光動(dòng)力法制備dc膠質(zhì)瘤疫苗抗腫瘤作用的研究

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1、光動(dòng)力法制各DC膠質(zhì)瘤疫苗抗腫瘤作用的研究光動(dòng)力法制備DC膠質(zhì)瘤疫苗抗腫瘤作用的研究專業(yè)：外科學(xué)碩士研究生：袁士翔導(dǎo)師：李方成副教授摘要目的：腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)原發(fā)惡性腫瘤，針對(duì)它的光動(dòng)力治療(photodynamictherapy，PDT)和免疫治療日漸成為研究的熱點(diǎn)。因此本研究通過將PDT和基于樹突狀細(xì)胞(dendriticcell，DC)的免疫治療結(jié)合，將C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞經(jīng)光動(dòng)力法處理后，用酸洗法獲取其表面抗原肽致敏DC制備DC疫苗，研究其誘導(dǎo)的大鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(eytotoxicTlymphocyte，CTL)在體外殺傷C

2、6細(xì)胞的活性，以及PDT對(duì)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞免疫原性的直接影響，從而為PDT和免疫療法結(jié)合治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤找到了新的切入點(diǎn)。方法：自大鼠骨髓分離DC前體細(xì)胞，在體外經(jīng)粒細(xì)胞．巨噬細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte·macrophagecolonystimulatingfactor，GM-GSF)和白細(xì)胞介素-4(interluekin-4，IL-4)誘導(dǎo)、擴(kuò)增獲得成熟DC。C6細(xì)胞經(jīng)PDT處理后，對(duì)尚貼壁的細(xì)胞以弱酸洗脫法獲取其表面抗原：同時(shí)從光照后的上清液中直接提取全細(xì)胞抗原。而未作PDT處理的C6細(xì)胞以弱酸洗脫法或反復(fù)凍融法提取抗原。

3、然后分別以這四種抗原致敏DC，制成DC疫苗然后經(jīng)尾靜脈接種SD大鼠，連續(xù)3周共3次后，取脾作CTL的體外殺傷活性測定。結(jié)果：①本實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)培養(yǎng)出的DC具有典型的細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征和細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)。所培養(yǎng)的DC在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的使用也證明其抗原呈遞功能正常，因此是一種簡單實(shí)用培養(yǎng)DC的方法。②隨著光敏劑濃度及光照時(shí)間的增加，腫瘤細(xì)胞的死亡率增高，但當(dāng)死亡率超過某個(gè)值以后，繼續(xù)增加光動(dòng)力劑量，腫瘤細(xì)胞死亡率的升高明顯變緩。HMME濃度為5ug／ml，照射時(shí)間為2min時(shí)，C6細(xì)胞死亡率為7004。③四種疫苗誘導(dǎo)CTL的體外殺傷活性：光照后酸洗組為

4、95．5％士o．016，光照后上清組為90．2％士o．024，酸洗組為73．3％士-0．027，凍融組為63．6光動(dòng)力i上制備DC膠質(zhì)瘤疫茁抗腫惱作用的研究％士o．049，PBS對(duì)照組為O．4％士O．063，幾乎無殺傷作用。結(jié)果表明PDT后酸洗獲得的抗原刺激DC成熟的能力最強(qiáng)，它制備的DC疫苗誘導(dǎo)的CTL體外殺傷率明顯高于其它各組。結(jié)論：PDT能直接增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，用酸洗法獲取PDT處理后的腫瘤細(xì)胞表面抗原肽制備DC疫苗足一種有前景的新方法。關(guān)鍵詞：光動(dòng)力學(xué)療法；弱酸洗脫法；樹突狀細(xì)胞；膠質(zhì)瘤疫苗；細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞．Ⅱ．光動(dòng)力法

5、制備DC膠質(zhì)瘤疫苗抗腫瘤作用的研究Antitumorefficacyofphotodynamictherapy—generateddendriticcellgliomavaccineMajor：surgeryM．Scandidate：YuanShixiangSupervisor：．LiFangehengassociateprofessorAbstractOBJECTIVE：Glmmaisoneofthemostcommonintracraniaimalignanttumorsofhumanbeings．Nowadaysphotodynam

6、ictherapy(PDT)andimmunotherapyhavebecomethekeypointsintheinvestigationoftheglioma．Inourstudy,weusedPDTcombinedwithimmunotherapyofdendriticceUs(DCs)toaimattheeradicationofthe甜ioma．AndtoinvestigatetheantitumorefficiencyofcytotoxicTlymphocytes(CTLs)activatedbyDCspulsedwithan

7、tigenpoptideseIntedfromPDT-treatedC6gliomacellsbymildacid．ThenwecantestthedirectinfluenceofPDTontheimmunogenicityofC6gliomacells．Asaresult,wefindanewjointpointforthecombinationofPDTandimmunotherapyinthetreatmentoftheglioma．METHODS：ProgenitorsofDCsderivedfromratbonemarroww

8、eredifferentiatedandproliferatedintoDCsinmediumsupplementedwithrrlL-4andrrGM-CSF．AfterPDT．tumorc