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《（果樹學(xué)專業(yè)論文）桃果實(shí)幾個(gè)乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要乙烯是調(diào)控植物生長發(fā)育重要的氣態(tài)植物激素，其生理作用最終是通過其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑實(shí)現(xiàn)的。肥城桃(Prunuspersica‘Feicheng’)為一地方特色名產(chǎn)，是典型的呼吸躍變型果實(shí)，對乙烯作用極為敏感。本實(shí)驗(yàn)從肥城桃果實(shí)中成功克隆了與乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的4個(gè)全長基因，并在轉(zhuǎn)錄水平上研究了PpEILs和PpEBFl的表達(dá)特性，主要結(jié)果如下：1．根據(jù)植物乙烯轉(zhuǎn)錄因子EIL(EIN3．1ike)家族的氨基酸和核苷酸保守區(qū)序列，設(shè)計(jì)簡并引物，采用RT-PCR從成熟桃果實(shí)中分離了兩個(gè)571bp的EIL同源基因片段。隨后運(yùn)用RACE技術(shù)，分別擴(kuò)增得到了兩個(gè)包含完整開放閱讀框(
2、ORF)及非編碼區(qū)序列(UTR)的乙烯轉(zhuǎn)錄因子的cDNA，即PpEILl和PpEIL2。它們分別為2086bp和2557bp，編碼蛋白大小均為601個(gè)氨基酸。雖然PpEILl和PpEIL2在氨基酸水平上的同源性僅為42％，但在N末端DNA結(jié)合功能域可高達(dá)86％。聚類分析結(jié)果表明，兩者分別屬于EIN3／EIL家族兩類不同乙烯轉(zhuǎn)錄因子成員。2．在GenBank中獲得的EST序列基礎(chǔ)上，分別通過5’RACE和3’RACE技術(shù)結(jié)合得到全長為3057bp的PpEBFl，包含l941bp的ORF、248bp的5’UTR和868bp的3’UTR，編碼蛋白的分子量為68．96kD，推測等電點(diǎn)為7．41。根據(jù)E
3、ST庫中的核苷酸序列，設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果得到了l263bp的PpERFl全長基因，包含一個(gè)708bp的ORF。序列分析表明，PpERFl與番茄、擬南芥、蘋果和葡萄等在DNA結(jié)合功能域的約58個(gè)氨基酸中，同源性可達(dá)68．4％一loo％，且在該區(qū)域中存在1個(gè)0【．螺旋和3個(gè)反平行鏈構(gòu)成的B．折疊結(jié)構(gòu)。該序列與擬南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性為58．8躺7．5％，屬于同一類ERF家族成員。3．實(shí)時(shí)熒光定量PCR表明，在花器官及花后40天的幼果中，PpEILs和epESFl表達(dá)量較高，隨著果實(shí)的成熟，表達(dá)量有增高的趨勢；20"C時(shí)。1ul／L外源乙烯明顯促進(jìn)PpEILs和PpEBF
4、l的表達(dá)，且隨時(shí)間延長表達(dá)量增加：而1pl／L1一MCP處理則抑制PpEILs和PpEBFl的表達(dá)。關(guān)鍵詞：桃；乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；基因克??；表達(dá)桃果實(shí)幾個(gè)乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆及其表達(dá)J?1■一-loCloninl獸andexpressionoIseveralgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitAbstractEthyleneisagaseousplanthormonethatplaysakeyroleinmanyprocesses．Toexploretherolesofethyleneinplantfuncti
5、ons，itisimportanttoknowthemoleculardissectionofsignaltransduction．Peach(erunuspersica‘Feicheng’)isaspeciallocalproductandtypicallyclimactericfmit，whichissensitivelyaffectedbyethylene．Inthisexperiment,fourgenesencodingethylenesignaltransductionelementsinpeachfruitwerecloned．Steady-statetranscriptleve
6、lsofPpEILsandPpEBFlwereassessedbyquantitativereal．timePCR．Themainresultsareasfollows：1．TwoeDNAfragments，namedasPpEIL1andPpEIL2，wereisolatedfrommaturepeachfruitbyRT-PCRusingdegenerateprimerscorrespondingtotheEIN3／EILconservedregionsequence，Both5’and3’endsequencesofthetwocDNAswereclonedusingRACEtechni
7、que．PpEIL1andPpEIL2were2086and2557bpinlength，respectively,whilethepredictedopenreadingflames(ore：)oftheircDNAswerebothI803bp．ThesimilaritybetweenPpEIL1andPpEIL2Wasonly42％ataminoacid1evel，but86％between
