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1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文大鼠局灶性腦缺血后繼發(fā)性腦損傷機制及替米沙坦腦保護作用的研究姓名：祝春華申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張祥建201204中文摘要大鼠局灶性腦缺血后繼發(fā)性腦損傷機制及替米沙坦腦保護作用的研究摘要腦血管病是造成中國居民死亡的第一原因和成年年人殘疾的第一原因，以缺血性腦血管病占80％。研究表明，腦缺血觸發(fā)一系列復(fù)雜的病理級聯(lián)反應(yīng)，包括能量代謝異常、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、自由基生成、興奮性氨基酸的毒性作用等，直接或者間接導(dǎo)致神經(jīng)細胞凋亡／死亡，破壞血腦屏障形成腦水腫，并
2、最終導(dǎo)致神經(jīng)功能缺失。在腦缺血后復(fù)雜的病理損傷機制中，炎癥反應(yīng)是繼發(fā)性腦損傷的最重要原因之一。盡管目前對缺血性腦損傷機制有了比較深入的了解，但仍缺乏有效的治療手段。除了極少數(shù)腦缺血患者在超早期經(jīng)過溶栓治療取得滿意效果外，絕大多數(shù)患者將面臨殘疾甚至死亡的厄運。探討有效阻止缺血性腦損傷機制，保護神經(jīng)細胞的方法，是目前神經(jīng)科學(xué)研究的熱點和難點。盡管已經(jīng)有多種藥物經(jīng)過實驗研究，證明具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，但多數(shù)未能在臨床得到廣泛應(yīng)用，使理論和實踐大大脫節(jié)。替米沙坦是一種臨床廣泛應(yīng)用的血管緊張素受
3、體阻斷劑類(angiotensintype1receptorblocker，ARB)降血壓藥物。近年來，動物和臨床實驗發(fā)現(xiàn)，替米沙坦不僅能夠有效治療高血壓、保護靶器官和減輕心室重構(gòu)，還能夠?qū)δX缺血具有良好的抗炎作用，能夠顯著減輕腦梗死體積、腦水腫和繼發(fā)性腦損傷，其機制多與激活過氧化物酶體增殖物激活受體丫(peroxisomeprolixferator_activatedreceptors，PPARy)有關(guān)。國內(nèi)外多項研究證明，PPARY是一個關(guān)鍵性核轉(zhuǎn)錄因子，與其激動劑或者配體結(jié)合后活化，具有抗
4、炎、抗氧化、抗凋亡、神經(jīng)保護等多重作用。替米沙坦是唯一一種具有活化PPARy功能的ARB類藥物。結(jié)合基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的實際需要，替米沙坦可能是治療缺血性腦血管病的主要藥物之一，但替米沙坦的作用機制仍需深入研究。應(yīng)用線栓法建立大鼠永久性局灶腦缺血模型，分別對炎癥反應(yīng)代表性因子PPAR?、NF．KB、Egr-1和MMP．9，神經(jīng)保護因子PEDF，和以Claudin一5為代表的血腦屏損傷程度等方面進行動態(tài)觀察，并應(yīng)用PPAR丫激動劑替中文摘要米沙坦和PPA腳特異性拈抗劑GW9662進行干預(yù)，觀察上述
5、各因子的變化，以及評價神經(jīng)功能缺失、腦水腫和梗死體積等。以PPARl,為切入點，深入探討腦缺血后腦損傷機制及替米沙坦的腦保護作用機制。本研究將分三部分對上述內(nèi)容進行探討，各部分內(nèi)容概述如下。第一部分大鼠腦缺血后炎癥反應(yīng)及替米沙坦抗炎作用機制研究目的：動態(tài)觀察PPAR丫、NF．KB、Egr-1和MMP一9等在大鼠腦缺血后的表達變化，探討替米沙坦的抗炎作用機制。方法：應(yīng)用Longa等的線栓法建立MCAO大鼠模型，采用成年健康雄性Sprague—Dawley大鼠，體重230g-'--250g。實驗1：
6、將大鼠隨機分為正常組(Normal)和手術(shù)組(MCAO)，手術(shù)組按照MCAO術(shù)后不同時間點分為3h、6h、24h、48h、72h5個亞組。實驗2：將大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、溶劑對照組(Vehicle)、替米沙坦組(Telmisartan)及替米沙坦+GW9662組(Telmisartan+GW9662)。替米沙坦30mg／kg于MCAO手術(shù)前l(fā)h以灌胃方式給予，以防止大鼠麻醉時嘔吐；假手術(shù)組和對照組給予等體積的生理鹽水；替米沙坦+GW9662組于MCAO手術(shù)前1h以灌胃方式給予30mg
7、／kg替米沙坦，術(shù)后立即腹腔注射4mg／kgGW9662。將各組大鼠分別于相應(yīng)時間點進行神經(jīng)功能評分后斷頭處死，采用免疫組化、westernblot和qR—TPCR來觀察腦缺血后PPA腳、NF—KB、Egr．1和MMP．9等mRNA和蛋白水平的動態(tài)變化，TTC染色評價腦梗死體積，干濕重法評價患側(cè)腦水腫。結(jié)果：MCAO組大鼠腦缺血后自24h開始，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺失，持續(xù)并進行性加重至所觀察到的72h，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸8、趨勢，而NF．v．B、Egr-1、MMP一9等呈明顯增加趨勢，且持續(xù)至本研究所觀察到的72h，與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(尸
