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《化學(xué)交聯(lián)aβ的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、碩士學(xué)位論文化學(xué)交聯(lián)Ap的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究TheResearchoftheNeurotoxicityandtheInteractionwithInsulinReceptorofChemicalCross-linkedAmyloid一13學(xué)21118073完成日期：2014．5．8大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明作者鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除文中已經(jīng)注明引用內(nèi)容和致謝的地
2、方外，本論文不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含其他已申請(qǐng)學(xué)位或其他用途使用過的成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)相關(guān)法律責(zé)任。學(xué)位論文題目：作者簽名：大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要淀粉樣蛋白p(,知-ny’]oidp，Ap)是阿爾茨海默癥的重要特征分子之一，同時(shí)也被認(rèn)為是該病的主要風(fēng)險(xiǎn)因子。AB單體能夠進(jìn)行自我聚集形成分子量各異的多種聚集體，并通過多種方式損傷神經(jīng)系統(tǒng)，其中寡聚體AD與重要信號(hào)通路的受體相互作用被認(rèn)為是其發(fā)揮神
3、經(jīng)毒性的核心方式?；瘜W(xué)交聯(lián)方法是A13研究中用于制備寡聚體A13的主要手段，但化學(xué)交聯(lián)過程是否對(duì)Ap聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性產(chǎn)生影響尚未得到明確的闡釋：。本論文以傳統(tǒng)的非交聯(lián)方法制備的AB寡聚體為對(duì)照，對(duì)非修飾蛋白的光催化交聯(lián)法(photo．inducedCROSS．1inkingofunmodifiedproteins，PICUP)和Cu2+氧化交聯(lián)法制備的Ap聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性進(jìn)行了研究；另外，已有研究報(bào)道不同的AD寡聚體具有不同的神經(jīng)毒性，而對(duì)于不同的AB寡聚體是否通過不同的途徑產(chǎn)生不同的病理作用還沒有
4、明確的報(bào)道，本論文以神經(jīng)元胰島素受體(insulinreceptor，IR)為研究對(duì)象，研究了PICUP法制備的不同的寡聚體對(duì)胰島素受體分布的影響。研究結(jié)果如下1)，通過控制PICUP和Cu2+氧化交聯(lián)的反應(yīng)條件，獲得了兩種不同方法制備的一定分子量范圍的A6聚集體，并通過透析方法除去了溶液中的交聯(lián)劑。通過tricine．SDS．PAGE檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，不同制備方法獲得的Ap中，Ap單體所占總體比例存在明顯差異，不同分子量大小的Ap寡聚體所占比例略有不同，其中PICUP法制備Ap聚集體的效率最高，非交聯(lián)法獲得AB聚集體
5、的量最低；Zeta電位檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，三種A13溶液的Zeta電位均處于．10～15mV區(qū)間，屬于具有進(jìn)一步聚集趨勢(shì)的非穩(wěn)定狀態(tài)。硫磺素T檢測(cè)表明，Cu2+氧化交聯(lián)Ap具有遠(yuǎn)低于非交聯(lián)Ap和PICUP．Ap的p．片層結(jié)構(gòu)密度，顯示其可能具有不同于其他兩者的神經(jīng)毒性。2)本論文使用上述3種AB對(duì)新生SD大鼠海馬神經(jīng)元進(jìn)行了濃度梯度處理，通過MTT檢測(cè)、流式細(xì)胞術(shù)以及Western印跡法對(duì)神經(jīng)元存活率、不同時(shí)期凋亡率以及關(guān)鍵凋亡蛋白的活化程度的檢測(cè)，比較了不同方法制備的Ap的神經(jīng)毒性。結(jié)果表明在三種Ap中，Cu2+氧化交
6、聯(lián)Ap降低神經(jīng)元存活率的能力最強(qiáng)，能夠最高程度地誘導(dǎo)神經(jīng)元進(jìn)入早期／中晚期凋亡，引起了凋亡蛋白Caspase3活化程度的顯著上調(diào)，并且導(dǎo)致細(xì)胞漿中細(xì)胞色素C含量升高。然而，在Cu2+氧化交聯(lián)AB引起Caspase9活化的過程中，可能存在對(duì)Caspase9上游信號(hào)的調(diào)控而最終體現(xiàn)為和另外兩種Ap相似的Caspase9活性。此外，三種Ap都具有引起T-NOS和CAT酶活上調(diào)的能力，其中Cu2+／I-1202交聯(lián)Ap較強(qiáng)的CAT活力上調(diào)功能表明該交聯(lián)AD具有更復(fù)雜的毒性機(jī)理。3)利用電洗脫回收和有機(jī)溶劑沉淀法，成功分
7、離和富集了2-4聚體A13，分別使用不同寡聚態(tài)的AB進(jìn)行了神經(jīng)元處理，并觀測(cè)了神經(jīng)元IR受到的影響。細(xì)胞免疫熒光試化學(xué)交聯(lián)AB的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究驗(yàn)結(jié)果表明：二聚體AB主要具有誘導(dǎo)IR重新分布的作用，而三聚體和四聚體更傾向于競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合IR并引起IR密度降低。關(guān)鍵詞：淀粉樣蛋白D；化學(xué)交聯(lián)；神經(jīng)毒性；胰島素受體大連理工大學(xué)碩士學(xué)位論文TheResearchoftheNeurotoxicityandtheInteractionwithInsulinReceptorofChemicalCross·li
8、nkedAmyloid—pAbstractAmyloid·p(Ap)isahallmarkofAlzheimer‘Sdisease(AD)，andisconsideredasamajorriskfactorofAD．ADmonomerformsaggregatesofdiversemolecularweightbyself-assembly．TheA13aggregatesimpair
