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《分子信標(biāo)-taqman探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量pcr新型探針及-生物技術(shù)通報(bào)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、生物技術(shù)通報(bào)·技術(shù)與方法·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2016,32(11):107-114分子信標(biāo)-TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR新型探針及引物1，32211，3姜文燦?岳素文?江洪?葛素君?王成彬（1.中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院臨檢科，北京100853；2.北京泰格瑞分子檢驗(yàn)有限公司，北京100085；3.溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，溫州325000）摘要：在TaqMan探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光定量PCR中，排除由引物探針聚合延伸引起的假陽(yáng)性問(wèn)題以及由引物二聚體（PrimerDimer，PD）引起的假陰性問(wèn)題。首先對(duì)不同探針進(jìn)行引物探針聚合實(shí)驗(yàn)；然
2、后通過(guò)雙重PCR的干擾實(shí)驗(yàn)選擇合適的內(nèi)標(biāo)基因，并使用內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒檢測(cè)驗(yàn)證中部同序引物排除PD干擾的實(shí)用性；最后比較探針?lè)ú煌w系檢測(cè)HBV基因的靈敏度。結(jié)果表明，引物與探針聚合實(shí)驗(yàn)中，含有反義堿基的HBVP4在重復(fù)實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)假陽(yáng)性；競(jìng)爭(zhēng)性雙重PCR和非競(jìng)爭(zhēng)性雙重PCR兩模板開(kāi)始出-9-8現(xiàn)干擾作用的濃度差分別為20倍和100倍；對(duì)于內(nèi)標(biāo)基因，使用中部同序引物對(duì)以及普通引物對(duì)分別可以檢測(cè)到10和10稀釋度；3種HBV基因檢測(cè)體系，使用普通引物對(duì)可以檢測(cè)到Ct33左右，加入內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)和使用中部同序引物對(duì)均可檢測(cè)到Ct35左右。在TaqMan-分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)調(diào)整的基礎(chǔ)上引入反
3、義堿基可以在排除由引物和探針聚合延伸引起的假陽(yáng)性問(wèn)題；在探針?lè)ㄖ?，使用中部同序引物?duì)和加入內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)均可降低PD的干擾程度，提升檢測(cè)的靈敏度。關(guān)鍵詞：實(shí)時(shí)熒光定量PCR；TaqMan探針；反義堿基；引物二聚體；內(nèi)標(biāo)系統(tǒng)DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.029NewProbeandPrimerforMolecularBeacon-TaqManRealTimeFluorescentQuantitativePCR1，32211，3JIANGWen-canYUESu-wenJIANGHongGESu-junWANGC
4、heng-bin（1.DepartmentofClinicalLaboratoryMedicine，ChinesePeople’sLiberationArmyGeneralHospital&PostgraduateMedicalSchool，Beijing100853；2.BeijingTagArrayMolecularTestCo.，Ltd，Beijing100085；3.CollegeofLaboratoryMedicineandLifeScience，WenzhouMedicalUniversity，Wenzhou325000）Abstract:Ourpur
5、poseistoeliminatethefalsepositiveproblemcausedbyprimer-probeaggregationandextension，aswellasthefalsenegativeproblemcausedbyprimerdimer（PD）.First，theprimerandprobeaggregationresultsweretestedfordifferentprobes；thentheappropriateinternalcontrolgene（IC）wasselectedbasedonthecompetitiveint
6、erferenceexperimentsofduplexPCR，simultaneously，thepracticabilityofcentral-homeprimerexcludingtheinferenceofPDwasverifiedontheplasmidoftheIC；andfinally，thesensitivitiesofdifferentsystemsforTaqManmethodwerecompared.TheprobeHBVP4，containinganantisensebase，didnotproducefalsepositiveresult
7、sintherepeatedtrials；theconcentrationdifferenceatwhichinterferencesforthetemplatesofcompetitiveandnon-competitiveduplexPCR-9werenoticedwas20timesand100times，respectively.Thedilutionthatcoulddetectedbycentral-homeprimerandcommonprimerwas10-8and10，respectively.Andfor3HBVgenedetectionsys
8、tems，
