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1、應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)2006,12(2):273~277ChinJApplEnvironBiol=ISSN1006687X20060425基于分子信標(biāo)探針的熒光定量PCR方法*檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品1**11222劉光明蘇文金蔡慧農(nóng)蔡海松林新堅(jiān)張偉光(1集美大學(xué)生物工程學(xué)院福建廈門361021)(2福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院福州350013)摘要選擇了內(nèi)源基因大豆植物凝集素(lectin)、玉米轉(zhuǎn)化酶(invertase)和外源基因花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)啟動(dòng)子的分子信標(biāo)探針,確定了探針濃度和鎂
2、離子濃度等反應(yīng)條件,分別對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆和轉(zhuǎn)基因玉米系列標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行內(nèi)源基因和外源基因的熒光PCR擴(kuò)增,在PCR反應(yīng)過程中分別以兩種熒光通道信號(hào)分別追蹤同一樣品DNA內(nèi)源基因和外源基因的擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)變化,并依此繪制了循環(huán)閾值與轉(zhuǎn)基因食品百分比含量之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立了轉(zhuǎn)基因大豆和轉(zhuǎn)基因玉米的分子信標(biāo)探針-熒光定量PCR檢測(cè)方法,該方法具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn),實(shí)現(xiàn)了對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的定量分析.圖7表1參11關(guān)鍵詞轉(zhuǎn)基因食品;分子信標(biāo)探針;熒光PCR;定量PCRCLCTS207.3Q78FluorescenceQuantitati
3、vePCRDetectionofTransgenicFood*BasedonMolecularBeaconProbe1**11222LIUGuangming,SUWenjin,CAIHuinong,CAIHaisong,LINXinjian&ZHANGWeiguang(1SchoolofBiotechnology,JimeiUniversity,Xiamen361021,Fujian,China)(2FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China)Abstract
4、Primersandmolecularbeaconprobesofendogenousgenelectin,invertase,andexogenousgeneCaMV35Spromoterweredesigned.Thereactionconditions,includingprobeconcentrationandMgCl2concentrationwereoptimized.Geneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaizereferencematerialswe
5、redetectedbyfluorescencePCRamplificationofendogenousgeneandexogenousgene.ThestandardcurvesofCtbetweenendogenousgeneandexogenousgenevs.thetransgenic-contentinreferencematerialsweregeneratedandalinearregressionequationcouldbeobtained.Molecularbeacon-fluorescencequa
6、ntitativePCRmethodwasestablishedtodetectgeneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaize.Themethodwasusedtoquantitativelydetectandidentifytransgenicfood.Fig7,Tab1,Ref11Keywordstransgenicfood;molecularbeaconprobe;fluorescencePCR;quantitativePCRCLCTS207.3Q78[2
7、]國(guó)際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用署最新公布的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明,2003外源DNA為目標(biāo)兩類,檢測(cè)表達(dá)蛋白質(zhì)的方法(如ELISA42年全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積達(dá)到677010hm,其中種植面法)具有靈敏度較高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),但存在覆蓋率低、難以42積居前兩位的是轉(zhuǎn)基因大豆與玉米,分別達(dá)到414010hm檢測(cè)深加工產(chǎn)品等缺點(diǎn);檢測(cè)外源DNA方法(如PCR法)以其42[1]和155010hm.隨著轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的不斷開發(fā)和利用,高靈敏性、特異性較好和快速簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)被廣泛采用,但常規(guī)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品對(duì)人類健康和生態(tài)環(huán)境的影響已受到了全世界的PCR技術(shù)存
8、在的問題是可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果和不能進(jìn)行定量[3]廣泛關(guān)注.不論是對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)注管理,或是對(duì)轉(zhuǎn)基因檢測(cè).與非轉(zhuǎn)基因原料的分別輸送,轉(zhuǎn)基因原料和食品的檢測(cè)技術(shù)是熒光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQPCR)技必不可少的,這是對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品
