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《大鼠局灶性腦缺血后繼發(fā)性腦損傷機(jī)制及替米沙坦腦保護(hù)作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文大鼠局灶性腦缺血后繼發(fā)性腦損傷機(jī)制及替米沙坦腦保護(hù)作用的研究姓名：祝春華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張祥建201204中文摘要大鼠局灶性腦缺血后繼發(fā)性腦損傷機(jī)制及替米沙坦腦保護(hù)作用的研究摘要腦血管病是造成中國(guó)居民死亡的第一原因和成年年人殘疾的第一原因，以缺血性腦血管病占80％。研究表明，腦缺血觸發(fā)一系列復(fù)雜的病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)，包括能量代謝異常、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、自由基生成、興奮性氨基酸的毒性作用等，直接或者間接導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡／死亡，破壞血腦屏障形成腦水腫，并
2、最終導(dǎo)致神經(jīng)功能缺失。在腦缺血后復(fù)雜的病理?yè)p傷機(jī)制中，炎癥反應(yīng)是繼發(fā)性腦損傷的最重要原因之一。盡管目前對(duì)缺血性腦損傷機(jī)制有了比較深入的了解，但仍缺乏有效的治療手段。除了極少數(shù)腦缺血患者在超早期經(jīng)過(guò)溶栓治療取得滿意效果外，絕大多數(shù)患者將面臨殘疾甚至死亡的厄運(yùn)。探討有效阻止缺血性腦損傷機(jī)制，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的方法，是目前神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。盡管已經(jīng)有多種藥物經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，證明具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，但多數(shù)未能在臨床得到廣泛應(yīng)用，使理論和實(shí)踐大大脫節(jié)。替米沙坦是一種臨床廣泛應(yīng)用的血管緊張素受
3、體阻斷劑類(angiotensintype1receptorblocker，ARB)降血壓藥物。近年來(lái)，動(dòng)物和臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，替米沙坦不僅能夠有效治療高血壓、保護(hù)靶器官和減輕心室重構(gòu)，還能夠?qū)δX缺血具有良好的抗炎作用，能夠顯著減輕腦梗死體積、腦水腫和繼發(fā)性腦損傷，其機(jī)制多與激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體丫(peroxisomeprolixferator_activatedreceptors，PPARy)有關(guān)。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究證明，PPARY是一個(gè)關(guān)鍵性核轉(zhuǎn)錄因子，與其激動(dòng)劑或者配體結(jié)合后活化，具有抗
4、炎、抗氧化、抗凋亡、神經(jīng)保護(hù)等多重作用。替米沙坦是唯一一種具有活化PPARy功能的ARB類藥物。結(jié)合基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的實(shí)際需要，替米沙坦可能是治療缺血性腦血管病的主要藥物之一，但替米沙坦的作用機(jī)制仍需深入研究。應(yīng)用線栓法建立大鼠永久性局灶腦缺血模型，分別對(duì)炎癥反應(yīng)代表性因子PPAR?、NF．KB、Egr-1和MMP．9，神經(jīng)保護(hù)因子PEDF，和以Claudin一5為代表的血腦屏損傷程度等方面進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，并應(yīng)用PPAR丫激動(dòng)劑替中文摘要米沙坦和PPA腳特異性拈抗劑GW9662進(jìn)行干預(yù)，觀察上述
5、各因子的變化，以及評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺失、腦水腫和梗死體積等。以PPARl,為切入點(diǎn)，深入探討腦缺血后腦損傷機(jī)制及替米沙坦的腦保護(hù)作用機(jī)制。本研究將分三部分對(duì)上述內(nèi)容進(jìn)行探討，各部分內(nèi)容概述如下。第一部分大鼠腦缺血后炎癥反應(yīng)及替米沙坦抗炎作用機(jī)制研究目的：動(dòng)態(tài)觀察PPAR丫、NF．KB、Egr-1和MMP一9等在大鼠腦缺血后的表達(dá)變化，探討替米沙坦的抗炎作用機(jī)制。方法：應(yīng)用Longa等的線栓法建立MCAO大鼠模型，采用成年健康雄性Sprague—Dawley大鼠，體重230g-'--250g。實(shí)驗(yàn)1：
6、將大鼠隨機(jī)分為正常組(Normal)和手術(shù)組(MCAO)，手術(shù)組按照MCAO術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)分為3h、6h、24h、48h、72h5個(gè)亞組。實(shí)驗(yàn)2：將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、溶劑對(duì)照組(Vehicle)、替米沙坦組(Telmisartan)及替米沙坦+GW9662組(Telmisartan+GW9662)。替米沙坦30mg／kg于MCAO手術(shù)前l(fā)h以灌胃方式給予，以防止大鼠麻醉時(shí)嘔吐；假手術(shù)組和對(duì)照組給予等體積的生理鹽水；替米沙坦+GW9662組于MCAO手術(shù)前1h以灌胃方式給予30mg
7、／kg替米沙坦，術(shù)后立即腹腔注射4mg／kgGW9662。將各組大鼠分別于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分后斷頭處死，采用免疫組化、westernblot和qR—TPCR來(lái)觀察腦缺血后PPA腳、NF—KB、Egr．1和MMP．9等mRNA和蛋白水平的動(dòng)態(tài)變化，TTC染色評(píng)價(jià)腦梗死體積，干濕重法評(píng)價(jià)患側(cè)腦水腫。結(jié)果：MCAO組大鼠腦缺血后自24h開(kāi)始，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺失，持續(xù)并進(jìn)行性加重至所觀察到的72h，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸8、趨勢(shì)，而NF．v．B、Egr-1、MMP一9等呈明顯增加趨勢(shì)，且持續(xù)至本研究所觀察到的72h，與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸
