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《(果樹學(xué)專業(yè)論文)桃果實(shí)幾個(gè)乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要乙烯是調(diào)控植物生長(zhǎng)發(fā)育重要的氣態(tài)植物激素,其生理作用最終是通過其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑實(shí)現(xiàn)的。肥城桃(Prunuspersica‘Feicheng’)為一地方特色名產(chǎn),是典型的呼吸躍變型果實(shí),對(duì)乙烯作用極為敏感。本實(shí)驗(yàn)從肥城桃果實(shí)中成功克隆了與乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的4個(gè)全長(zhǎng)基因,并在轉(zhuǎn)錄水平上研究了PpEILs和PpEBFl的表達(dá)特性,主要結(jié)果如下:1.根據(jù)植物乙烯轉(zhuǎn)錄因子EIL(EIN3.1ike)家族的氨基酸和核苷酸保守區(qū)序列,設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,采用RT-PCR從成熟桃果實(shí)中分離了兩個(gè)571bp的EIL同源基因片段。隨后運(yùn)用RACE技術(shù),分別擴(kuò)增得到了兩個(gè)包含完整開放閱讀框(
2、ORF)及非編碼區(qū)序列(UTR)的乙烯轉(zhuǎn)錄因子的cDNA,即PpEILl和PpEIL2。它們分別為2086bp和2557bp,編碼蛋白大小均為601個(gè)氨基酸。雖然PpEILl和PpEIL2在氨基酸水平上的同源性僅為42%,但在N末端DNA結(jié)合功能域可高達(dá)86%。聚類分析結(jié)果表明,兩者分別屬于EIN3/EIL家族兩類不同乙烯轉(zhuǎn)錄因子成員。2.在GenBank中獲得的EST序列基礎(chǔ)上,分別通過5’RACE和3’RACE技術(shù)結(jié)合得到全長(zhǎng)為3057bp的PpEBFl,包含l941bp的ORF、248bp的5’UTR和868bp的3’UTR,編碼蛋白的分子量為68.96kD,推測(cè)等電點(diǎn)為7.41。根據(jù)E
3、ST庫中的核苷酸序列,設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果得到了l263bp的PpERFl全長(zhǎng)基因,包含一個(gè)708bp的ORF。序列分析表明,PpERFl與番茄、擬南芥、蘋果和葡萄等在DNA結(jié)合功能域的約58個(gè)氨基酸中,同源性可達(dá)68.4%一loo%,且在該區(qū)域中存在1個(gè)0【.螺旋和3個(gè)反平行鏈構(gòu)成的B.折疊結(jié)構(gòu)。該序列與擬南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性為58.8躺7.5%,屬于同一類ERF家族成員。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明,在花器官及花后40天的幼果中,PpEILs和epESFl表達(dá)量較高,隨著果實(shí)的成熟,表達(dá)量有增高的趨勢(shì);20"C時(shí)。1ul/L外源乙烯明顯促進(jìn)PpEILs和PpEBF
4、l的表達(dá),且隨時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)量增加:而1pl/L1一MCP處理則抑制PpEILs和PpEBFl的表達(dá)。關(guān)鍵詞:桃;乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);基因克??;表達(dá)桃果實(shí)幾個(gè)乙烯信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)J?1■一-loCloninl獸andexpressionoIseveralgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitAbstractEthyleneisagaseousplanthormonethatplaysakeyroleinmanyprocesses.Toexploretherolesofethyleneinplantfuncti
5、ons,itisimportanttoknowthemoleculardissectionofsignaltransduction.Peach(erunuspersica‘Feicheng’)isaspeciallocalproductandtypicallyclimactericfmit,whichissensitivelyaffectedbyethylene.Inthisexperiment,fourgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitwerecloned.Steady-statetranscriptleve
6、lsofPpEILsandPpEBFlwereassessedbyquantitativereal.timePCR.Themainresultsareasfollows:1.TwoeDNAfragments,namedasPpEIL1andPpEIL2,wereisolatedfrommaturepeachfruitbyRT-PCRusingdegenerateprimerscorrespondingtotheEIN3/EILconservedregionsequence,Both5’and3’endsequencesofthetwocDNAswereclonedusingRACEtechni
7、que.PpEIL1andPpEIL2were2086and2557bpinlength,respectively,whilethepredictedopenreadingflames(ore:)oftheircDNAswerebothI803bp.ThesimilaritybetweenPpEIL1andPpEIL2Wasonly42%ataminoacid1evel,but86%between