開法能進一步除去樣品川的雜質(zhì)，提高靈敏度，省略了柱層析等凈操作步驟。TLC法由于設備簡單，一般實驗室都能滿足，利于普及，仍是現(xiàn)在檢測AFT的主要方法Z*02.2高效液相色譜法（HTLC）HPLC具有高分辨率，分析吋間較短等優(yōu)點用此方法檢測黃曲霉毒素一般要經(jīng)過樣品純化、衍生，最后經(jīng)HTLC熒光

8、檢測器檢測。早期試驗研究中使用的正相色譜分離、紫外檢測器測定HPLC的方法己被現(xiàn)代的反相色譜分離和熒光檢測器測定的方法所取代，并得到普遍應用和發(fā)展。與紫外檢測器相比較，熒光檢測器具有靈敏度高、選擇性好以及干擾峰少的優(yōu)點。由于AF的熒光強度較弱，直接測定會影響其靈敏度和準確度。試驗中可以對AF進行衍生以增強其熒光強度.常用的衍生方法有:柱前三氟乙酸銜生方法、柱