冷哮丸對哮喘豚鼠模型作用機制的實驗的研究

《冷哮丸對哮喘豚鼠模型作用機制的實驗的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。

1、2．1．4主要儀器：JSC-OK雙頭式多功能型超聲波霧化器；RJE壓力換能器；LMS-2B型二道生理記錄儀；DH一140型動物人工呼吸機；ThermoLabsystemsMultiskanMK，酶標分析儀；722型光柵分光光度計；OlympusBX50F-3雙顯微鏡(含自動照相裝置NikonE990)；VEX380型一80"(2低溫冰箱。2．2方法2．2．1動物模型復制以卵蛋白致敏和攻擊復制豚鼠哮喘模型。實驗第1天，配制lOOg／L卵蛋白生理鹽水，豚鼠腹腔注射lml卵蛋白生理鹽水以致敏；第15天將致敏豚鼠置于15升透明玻璃罩

2、內，給予1％卵蛋白生理鹽水霧化吸入。以后每隔24h以1％卵蛋白生理鹽水誘喘，共4次。正常對照組用同樣方法以等量生理鹽水進行腹腔注射及霧化吸入。2．2．2動物分組將豚鼠隨機分為6組：①正常對照組，②哮喘模型組，③西藥對照組(地塞米松治療組)，④冷哮丸大劑量組，⑤冷哮丸中劑量組，⑥冷哮丸小劑量組，每組1o只。2．2．3實驗檢測項目2．2．3．1實驗一冷哮丸對哮喘豚鼠氣道反應性的影響。①一般情況觀察：包括各組豚鼠的行為、飲食、體重、排便、皮毛及死亡等情況。②乙酰膽堿(Ach)支氣管激發(fā)試驗：于第23d治療結束后2h，用3％戊巴比妥

3、鈉30mg／kg腹腔注射麻醉，仰面固定于木板上，切開頸部皮膚暴露頸靜脈及氣管，用靜脈留置針行頸外靜脈穿刺置管，行氣管切開、氣管插管，連DH-140型動物人工呼吸機行輔助通氣。每只豚鼠分別給予成倍增加的乙酰膽堿(o、12．5、25、50、100、200pg／kg)，每次進液量200“l(fā)，兩個相鄰給藥點間隔5min。采用hniRes2003動物肺功能分析系統(tǒng)連續(xù)動態(tài)測定呼氣阻力(expiratoryresistance，Re)，計算各給藥時間點的Re與基礎的Re比值(以百分數(shù)表示)，以Re的變化代表氣道反應性。③組織胺氣道反應性

4、測定：豚鼠麻醉后，縱向剪開頸部皮膚及皮下組織，暴露氣管，取中段氣管軟骨環(huán)，剪開形成3mm寬的氣管螺旋條。用細線將螺旋條一端固定于浴槽底部，另一端連與壓力換能器。對螺旋條施以2g的起始張力，平衡1h后，間隔2-3rain依次加入10。6-10。3mol／L的組織胺進行刺激，連續(xù)記錄氣管螺旋條的張力變化。2．2．3．2實驗二冷哮丸對哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS數(shù)量及肺組織形態(tài)學的影響。于第23d麻醉動物，分離頸動脈，取頸動脈血lml作白細胞分類和EOS計數(shù)。其余全血離心，取血清，放置一20"C低溫冰箱中保存待檢。對采血后的豚

5、鼠進行肺泡灌洗，并回收肺泡灌洗液(BALF)，瑞氏染色后行EOS計數(shù)，肉眼及光鏡觀察豚鼠肺組織形態(tài)學變化。2．2．3．3實驗三、四、五冷哮丸對哮喘豚鼠血清總IgE、血清和BALF中No、IL一4、IL一5、ET-1的影響。按豚鼠IgE、NO、IL-4、IL-5、ET-1等相關試劑盒說明進行操作測定。2．3統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)均以；4-s表示，采用SPSSl7．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，尸<0．05為差異有統(tǒng)計學意義。3結果3．1實驗一：冷哮丸對哮喘豚鼠氣道反應性的影響3．1．1一般情況結果：正常對照組豚鼠無

6、任何不適反應，平均體重增加，毛色光澤。哮喘模型組豚鼠普遍精神較差，活動減少，反應遲鈍，進食及飲水量明顯下降，毛色失去光澤，出現(xiàn)不同程度的呼吸次數(shù)增加，張口等呼吸困難癥狀，在整個喂養(yǎng)過程中體重增加不明顯。哮喘模型組1只豚鼠哮喘嚴重發(fā)作經(jīng)搶救無效死亡。各用藥組豚鼠情況均較哮喘模型組明顯改些音。3．1．2各組豚鼠在不同濃度Ach激發(fā)后Re增長率比較：在Ach濃度為50ug／kg、100“g／kg、200ug／kg時，哮喘模型組Re的增長率與正常對照組比較，差異有顯著統(tǒng)計學意義(尸<0．01)。在hch濃度為50“g／kg、100“

7、g／kg、200“g／kg時，地塞米松治療組、冷哮丸大、中、小劑量組與哮喘模型組Re的增長率比較，差異有統(tǒng)計學意義(尸<0．05或尸o．05)。3．1．3各組豚鼠氣管螺旋條對組織胺的反應性比較：當浴槽中組織胺濃度達到1o。5-10-3t001／L時，各組豚鼠氣管螺旋條產(chǎn)生劑量依賴性收縮。哮喘模型組豚鼠氣管螺旋條張力明顯高于正常對照組(尸

8、的反應性均降低，各個濃度組織胺所誘導的氣管螺旋條收縮張力與正常組類似(尸>0．05)。3．2實驗二冷哮丸對哮喘豚鼠外周血和BALF中EOS數(shù)量及肺組織形態(tài)學的影響3．2．1冷哮丸對豚鼠血及BALF中EOS計數(shù)的影響各組豚鼠血及BALF中EOS計數(shù)結果表明：正常對照組豚鼠血及BALF中白細包