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《基于分子信標探針的熒光定量pcr方法檢測轉基因食品》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、應用與環(huán)境生物學報2006,12(2):273~277ChinJApplEnvironBiol=ISSN1006687X20060425基于分子信標探針的熒光定量PCR方法*檢測轉基因食品1**11222劉光明蘇文金蔡慧農(nóng)蔡海松林新堅張偉光(1集美大學生物工程學院福建廈門361021)(2福建省農(nóng)業(yè)科學院福州350013)摘要選擇了內(nèi)源基因大豆植物凝集素(lectin)、玉米轉化酶(invertase)和外源基因花椰菜花葉病毒35S(CaMV35S)啟動子的分子信標探針,確定了探針濃度和鎂
2、離子濃度等反應條件,分別對轉基因大豆和轉基因玉米系列標準品進行內(nèi)源基因和外源基因的熒光PCR擴增,在PCR反應過程中分別以兩種熒光通道信號分別追蹤同一樣品DNA內(nèi)源基因和外源基因的擴增動力學變化,并依此繪制了循環(huán)閾值與轉基因食品百分比含量之間的標準曲線,建立了轉基因大豆和轉基因玉米的分子信標探針-熒光定量PCR檢測方法,該方法具有特異性強、敏感性高的特點,實現(xiàn)了對轉基因食品的定量分析.圖7表1參11關鍵詞轉基因食品;分子信標探針;熒光PCR;定量PCRCLCTS207.3Q78FluorescenceQuantitati
3、vePCRDetectionofTransgenicFood*BasedonMolecularBeaconProbe1**11222LIUGuangming,SUWenjin,CAIHuinong,CAIHaisong,LINXinjian&ZHANGWeiguang(1SchoolofBiotechnology,JimeiUniversity,Xiamen361021,Fujian,China)(2FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China)Abstract
4、Primersandmolecularbeaconprobesofendogenousgenelectin,invertase,andexogenousgeneCaMV35Spromoterweredesigned.Thereactionconditions,includingprobeconcentrationandMgCl2concentrationwereoptimized.Geneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaizereferencematerialswe
5、redetectedbyfluorescencePCRamplificationofendogenousgeneandexogenousgene.ThestandardcurvesofCtbetweenendogenousgeneandexogenousgenevs.thetransgenic-contentinreferencematerialsweregeneratedandalinearregressionequationcouldbeobtained.Molecularbeacon-fluorescencequa
6、ntitativePCRmethodwasestablishedtodetectgeneticallymodifiedsoybeanandgeneticallymodifiedmaize.Themethodwasusedtoquantitativelydetectandidentifytransgenicfood.Fig7,Tab1,Ref11Keywordstransgenicfood;molecularbeaconprobe;fluorescencePCR;quantitativePCRCLCTS207.3Q78[2
7、]國際農(nóng)業(yè)生物技術應用署最新公布的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明,2003外源DNA為目標兩類,檢測表達蛋白質(zhì)的方法(如ELISA42年全球轉基因作物種植面積達到677010hm,其中種植面法)具有靈敏度較高、特異性強的優(yōu)點,但存在覆蓋率低、難以42積居前兩位的是轉基因大豆與玉米,分別達到414010hm檢測深加工產(chǎn)品等缺點;檢測外源DNA方法(如PCR法)以其42[1]和155010hm.隨著轉基因農(nóng)產(chǎn)品的不斷開發(fā)和利用,高靈敏性、特異性較好和快速簡便的優(yōu)點被廣泛采用,但常規(guī)轉基因產(chǎn)品對人類健康和生態(tài)環(huán)境的影響已受到了全世界的PCR技術存
8、在的問題是可能產(chǎn)生假陽性結果和不能進行定量[3]廣泛關注.不論是對轉基因產(chǎn)品進行標注管理,或是對轉基因檢測.與非轉基因原料的分別輸送,轉基因原料和食品的檢測技術是熒光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQPCR)技必不可少的,這是對轉基因產(chǎn)品
